色谱方法建立的一般步骤

离子色谱-质谱法联用技术测量组织 中乙醇酸，2-磷酸乙醇酸的含量
《分析生物化学》 摘要：乙醇酸，2-磷酸乙醇酸 （PG）是二碳一元羧酸，其在 新陈代谢中的作用尚不明确。 除了体液及红细胞中，这两种 物质的浓度鲜被提及。本文采 用IC-MS方法，用来量化组织中 的二者含量。样品制备与分析 可在1h内完成。低浓度的乙醇 酸和PG都可以被检测到。这种 IC-MS的检测方法促进了乙醇酸 及PG在新陈代谢中作用的研究。
选择一根适用的色谱柱
色谱柱选择
固定相
柱的性质
担体
固定液
温度
长度
内径
选择适当的或优化分离操作条件
流动相的流速 流动相的用量
进样时间 进样量
谱图分析[1]


定性分析 根据所得谱图进行分析，在图库中寻找类似谱图， 进行定性分析。 定量分析 根据峰面积等理论值与被测物质含量之间的关系 进行定量计算。常用定量计算方法有如下几种： 归一化法 内标法 内标标准曲线法 外标法
氢火焰离子检测器气相色谱测定水中 的短链脂肪酸及分离系统的选择
被SCI收录
建立氢火焰离子检测器气相色 谱法测定水样中的短链脂肪酸，水样采 用垃圾沥出液和市区废水。优化了分离 系统，进样量，温度等实验条件。在极 性系统（聚乙二醇）和非极性系统（二 甲聚硅氧烷 ）中，2-8个碳原子的脂肪 酸得到了好的分离效果；进样量为2微 升；温度保持80 ◦C30s后以7 ◦C min−1 升温至220。C。日内及日间相对标准偏 差均小于11.7%和12.9%，分别为。线性 范围为0.02Baidu Nhomakorabea~ 5μ 克/升每个分会。定 量限（loqs）低于0.25 mg L−1。垃圾 沥出液研究范围为0.45±0,059 mg L−1 的戊酸到15.2±0.73 mg L−1的乙酸。 城市废水中脂肪酸含量低于定量限。

液相色谱分析注意事项
1、尽量用自己的色谱柱-防止相互污染
2、连接色谱柱时，应注意连接方向，防止反接、 反冲色谱柱。 3、每次实验结束时，应使色谱柱内充满纯有机 溶剂。[5]
[5]Development and validation of the high performance liquid chromatography– ionexclusion method for detection of lactic acid in milk, Maria Patricia Milagres a, Sebastiao Cesar Cardoso Brandao a, Mirella Araujo Magalhaes b,Valeria Paula Rodrigues Minim a, Luis Antonio Minim, Food Chemistry 135 (2012) 1078–1082
用离子排斥高效液相色谱法测定 牛奶中乳酸方法的发展与检测
《食品化学》
现在有关于用离子排斥高效液相色 谱法与紫外联用技术测定牛奶中乳酸的 报道，这种方法有好的灵敏度（相关系 数<0.7%）和精确度（97.6–99.6%）。 在5.0–25.0 mmol L中，线性相关系数 R>0.996,两种物质检出限分别为0.5 和 1.0 mmol L。本实验使用9h发酵后的发 酵牛奶和NaOH中和后的发酵牛奶作为分 析样品。应用杜凯氏考验方差分析后发 现，该方法对两种样品中乳酸分析表现 出不同的灵敏性。因为在参杂了其他物 质之后的牛奶中，仍能检测出牛奶酸度， 因此此方法是实验室中一种有效的质量 控制手段。
色谱的简单分类
液-液色谱法
气相色谱法[2]
液-固色谱法 离子交换色谱法 离子对色谱法 离子色谱法[3]
按照流动相物态分
液相色谱法
空间排阻色谱法
[2]A gas chromatography–mass spectrometry assay to quantify camphor extracted from goat serum, Kyung-Min Leea, Susie Y. Daia,b,∗, Timothy J. Herrmana, Jeffrey M.B. Musserb, Journal of Chromatography B, 905 (2012) 133– 136 [3]Glycolate and 2-phosphoglycolate content of tissues measured by ion chromatography coupled to mass spectrometry，John Knight, Mark Hinsdale, Ross Holmes, Analytical Biochemistry 421 (2012) 121–124
色谱方法建立的一般步骤
12级-分析化学-刘洁
提纲

