免疫比浊分析
免疫比浊法反应曲线
免疫比浊法反应曲线免疫比浊法是一种常见的生物化学分析技术，用于测定生物样品中的特定分子的含量。
该方法的原理是利用抗体与目标分子结合形成免疫复合物，进而使溶液的浊度发生变化。
通过测量溶液的光密度或浊度的变化，可以间接地确定目标分子的浓度。
本文将介绍免疫比浊法的基本原理、反应曲线的构成和解读，并对该方法的优缺点进行讨论。
免疫比浊法的基本原理是将待测样品与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
为了便于检测和测量，通常会在抗体上标记一种可以产生浊度变化的物质，例如胶体金或聚合物颗粒。
这种标记物的加入使得免疫复合物具有一定的粒径，在溶液中悬浮形成胶体溶液。
当抗原与抗体结合时，免疫复合物的粒径会发生变化，溶液的浊度发生变化。
免疫比浊法的反应曲线是通过测量不同抗原浓度下溶液的浊度变化来构建的。
一般来说，会选择一种特定的抗原浓度（通常为0），将其与抗体结合并测量浊度，作为实验的背景浊度。
接下来，将其他抗原浓度的样品与相同的抗体结合，并测量其浊度。
通过比较实验样品与背景浊度之间的差异，我们可以得到由于抗原-抗体反应引起的浊度变化。
通常，随着抗原浓度的增加，浊度的变化也会增加。
根据反应曲线的形状，我们可以推断出抗原浓度与浊度变化之间的关系。
在解读反应曲线时，一般会根据曲线的斜率、线性范围和最大响应值等因素进行分析。
斜率表示了抗原浓度与浊度变化之间的敏感性，斜率较大的曲线说明免疫比浊法对抗原的测量较为敏感。
线性范围则表示了抗原浓度与浊度变化之间的线性关系，线性范围较宽的曲线通常具有更高的测量范围。
最大响应值表示了溶液浊度的最大变化幅度，从而可以评估免疫比浊法的灵敏度。
免疫比浊法作为一种常用的生物化学分析技术具有多种优点。
首先，相比于其他分析方法，免疫比浊法操作简单、快速，采集样品的成本较低。
其次，免疫比浊法具有较高的专一性和选择性，可以准确识别目标分子并排除其他干扰物质的影响。
此外，免疫比浊法还可以进行高通量分析，适用于大规模样品测定。
免疫比浊分析
操作方法
1.生理盐水稀释待测样本和标准液（1：10）？ 生理盐水稀释待测样本和标准液（ ： ）？ 生理盐水稀释待测样本和标准液 2.按下表操作 2.按下表操作
加入物 缓冲液 生理盐水
标准品（稀释后？） 标准品（稀释后？） 待测样本 稀释后？） （稀释后？）
空白管（µl) 标准管（µl) 样品管（µl) 2250 30 —— —— 2250 —— 30 —— 2250 —— —— 30
免疫比浊分析
目的：掌握免疫透射比浊的原理、 目的：掌握免疫透射比浊的原理、基本操 作方法及其在临床上的应用。 作方法及其在临床上的应用。
Байду номын сангаас理
抗原浓度与浊度的关系： 抗原浓度与浊度的关系：
C
c0
∆ A0
∆A
试剂与器材
1.待检人血清 待检人血清 2.人IgG标准液（ 6g/L 、12g/L、20g/L、 标准液（ 人 标准液 、 、 30g/L） ） 3.羊抗人 羊抗人IgG诊断血清 羊抗人 诊断血清 4.缓冲液 含PEG) 缓冲液(含 缓冲液 5.加样器、试管、水浴箱、分光光度计等 加样器、 加样器 试管、水浴箱、
混匀， ℃ 空白管调零， 混匀，37℃5min,600nm,空白管调零，读取各管吸 空白管调零 光度值A 光度值 1 750 750 750 抗IgG 混匀， ℃孵育5min后,在波长为 在波长为600nm处测定 以 处测定,以 混匀，37℃孵育 后 在波长为 处测定 空白管调零，读取各管吸光度值A 空白管调零，读取各管吸光度值 2，ΔA=A2-A1
结果计算
以标准品各管的ΔA为横坐标，以对应标准 以标准品各管的Δ 为横坐标， 品浓度为纵坐标，绘制标准曲线。 品浓度为纵坐标，绘制标准曲线。依据样 品管的Δ 在标准曲线上查出待测浓度。 品管的ΔA在标准曲线上查出待测浓度。
自动化分析-(免疫比浊)
自动化免疫比浊
➢免疫比浊分析技术发展
两测定Biblioteka 原抗体形成后的阶段 个 测定抗原抗体结合的峰值
