放射免疫法与酶免疫法在临床检验上的应用

发表时间：2013-11-18T11:33:27.793Z 来源：《医药前沿》2013年30期供稿作者：邓进进[导读] 乙型肝炎是肝炎病毒引起的疾病，其感染途径为不当的注射或输血所至。

邓进进（江苏省仪征市人民医院检验科 211400）【摘要】放射免疫法RIA在生物检验上最常使用I-125做为标定物质，标定乙型肝炎表面抗体，比较放射免疫法与酶免疫法EIA的灵敏度与专一性及各中优缺点。酶免疫法与放射免疫法是临床常使用的免疫化学法。但前者不需使用到放射性物质，所以广泛被使用，酶免疫法中的异相酶免疫法ELISA的测定有很多种，有测定抗原的双抗体夹心法，有测定抗体的间接法。酶免疫分析法EIA优点试剂稳定，且沒有放射性物质的放射危险，缺点是酶免疫使用的介质有毒或会致癌，故放射免疫分析法RIA优点是检体中不具放射性，沒有內在背景干扰，具极高灵敏度（1pg／ml），缺点是试剂不稳定，另有辐射污染，废弃物的善后。【关键词】放射免疫法酶免疫法

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）30-0011-02 乙型肝炎是肝炎病毒引起的疾病，其感染途径为不当的注射或输血所至。乙型肝炎是一种免疫性疾病，当病毒进入人体后，将引发自身免疫反应，造成肝脏的损伤。凡病毒产物(抗原)或宿主对抗病毒的产物(抗体)。即所谓免疫标记，常成为免疫疾病的工具。乙型肝炎有六种免疫标记：表面抗原、核心抗原、e-抗原以及相对的抗体，其中最早出现在血液的为表面抗原。表面抗原虽非病毒本体，但它的存在为病毒繁殖的确证。运用放射免疫分析法(RIA)及酶免疫分析法(EIA)，检测乙型肝炎表面抗体。

1、材料与方法

放射免疫分析法(RIA)中的材料有乙型肝炎表面抗体试珠I—125标示乙型肝炎表面抗体、乙型肝炎表面抗原阳性对照组PC、乙型肝炎表面阴性对照组(不含乙型肝炎标记)NC。酶免疫分析法(EIA)的材料有乙型肝炎表面抗体试盘、乙型肝炎表面抗体过气化酶偶合物、乙型肝炎表面抗原阳性对照组、乙型肝炎表面阴性对照组(不含乙型肝炎标记)、呈色剂。放射免疫分析法(RIA)是将每一试孔中各加入一试珠，分别加200ulNC至3个试孔，200ulPC至2个试孔，室温培育15分钟，合试珠的试孔中各加入100ul的I-125Anti-HBs溶液，40°C培育1小时，清洗试珠，将试珠倒入试管，用r-count测读每一试管1分错，读出CPM值，判定结果。酶免疫分析法(EIA)分别加50ulNC至3个试孔，50ulPC 至2个试孔，检体至1个试孔，每一试孔各加50ul乙型肝炎表面抗体过氧化酶偶合物，37°C培育80分钟，清洗试盘，每一试孔中先加入50ul 呈色剂A﹒再加入呈色剂B，混合均匀。静置室温培育30分钟，各孔加入100ul2NH2S04，于30分钟内以450/650nm测读0D值，并判定结果。

2、结果

酶免疫法(EIA)和放射级免疫分析法(RIA)是依照相同的原理直接测定所结合的抗体(或抗原)的分析方法，只有检测专一性结合所用的方法不同。用RIA检测抗原，须将专一性的抗体先用放射线标定，最常使用的放射线是碘125(1 251)；用EIA检测抗原，则是须以化学的方法将酶连结到抗体上，而未经标记的成份(抗原)则镀在多孔塑料平盘的孔内，它可吸附一定量的任何蛋白质。在非专一性吸附被阻断的情形下，经标记的抗体会与未经标记的抗原结合，而未结合的抗体及其他蛋白质则被洗掉。在RIA中所结合的抗体可直接由镀盘读取，数据的收集非常容易而且可以避免放射性的伤害。商业应用上放射免疫分析法(RIA)采用三明治原理(抗体-抗原-抗体)检验HBsAg检体中的HBsAg，将被试珠中的Anti-HBs抓住，然后I-125Anti-HBs 将接在HBsAg，形成复合物，检体中含有HBsAg 试珠的(Anti-HBs)+检体的(HBsAg)+I-125Anti-HBs,(Anti-HBs)?HBsAg? I-125Anti-HBs，用r-counter测读→高CPM值。检体中不含有HBsAg；试珠的(Anti-HBs) +检体的(无HBsAg)+ I-125Anti-HBs→试珠(Anti-HBs) ,用r-counter测读→低CPM值。经标记的抗免疫球蛋白的抗体也可以用于EIA，以测定结合未标记抗原盘上的未标记抗体，标记过的抗免疫球蛋白抗体做为第二层，应用第二层抗体可以加强讯号，因为每一个未标记的第一层抗体至少可以结合两分子的标记抗体。EIA也可将未标记的抗体镀在平盘内再加入标记的抗原来完成。商业应用上酶免疫分析法(EIA)采用高特异性和高亲和力的单株乙型肝炎表面抗体，做为固相，以纯化抗体与过氧化酶偶合物，做为液相。若检验结果呈阴性，为无乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，若检验结果呈阳性为其确含乙型肝炎表面抗原或乙型肝炎病毒(HBV)。试孔(Anti-HBs)+检体的(HBsAg)+Anti-HBs?HPRO→Anti-HBs?HBsAg?Anti-HBs﹒HPRO三明治复合物；三明治复合物+TMB呈色，以450/650nm测读OD值-OD值小为阴性反应，OD值大为阳性反应。抗原抗体反应的种类具有很多，各种免疫反应原理不同，步骤标准化不一，特异性不一，所以敏感度有著显著差异。

3、讨论

放射免疫分析法(RIA)具有灵敏度高(可测水平10∧-9～10∧-15g)特异性强、精密度和准确度高以及应用广泛等特点，是疾病诊断和医学研究的重要方法，迄今已可用本技术测定体内各种微量生物活性物质，如激素、蛋白质、抗体、免疫球蛋白、微生素和药物。一般来说，放射免疫分析法(RIA)具有极高灵敏度(lpg/ml)，酶免疫分析法(EIA)灵敏度(lug/ml),lpg=10-12,1ug=10-6；但相对的专一性和灵敏度成反比，灵敏度越高，专一性较低；灵敏度低，专一性高，可从表一中看出。酶免疫分析法(EIA)优点试药稳定，且没有放射性物质的辐射危险，缺点是酶免疫使用的介质有毒或会致癌；放射免疫分析法(RIA)优点是检体中不具放射性，没有内在背景干扰，具极高灵敏度(lpg/ml)，缺点是试剂不稳定，另有辐射污染，废弃物的善后。