色谱仪器的结构 色谱建立的一般步骤 分别介绍各步骤具体内容 分别介绍气相，液相色谱流程、检测器及注意 事项
色谱仪器的基本组成
载 气 系 统
进 样 系 统
色 谱 柱
检 测 器
记 录 系 统
色谱方法建立的一般步骤
由于色谱方法的特殊性，其建立的一般 步骤大致如下： 1、根据被分析样品的特性选择适用于 样品分析的一种色谱分析方法。 2、选择一根适用的色谱柱。 3、选择适当的或优化的分离操作条件 4、由获得的色谱图进行定性分析和定 量分析
气相色谱分析技术的注意事项
确定待测样是否符合GC要求
浓度尽可能低：小于10ppm 溶剂沸点尽可能低，尽量不选用丙酮 待测样不能含有水份(特殊柱：水样) 柱温要低于固定液使用温度
液相色谱分析流程示意图
进样口 混合器
泵
色谱柱
检测器
溶剂
液相色谱分析方法检测器的种类
紫外光度检测器 荧光检测器 差示折光检测器 电导检测器
气相色谱分析流程示意图
1 – 载气钢瓶； 2 – 减压阀；3 – 干燥管； 4 – 针形阀；5 – 流量计； 6 – 压力表；7 – 进样器； 9 – 色谱室； 10 – 检测器； 11 – 记录仪； 13 – 废液排出
气相色谱分析方法检测器的种类
热导池检测器 浓度型检测器 电子捕获检测器 氢火焰离子化检测器[3]
气相色谱-质谱联用技术测定从山 羊血清中提取的莰酮
《色谱B》
建立了用气相色谱-质谱联用技术 测定山羊血清中的莰酮的方法。 莰酮和内标物（异松油烯 ）在乙 酸乙酯做分离液的离子液相色谱 中可以看到清晰的分辨峰。实验 中基于峰形，信噪比，补偿值， 再现性等对洗脱和进样体积进行 了优化。该方法的线性相关系数 为R2=0.998，线性范围为0.005– 10.0 g/mL。该试验样品取自喂食 莰酮的山羊血清。
根据被分析样品的特性选择适用 于样品分析的一种色谱分析方法
1、只要在气相色谱仪允许的条件下可以气 化而不分解的物质，都可以用气相色谱法测 定。对部分热不稳定物质，或难以气化的物 质，通过化学衍生化的方法，仍可用气相色 谱法分析。 一般沸点低，<350oC,易挥发，热稳定
2、只要能够制成液体的物质均可使用液相 色谱法
[1]色谱指纹图谱在中药质量控制中的应用,周建良, 齐炼文, 李 萍,色谱, 2008， mar.Vo.l 26 No. 2 153~ 159
色谱指纹图谱在中药质量控制中 的应用������
介绍了色谱指纹图谱在中药质量 控制体系,即中药真实性鉴定(化学指 纹图谱)、有效性评价(谱效学、生物 指纹图谱、代谢指纹图谱)以及安全性 评价方面的应用。目前化学指纹图谱 在中药的真实性鉴定方面已比较成熟; 谱效学、生物指纹图谱和代谢指纹图 谱由于与药效活性相关, 在中药的有 效性评价中已体现出优势; 色谱指纹 图谱在中药的安全性评价方面的应用 也愈来愈受到重视。
质量型检测器
火焰光度检测器
[3]Determination of SCFAs in water using GC-FID. Selection of theseparation system, Anna Banel, Anna Jakimska∗, Marta Wasielewska, Lidia Wolska, Bogdan Zygmunt, Analytica Chimica Acta 716 (2012) 24– 27