散射(终点)比浊
阶
段
速率散射比浊
散射比浊法:
当一束光
在光源的光路方向（50-960）
免 疫 比 浊
线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个
角的方向上测量透射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
法
因素的影
➢对抗原过量进行阈值限定 先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
三、速率散射比浊分析
三、速率散射比浊分析 （一）基本原理
— 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。
— 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。
平光线
散射光θ
透射光
检测器 检测器
光源 透镜 滤光片
散射比浊、透射比浊光路图
实验要求（了解）
❖ 溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm) ❖ 溶液中形成的复合物分子要足够多 ❖ 控制抗原抗体反应的温度和时间 ❖ 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间 ❖ 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量 ❖ 将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)
Rayleigh原理：即散射光的强度与复合物的量 呈正比，与散射光的夹角呈正比，与波长呈反 比。
在散射比浊中，增加抗原-抗体复合物的体积， 减小入射光的波长，扩大散射光夹角等因素， 均可增加检测的敏感度。
（二）反应物含量与散射浊度
Heidelberger曲线
《免疫比浊分析》课件
案例三
总结词
辅助诊断、判断病情
详细描述
自身免疫性疾病是一类复杂的疾病，免疫比 浊分析可以检测出自身抗体，辅助医生进行 诊断和判断病情。通过检测自身抗体水平， 有助于了解疾病的活动度和治疗效果。
THANKS
感谢观看
06
案例分享：免疫比浊分析在疾病 诊断中的应用
案例一
总结词
准确、快速、敏感
详细描述
免疫比浊分析在乙肝病毒检测中表现出高准确性和高敏感性，能够快速检测出乙肝病毒 的抗原和抗体，为乙肝的诊断和治疗提供了有力支持。
案例二
总结词
早期发现、监测病情
VS
详细描述
免疫比浊分析用于检测肿瘤标志物，有助 于肿瘤的早期发现和病情监测。通过定期 检测肿瘤标志物水平，可以及时发现肿瘤 复发或转移，为制定治疗方案提供依据。
结果解读
根据实验结果，结合专业知识，对结果进行解读 和解释，为临床诊断和治疗提供依据。
03
免疫比浊分析的仪器与试剂
仪器介绍
仪器类型
介绍免疫比浊分析中常用的仪器 类型，如分光光度计、全自动生 化分析仪等。
工作原理
阐述仪器的工作原理，如光线通 过溶液时发生散射、吸收等现象 ，用于测量物质浓度。
仪器参数
研究进展与展望
• 自动化程度提高：仪器设备的自 动化程度不断提高，减少了人为 误差和操作时间。
研究进展与展望
标准化和规范化
建立统一的检测标准和方法，提高不同仪器 和试剂间的可比性。
智能化发展
结合人工智能、大数据等技术，实现检测结 果的自动分析和解读。
应用拓展
拓展免疫比浊分析在临床诊断、生物医药等 领域的应用范围。
实验注意事项
仪器维护
d二聚体 免疫比浊法
d二聚体免疫比浊法
D二聚体是一种蛋白质，通常被用作血栓形成和血栓溶解的生物标志物。
在免疫比浊法中，D二聚体被用来检测血液中的D二聚体水平，以帮助诊断和监测血栓性疾病。
免疫比浊法是一种常用的生化分析技术，用于检测体液中特定蛋白质或其他生物分子的浓度。
在这种方法中，样品中的目标分子与特定的抗体结合，形成免疫复合物。
随后，通过测量免疫复合物的光学密度来确定目标分子的浓度。
