血友病研究进展[最新]

（二）间接基因诊断
利用致病基因内外的限制性片段长度多态性 （ RFLP ）作为特异分子遗传标志物，通过家系成 员间的连锁关系确定血友病基因的遗传情况，进行 DNA 多 态 性 分 析 的 遗 传 学 诊 断 (RFLP ， VNTR ， STR 等方法 ) ，联合多个 RFLP ，诊断率达可达 99% 。
血友病治疗进展
70年代-有效替代治疗，致残率与死亡率 ，寿命 由平均10岁接近正常。 80年代-病毒灭活技术改进，替代治疗安全性，感 染病毒性肝炎，爱滋病 。 90 年代 - 重组凝血因子广泛应用，提高疗效；避免 抗体产生与易发生病毒感染的副作用。基因治疗在 动物试验中获得成功 , 在人类的临床初步研究成果 为血友病的根治带来曙光。 如何进一步降低血友病患者的死亡率，致残率，出 生率，提高患者生存质量是目前工作的重要任务。

第一代（全长FVIII）：人体白蛋白为稳定剂。
第二代（BDD）：蔗糖为稳定剂，FVIII无B区，但仍 保留其活性，无免疫活性，更安全，有效。


第三代：鼠单抗，不含人和动物蛋白。
转基因方法生产的人血浆制品的产量将大幅度提高， 有望满足全世界血友病患者的需要。
（三）猪FVIII浓缩物
抑制物对猪 FⅧ的亲和性比对人 FⅧ亲和性差，不易 与人FⅧ抗体发生交叉反应 ,，用于高反应型抑制物且严 重出血患者的治疗。约30%产生抗猪FⅧ抗体，造成耐药。
开始足量，迅速降低抗体，抗体滴度<5BU：50u/kg； 5-30BU：75-100u/kg；>30U：100-150u/kg 。
重组人 - 猪 FⅧ混合物利用抗原性较弱的无 B 区的猪 FVIII 序列替代人 FVIII A2，活化的肽 -A3和C2 序列，以 降低免疫原性与抗原性，可望成为治疗抑制物的新制剂。
三．替代治疗
目前最有效的治疗手段。主张尽早治疗，将凝 血因子提高到止血水平，避免出血并发征，防止功 能丧失。

（一）人 FVIII 浓缩物：近 15 年随着病毒灭活技术 的改进（干热法-HIV，有机溶剂加表面活性剂方 法-HCV，二步病毒灭活法-HAV），血浆筛选的 规范化（PCR），血制品的安全性大大提高，血源 传播性疾病如肝炎，爱滋病发生率明显降低。
血友病研究的进展
安徽省立医院血液科 吴竞生 血友病是由于遗传性凝血因子VIII（FVIII） 和IX（FIX）基因缺陷，造成血浆FVIII和FIX含量 不足或功能缺陷，引起的一组终生出血的凝血障 碍性疾病，包括血友病A（FVIII缺乏）和血友病B （FIX缺乏），属X性联隐性遗传疾病。 西方国家血友病患病率为5-10/10万人口， 我国2.73/10万人口。
二．基因诊断

（一）直接基因诊断： 确定致病基因；携带者检出和产前诊断。 采用PCR，DGGE，SSCP，DNA测序等方法直 接测定致病基因的缺陷。FVIII 22内含子倒位分析 可作为重型 HA 的筛选试，是目前唯一用于临床 诊断的直接基因检测方法。

FVIII 22 内含子倒位和其它一些基因突变常伴 有抑制物发生，因此有助于预测抑制物的产生。
（四）FVIII旁路制剂-不依赖FVIII/FIX

绕开内源性凝血途径，通过补充外源或共同凝血 途径中所需的凝血因子同样可达到凝血终点。 （ 1 ）凝血酶原复合物 (PCC) ：含 FII ， FIX ， FX 和 FVII ， 治 疗 HB ； FVIII 抑 制 物 出 血 的 治 疗 ， 75125U/kg/次，有效率50-60%。可引起血栓。 （2）激活的凝血酶原复合物(APCC)：用于产生抑 制物的血友病A出血的治疗，有效率40%-60%。 5075U/kg，q8-12h。血栓发生率为1%-2%，反复大量 使用，肝脏病，抗凝血酶缺乏时易发生，如用3-4次 无效，不应再用。

一．发病机制的研究

FVIII 基因定位于 Xq28 ，全长186kb ，由26个外 显子和 25 个内含子组成。已发现约 300 多种基因突 变，基因型与表型密切相关。点突变，小的基因缺 失引起轻度 FVIII 缺乏。终止密码子，大的基因缺 失，插入，移位，无义突变往往引起严重的 FVIII 缺乏和临床表型。 FVIII 22 内含子倒位突变引起 FVIII 严重缺乏是 45% 的重型血友病 A 的分子发病 机制。最近在 1% 的重型血友病 A 中还发现 FVIII 内 含子1倒位突变。
RFLP分析的局限性：须具有先证者的标本；母 亲系该多态位点的杂合子，联合多个RFLP。
（三）高危胎儿产前诊断
妊9-12周：绒毛膜活检获取胎儿DNA 。
妊12-16周：养水穿刺。
胚胎植入前：早期胚胎（8个细胞），通过DNA基因型 和遗传表型确定胎儿性别，是否为血友病或携带者。 妊18-20周：胎儿镜下取脐静脉血，测定VIII:C/FVIII:Ag。 流产危险（约0.5%-1%）。 早期，无创性产前诊断：FACS测定母体静脉血中的胎 儿特异性单克隆抗体以确定胎儿性别。

1） 重组激活的FVIIa (rVIIa)

直接或与受损部位的TF结合成复合物,与暴露在 激活的血小板表面带负电荷的磷脂结合后，直接激 活FXa；还可激活FIXFIXa，促进凝血酶形成， 使纤维蛋白原纤维蛋白，达到局部止血。这种酶 促反应局限在细胞表面，可能降低了全身凝血活化 和血栓并发症的危险。推荐剂量为90ug-120ugkg-1， 静脉注射，q2-3h, 重复2-4次，有效率80%-90%，安 全。注射局部可形成血栓性静脉炎，极少发生血栓 与DIC。主要用于抑制物，手术出血的治疗。
超高纯度：含 FVIII 3000U/mg ，利用离子交换 层析或单克隆抗体技术制备，不含VWF， 用于FVIII抑制物 (中高滴度, 10-30BU) 的治疗。
（二）重组FVIII浓缩物（rFVIII）
基因克隆技术表达，生物活性，半寿期与血浆 FVIII 相似，安全，无病毒污染。价格昂贵，也可产生抗体。 加拿大与爱尔兰几乎所有 HA，美国70%重型HA采用。 主要用于重型血友病A和抑制物的治疗。
FVIII浓缩物

中纯度：含FVIII 1-3U/mg，每1U/kg可使血浆 FVIII 水平提高 2% ，含 VWF ，也可用于 VWD 。体 内半寿期为8-12小时。副作用：病毒感染，抗FVIII 抑制物产生。


高浓度：含FVIII 50-200U/mg，利用层析技术 制备，不含VWF。