丹参脂溶性成分的湿式超微粉碎提取

丹参脂溶性成分的湿式超微粉碎提取

（作者：__________ 单位： ___________ 邮编： ___________ ）

作者：贺建东付廷明郭立玮

【摘要】目的研究超微粉碎技术与传统提取方法对丹参脂溶性成分提取的影响。方法以丹参酮H A为指标，用高效液相法进行分析测定，考察不同提取方式对丹参酮H A提取率的影响，并用正交实验法进一步优选提取条件。结果丹参酮H A超微粉碎提取的最佳工艺为

A3B2C2，即80%乙醇8倍量提取10 min。结论提取时间及乙醇浓度对丹参酮H A的提取率影响较大。

【关键词】丹参丹参酮H A超微粉碎技术高效液相色谱法

丹参系唇形科鼠尾草属植物Salviae miltiorrhizae Bge.的根，始载于《神农本草经》，为活血化淤常用中药，具有祛淤止痛、活血通络、凉血消肿、除烦清心之功效。研究表明，丹参根所含成分主要为水溶性和脂溶性两大类。水溶性成分主要含在丹参根心木质中，代表性成分之一是丹参素，为改善心肌供血的有效成分。脂溶性成分包含在丹参根皮中，具有抑菌、抑制血小板聚集、耐缺氧等药理］1］作用。代表成分主要为丹参酮H A。生产中从丹参药材中提取脂溶性成分时多

采用乙醇回流法，提取时间长，丹参酮H A受热会损失]2],且后续还将提取液采用浓缩、干燥工序，以高温回收溶剂，致使丹参酮H A受热降解。

超微粉碎技术是粉体工程中的一项重要内容，包括对粉体原料的超微粉碎，高精度的分级和表面活性改变等内容。超微粉体技术可将中药材从传统粉碎工艺得到的中心粒径150〜200目的粉末（75 g以上），提高到中心粒径达5〜10 gm以下，在该细度条件下，一般药材细胞的破壁率大于95%。由于粉碎过程中细胞壁一旦被打碎，细胞内水分和油质迁出后可使微粒子表面形成半湿润状态，粒子与粒子之间形成半稳定的粒子团，使中药材中难溶性成分快速高效溶出。本实验探讨超微粉碎技术与传统提取方法对丹参脂溶性成分的影响。

1仪器与试药

Waters515双泵，1478双波长紫外检测器，WDL-95色谱工作站

（大连化学物理研究所生产），湿式微粉机（自制）。丹参酮H A对照品（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号110766-200416 ），丹参药材购于南京市药材公司，经南京中医药大学鉴定教研室吴启南教授鉴定，符合《中国药典》（2005版）有关规定。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1含量测定的方法

2.1.1 色谱条件]3，4] Kromasil C18 （4.6 mm X250 mm ），流

动相为甲醇-水（75 ：5）;流速1.0 ml/min ;检测波长270 nm ;柱温30 C; AUFS=0.5。

222对照品的制备精密称取干燥至恒重的丹参酮H A对照品4.61 mg，置于10 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 ml置于10 ml容量瓶内，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得46.1 血/ml丹参酮H A对照品溶液。

2.2.3线性关系考察精密吸取丹参对照品溶液2, 4，6，8，10，12讥注入进样以对照品浓度X为横坐标，以峰面积丫为纵坐标进行线性回归，回归方程为：Y=445.1X-30.8，r=0.999 3，结果表明峰面积（Y）与丹参酮H A浓度（X）在0.046 1〜0.553 2 ⑷/ml范围内呈良好的线性关系。

2.2.4精密度实验考察分别精密吸取同一供试品溶液5卩I，连续进样5次，结果所得丹参酮H A含量的RSD为1.64%。

2.2.5重复性考察取同一份丹参药材5份，进行平行提取测定，求

得丹参酮H A含量的RSD=2.45%。

2.2.6加样回收率实验精密称取已测知丹参酮H A的样品及一定量的对照品溶液，制备成高、中、低浓度的5份样品，按前述条件进行含量测定，平均加样回收率为99.8%，RSD为1.52%。

2.2.7提取方法的选择取丹参粉末5 g，精密称定，用70%乙醇作为溶

剂，选取不同提取方法进行提取。滤过，精密吸取 1 ml，置于25 ml容量瓶中，并用70%乙醇定容至刻度，制成供试品液。另取100 g 丹参块状药材，加1 000 ml 70%乙醇，放入超微粉碎机中，粉碎5 min，倒出，滤过，取样方法同前。表1提取方法选择实验结果

228正交实验表1的结果表明超微粉碎提取率较高，因此，取丹参100g，采用3因素3水平正交实验对乙醇浓度，乙醇量和提取时间进行实验研究。取一定量的溶液，离心，精密吸取 1 min入25 ml 容量瓶中，70%乙醇定容至刻度，用HPLC法测定丹参酮H A的含量，计算其提取率。因素水平见表2。正交设计见表3。表2因素水平表3正交实验L9

2.2.9方差分析对正交实验所得结果作直观分析和方差分析，以判断各因素对提取效果的影响程度，筛选出在该实验条件下最优的提取条件。方差分析结果见表4。表4丹参酮H A方差分析

3讨论

由方法学研究表明，用HPLC法测定丹参中丹参酮H A的准确度和灵敏度较高，实验操作相对简单，适用于本研究。表1可以看出，回流提取法提取时间较长，回流 3 h与2 h相比，丹参酮H A含量反而降低，这是由于丹参酮H A对光热不稳定，容易降解。超微粉碎提取10 min已基本完全，1 h提取率略有下降，可能是长时间振动产生瞬时高温导致的，超微粉碎机为全封闭装置，不受光照的影响，对丹参酮H A等光敏性药物非常适合。

由表3实验结果可见，RC >RA > RB，由此可知因子C是影响丹参酮H A提取率的关键，因子A则处于次要地位。结合K值愈大愈好，因此丹参酮H A超微粉碎提取的最佳工艺为A3B2C2 ，即80%乙醇8 倍量提取10 min。其中提取时间对提取效果的影响最为显著（P V 0.05），乙醇浓度对提取效果影响也较大，但没有显著影响（P>0.05），生产中考虑到成本，一般选用70%的醇提取。

【参考文献】

:1］付辛芳，刘晓红.丹参的药理作用与临床应用研究进展

:J］.中国药业,2006,15(1):76.

［2］杨广德,张继业,张莉，等.丹参中丹参酮H A和隐丹参酮

的提取方法研究］J］.药物分析杂志,2006,26(12):1807.

:3］国家药典委员会.中国药典，1部S］.北京：化学工业出版社，2005: 52.

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