在血栓性疾病的诊断中，D二聚体的浓度可以帮助医生判断患者是否存在血栓形成或血栓溶解的情况。
高水平的D二聚体通常与血栓形成有关，因此免疫比浊法可以作为一种快速、准确的检测方法，有助于及早发现和治疗血栓性疾病。
除了在临床诊断中的应用，D二聚体的检测也在科研领域中具有重要意义。
科研人员可以利用免疫比浊法来研究D二聚体在不同疾病状态下的变化，以及探索其在血栓形成和溶解过程中的作用机制，为相关疾病的治疗和预防提供更深入的了解。
总的来说，D二聚体免疫比浊法在临床诊断和科研领域都具有重要的应用意义，能够为血栓性疾病的早期诊断和研究提供有力支持。
免疫比浊检验技术原理
自动化检测
免疫比浊检验技术可以与自动化仪器配合使用， 提高检测效率和准确性。
免疫比浊检验技术的原理
在免疫比浊检验技术中，检测物质与特异性抗体结合形成免疫复合物，这些 复合物会在溶液中形成可见的浑浊度，浑浊度与物质浓度呈正相关。
免疫比浊检验技术的步骤
3
样本准备要求高
样本的预处理对测量结果有一定影响，样本准备要求较高。
免疫比浊检验技术的未来发展方向
未来，免疫比浊检验技术有望进一步发展，结合新的成像和数据处理技术，实现更高的灵敏度和准确度，以满 足更多领域的需求。
在药物研发过程中，可以 用于评估药效和药代动力 学。
3 环境监测
用于检测环境中的毒性物 质，保护人类健康和环境 安全。
免疫比浊检验技术的优点
准确度高
相对传统的比色法和酶联免疫吸附法，免疫比浊检 验技术具有更高的准确度。
快速得出结果
免疫比浊检验技术通常只需要几分钟到几小时，可 以得到快速的检测结果。
免疫比浊检验技术原理
免疫比浊检验技术是一种基于光学原理的生化分析方法，通过测量溶液中悬 浮颗粒的浑浊度来确定其对应的分析物浓度。
免疫比浊检验技术的定义
快速、灵敏
通过相对简单的操作流程，可以快速检测样本 中微量物质的浓度。
数量测定
可以准确测定血液、尿液、唾液等生物样本中 的特定分析物的浓度。
广泛应用
1
样本预处理
将待测样本进行预处理，如离心、稀释等，以提高结果的准确性。
2
免疫反应
将样本与特异性抗体一起反应，允许免疫复合物形成。
3
测量浑浊度
利用光学仪器测量样品溶液的浑浊度，得到测量结果。
免疫学实验 免疫比浊(免疫球蛋白的测定)
3 免疫胶乳比浊法
原理
选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗 粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则 发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之 内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则 使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝 集成正比，与抗原量成正比。
（a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线； （b）结合后，则形成光线衰减
2. 海德堡（heidelberger）曲线理 论
2 抗体的质量
（1）特异性高 （2）效价高 （3）亲和力高 （4）抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）
4 增浊剂的使用
• PEG、tween-20等非离子型亲水 剂
• 作用：消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层，促进抗原、抗体分子 靠近，结合形成大分子复合物。
（二）类型
1. 透射免疫比浊法 2. 散射免疫比浊法 3. 免疫胶乳比浊法
1 透射免疫比浊法
原理：
