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正、负离子模式下样本的置换结果图
直肠粪便色谱分析结果
含弘光大 继往开来
样本经UHPLC-Q-TOF MS分析后 得到的典型TIC图谱(如左图), 以L组(无热应激)作为基准,H组 (高度热应激)和M组(中度热应 激)的代谢物在分析的过程中同样 的时刻时有明显的差异,一些代谢 物的含量上调(空心箭头所示), 一些代谢物的含量下调(实心箭头 所示),结果显示热应激显著影响 山羊的直肠代谢物。
0.0157
0.0164 0.0261
Trend ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑ ↑
↑
↑ ↓
H-L
VIP p-value Trend
-
-
-
1.09 0.0926 ↓
1.27 0.0709 ↓
-
-
-
-
-
-
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-
1.30 0.0357 ↑
-
-
-
含弘光大 继往开来
www.swu.edu.cn
N-Acetyl-D-glucosamine 1.38 0.0228 ↓ 1.30 0.02 ↑ 1.57 0.0210 ↓
N-Acetyl-mannosamine 1.03 0.1 ↓ 1.5 0.0959 ↑ 1.54 0.0132 ↑
碳水化合物类 3.alpha.-Mannobiose Maltotriose
热应激对山羊直肠粪便 代谢的影响研究
答辩人:xxx
指导老师:xxx
目录
CONTENT
01 研 究 意 义 02 试 验 设 计
03 测 定 方 法 04 结 果 与 分 析
05 结 论
研究意义
已有研究表明热应激对山羊的行为、生长性能、生产性能等有严重的负面影 响。重庆地区属亚热带季风气候,气候特征为夏季高温闷热,冬季阴冷潮湿,是 典型的高温高湿地区,这种连续性的高温高湿极度容易对山羊产生热应激反应。 研究不同的热应激程度对山羊直肠粪便代谢的影响,可以为如何减少高温和高湿 的环境下的热应激对山羊的机体代谢危害和提高山羊养殖效益提供数据参考。
拟解决的关键问题
利用 UHPLC-Q-TOF MS非靶向代谢组学,研究不同的热应激程度对山羊直肠粪 便代谢是否产生的影响,并且寻找及确认与热应激发生密切相关的功能性代谢物。
试验设计
选取健康、体况相近的大足阉公山羊(公)6只,采用单因子自身对照试验设计
时期 预饲期
处理 天数
7
第一阶段-重度热应激 (H组)
www.swu.edu.cn
差异代谢物的筛选
选择OPLS-DA模型中得到的第一主成分投影重要度(Variable Importance in the Projection, VIP) 大于1.0且t检验(Student’s t-test)小于0.1的代谢物为差异代谢物。通过筛选,共得出33个代谢 标志物(VIP>1.0; P<0.1),主要是有机酸类、氨基酸类、胺类和碳水化合物类等。
0.0195
0.0007 0.006
Trend VIP ↑ 1.39 ↑ 1.27 ↑ 1.56 ↑ 1.47 ↑ 1.15 ↑ 1.25 ↑ 1.48 ↑ 1.28
↑ 1.46
↑ 1.12 ↓ 1.21
M-L p-value 0.0049
0 0.0063 0.0105 0.0546 0.0449 0.0065 0.0466
↑ 1.34 0.0039 ↑ -
-
-
↑ 1.60 0.0001 ↑ -
-
-
↓ 1.34 0.0052 ↓ -
-
-
↓ 1.34 0.0028 ↓ -
-
-
胺类物质
H-L
M-L
H-L
N-Acetyl-D-lactosamine 1.34 0.0374 ↓ 1.13 0.0669 ↑ 1.66 0.0129 ↓
1.65
Lithocholic acid
1.17
Nname,cis-9,10-Epoxystearic acid 1.32
Taurolithocholic acid
1.52
Oleic acid
1.46
Homoveratric acid
1.47
H-L p-value 0.0281 0.0005 0.0939 0.0202 0.0026 0.0019 0.072 0.0089
有机酸类
Metabolite
VIP
1-Methyladenosine
1.42
5-Aminopentanoic acid
1.77
Taurochenodeoxycholate
1.11
Taurocholate
1.71
3b-Hydroxy-5-cholenoic acid
1.78
alpha-hydroxy myristic acid
18-22
88%≤RH≤95%
24h
www.swu.edu.cn
测定方法
样品采用Agilent 1290 Infinity LC超高效液相色谱系统 (UHPLC)HILIC色谱柱进行分离;样品经UHPLC分离后用Triple TOF 5600质谱仪(AB SCIEX)进行质谱分析,分别采用电喷雾 电离(ESI)正离子和负离子模式进行检测。
H-L 1.20 0.0985 1.15 0.0824
M-L ↑ 1.34 0.018 ↑ ↑ 1.21 0.0265 ↑ -
H-L
QC样本谱图比对分 析
正、负离子模式下样本的 PCA 得分图
本次试验的仪器分析系统稳定性较好,试验数据稳定可靠。在试验中L试验组与M试验 组、H试验组之间有显著的差异。
采用OPLS-DA分析
R2=0.975 Q2=-0.118
R2=0.996 Q2=0.0419
正、负离子模式下样本的 OPLS-DA 得分图
15
第二阶段-中度热应激
(M组)
15
第三阶段-轻度热应激 (L组)
15
含弘光大 继往开来
THI
温度℃
湿度(RH) 处理时间/t天
正常室温下养殖,不做处理
24h
88-95
34-37
70%≤RH≤85%
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
12h
77-84
27-30
70%≤RH≤85%
12h
79-85
28-31
75%≤RH≤85%
24h
64-71
差异代谢物的筛选
氨基酸类 Metabolite Pro-Met Pro-Thr Arg-Thr Pro-Ala
H-L VIP p-value 1.32 0.0137 1.23 0.0642 1.58 0.0029 1.47 0.0018
M-L
H-M
Trend VIP p-value Trend VIP p-value Trend