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复 合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减 少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线 吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物 的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量 成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出 待检抗原含量。
•
样本管吸光度
• 浓度＝————————×校准液浓度（g/L）
•
校管吸光度
• 结果及讨论
– 检测报告 – 检测意义
实验二、免疫浊度测定 ——免疫球蛋白检测
实验步骤见说明书 IgG9.77g/L IgA1.72g/L IgM1.37g/L
沉淀反应
微生物与免疫教研室
免疫比浊法原理
免疫比浊法原理
免疫比浊法是一种常用的实验方法，用于测定物质的浓度。
其原理基于免疫学中的抗原-抗体反应。
在免疫比浊法中，首先需要准备一个已知抗原浓度的溶液作为标准溶液。
然后，将待测抗原溶液与相应的抗体溶液混合，使抗原与抗体发生特异性结合。
接着，加入一种适当的染色剂，使得结合后的抗原-抗体复合物形成可见的沉淀。
测定过程中，通过测量混合液的比浊度，即溶液中悬浮颗粒的密度与大小，可以确定抗原的浓度。
比浊度与溶液中悬浮颗粒的聚集程度成正比，浓度越高，颗粒越多，聚集程度越大。
因此，比浊度的增加反映了抗原浓度的增加。
为了确保测定结果的准确性，通常需要进行空白对照实验。
空白样品中不添加抗原，但同样进行抗体结合和染色剂反应，以消除其他非特异性反应的干扰。
免疫比浊法在生物医学领域广泛应用于疾病诊断、药物监测和研究等方面。
由于其简便、快速、灵敏度高等优点，成为了免疫学研究中不可或缺的重要工具之一。
实验测试方法免疫比浊法原理
实验测试方法免疫比浊法原理免疫比浊法（immunoturbidimetry）是一种常用的实验测试方法，用于测定血清或尿液中特定分析物质的浓度。
它基于免疫学原理，通过测量可见光的散射程度来获得目标物质的浓度信息。
在实验中，样品中的目标物质与专门设计的抗原抗体反应，形成可见性沉淀物，从而引起溶液的浑浊程度的变化。
免疫比浊法的原理可以概括为以下几个步骤：1.抗原抗体反应：在实验开始前，需要将抗原抗体组分预先混合。
抗原可以是目标物质的衍生物或合成物，而抗体是特异性识别和结合抗原的蛋白质。
2.沉淀形成：向样品中加入混合的抗原抗体溶液，使其与样品中的目标物质相互作用。
当目标物质存在于样品中时，抗体会识别并与其结合，形成可见性沉淀物。
3.光散射测量：实验中使用的光散射测量器可以测量光线通过沉淀物混浊的溶液时的散射程度。
目标物质的浓度越高，形成的沉淀物越多，溶液的浑浊程度越高，从而引起更强的散射。
4.标准曲线计算：为了准确测量目标物质的浓度，需要根据已知浓度的标准品制备一条标准曲线。
标准品的浓度范围一般从低浓度到高浓度逐步增加。
通过测量标准品和待测样品的散射程度，并使用标准曲线进行外推和内推，可以得出待测样品中目标物质的浓度。
免疫比浊法的优点包括操作简单、结果快速、成本较低和高灵敏度。
然而，它也存在一些限制和注意事项。
由于光散射测量主要基于理论计算，因此需要确保实验中的测量条件如温度、光源强度和检测器的响应都是稳定和准确的。
另外，免疫比浊法在样品中可能存在其他干扰物质时可能会失去灵敏度和特异性。
因此，在进行免疫比浊法实验时，需要进行一系列的控制实验来检测和排除干扰因素。
除了免疫比浊法，还有其他一些常用的免疫学方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫分析（RIA）。
这些方法在分析物质浓度的测量范围、特异性和精确度方面可能略有不同。
因此，在选择适当的实验方法时，需要考虑样品性质、目标物质的特征和实验室的设备和技术条件。
免疫比浊法和免疫投射比浊法(修改版)
免疫比浊法和免疫投射比浊法1.定义：（1）免疫比浊法：在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成抗原抗体复合物，用浊度计测量反应液体的浊度，并由此推算样品中的抗原含量。
（2）免疫投射比浊法：当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。
一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。
2.原理（1）免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。
其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。
当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。
通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。
（2）免疫透射比浊法是抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。
当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。
免疫复合物量越多，光线吸收越多。
光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。
利用比浊计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。
本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。
3.关系4．免疫比浊法适用的仪器紫外可见分光光度计全自动生化仪全自动生化仪常见的检测方法终点法连续检测法比浊法均相酶免疫分析。
散射免疫比浊法检测的原理
散射免疫比浊法检测的原理
散射免疫比浊法是一种常用的免疫分析方法，主要用于检测样品中的抗原-抗体反应。
该方法利用散射光检测抗原-抗体复合物的形成，并通过免疫比浊定量分析来测定抗原的浓度。
下面将详细介绍散射免疫比浊法检测的原理。
一、抗原-抗体反应
散射免疫比浊法的基础是抗原-抗体反应。
抗原和抗体是两种特异性结合的蛋白质，抗原-抗体反应具有高度特异性和可逆性。
当抗原和抗体结合后，会形成抗原-抗体复合物。
这种复合物的大小和形状与单个抗原或抗体不同，因此可以通过散射光检测到。
二、散射光检测
散射光检测是一种利用光的散射特性来测量溶液中颗粒大小和分布的方法。
当光线通过溶液时，遇到颗粒物会散射，散射光的强度和方向与颗粒的大小和形状有关。
散射免疫比浊法中，当抗原-抗体复合物形成时，复合物的大小和形状与单个抗原或抗体不同，因此散射光的强度和方向也会发生变化。
通过测量散射光的强度和方向，可以测定抗原-抗体复合物的浓度。
三、免疫比浊定量分析
免疫比浊定量分析是一种利用抗原-抗体反应来测定抗原浓度的方法。
在散射免疫比浊法中，抗原-抗体反应会导致溶液中颗粒大小的改变，从而影响散射光的强度和方向。
通过测量散射光的强度，可以测定抗原-抗体复合物的浓度。
由于抗原的浓度与抗原-抗体复合物的浓度成正比，因此可以通过测定复合物的浓度来测定抗原的浓度。
总之，散射免疫比浊法是一种利用抗原-抗体反应、散射光检测和免疫比浊定量分析来测定样品中抗原浓度的免疫分析方法。
该方法具有快速、灵敏度高、特异性好等优点，被广泛应用于临床诊断、生物分析、环境监测等领域。
自动化分析 (免疫比浊)
自动化分析 (免疫比浊)自动化分析 (免疫比浊)一、引言免疫比浊是一种自动化分析方法，通过测量免疫反应中形成的免疫复合物的浊度来检测样品中特定抗原或抗体的存在或浓度。
本文档旨在提供关于自动化分析 (免疫比浊)的详细信息和操作指南。
二、背景1. 免疫比浊的原理：免疫比浊基于免疫反应导致的免疫复合物形成的特性，即抗原和抗体相互结合产生可见的浊度。
测量这种浊度可以提供关于抗原或抗体的定量信息。
2. 仪器设备：免疫比浊分析通常使用细菌二联体仪器或其他具有浊度测量功能的仪器进行测量。
3. 样品处理：样品在进行免疫比浊分析之前需要进行适当的处理，如稀释、去除干扰物质等。
三、方法1. 样品准备：根据需要的抗原或抗体浓度范围，选取适当的稀释倍数来稀释样品。
确保样品中不含有干扰物质。
2. 试剂准备：准备好所需的抗体或抗原溶液，并按照说明书中的指导来配制试剂。
3. 仪器操作：将稀释后的样品和配制好的试剂加入到测量池中，按照仪器操作指南进行测量。
4. 数据分析：根据仪器的测量结果，结合相应的标准曲线或计算方法，计算出样品中抗原或抗体的浓度。
四、注意事项1. 严格按照操作指南进行操作，避免出现误差；2. 样品稀释倍数要根据实际情况选择，确保在仪器的测量范围内；3. 遵循试剂的储存和使用要求，确保试剂的活性；4. 仪器的保养和校准要定期进行，以保证数据的准确性。
五、附件本文档涉及的附件详见附件清单。
六、法律名词及注释1. 免疫反应：免疫系统对抗原的特异性应答，包括抗体的和细胞免疫反应等。
2. 免疫复合物：抗原和抗体结合形成的复合物，通常可导致可视的浊度。
3. 抗原：能够诱导免疫反应的物质，通常为细菌、病毒、蛋白质等。
4. 抗体：免疫系统产生的一种特异性蛋白质，能够与特定的抗原结合并参与免疫反应。
《免疫比浊分析》课件
免疫比浊试剂的制备
2
便进行免疫比浊分析实验。
根据实验需求，制备相应的免疫比浊试
剂，确保其质量和稳定性。
3
试管法免疫比浊分析的步骤
按照一定的程序和条件，在试管中进行Βιβλιοθήκη 微量比浊仪法免疫比浊分析的步
4
免疫比浊分析实验。
骤
使用微量比浊仪进行免疫比浊分析，准 确测定样品的蛋白质含量。
3. 数据分析
- 免疫比浊试剂的标准曲线 - 样品测定的结果计算 - 数据分析的示例
《免疫比浊分析》PPT课 件
免疫比浊分析是一种常用的实验方法，用于测定血液或生化样品中的特定蛋 白质含量。本课件将介绍免疫比浊分析的概述、实验步骤、数据分析、实验 注意事项、结论与展望等内容。
1. 概述
- 免疫比浊分析简介 - 免疫比浊分析的应用领域
2. 实验步骤
1
样品和抗原的制备
准备样品和抗原的浓度合适的溶液，以
4. 实验注意事项
样品处理的注意事项
保证样品质量和纯度，避免 样品污染或降解。
免疫比浊试剂的保存和 使用
妥善保存免疫比浊试剂，避 免受到温度、光照等因素的 影响。
实验过程中的注意事项
注意操作规范，避免误差的 产生。
5. 结论与展望
- 结论总结 - 免疫比浊分析的发展前景
6. 参考文献
- 相关研究文献 - 参考书目
胶体金颗粒免疫比浊法
胶体金颗粒免疫比浊法
胶体金颗粒免疫比浊法是一种常用的生物化学分析方法，用于检测和测定溶液中的抗原或抗体含量。
本文将介绍胶体金颗粒免疫比浊法的原理、应用和发展历程。
一、胶体金颗粒免疫比浊法的原理
胶体金颗粒免疫比浊法是基于免疫反应原理的一种定量分析方法。
它利用胶体金颗粒与抗原或抗体结合后形成的免疫络合物，在特定条件下产生可见的比浊反应。
该方法利用胶体金颗粒的特殊性质，具有较高的灵敏度和特异性。
二、胶体金颗粒免疫比浊法的应用
胶体金颗粒免疫比浊法在医学、生物学等领域有广泛的应用。
在临床诊断中，它可用于检测血清中的肿瘤标志物、病毒、细菌等，对于疾病的早期诊断和预后评估具有重要意义。
此外，胶体金颗粒免疫比浊法还可以应用于食品安全检测、环境监测和药物研发等领域。
三、胶体金颗粒免疫比浊法的发展历程
胶体金颗粒免疫比浊法起源于20世纪70年代，最初用于检测结核分枝杆菌。
随着研究的深入，科学家们发现该方法具有较高的敏感性和特异性，并且可以与其他分析技术相结合，如酶联免疫吸附法、荧光免疫分析法等，进一步提高检测的准确性和灵敏度。
随着生物技术的不断发展，胶体金颗粒免疫比浊法也得到了进一步的改进和应用扩展。
现在，已经有许多新的胶体金颗粒免疫比浊法
衍生技术被开发出来，如纳米颗粒标记技术、多重共振光散射技术等，进一步提高了检测的灵敏度和多样性。
总之，胶体金颗粒免疫比浊法是一种重要的生物化学分析方法，
广泛应用于医学、生物学等领域。
随着技术的不断创新和改进，它将
在未来发挥更大的作用，为疾病的早期诊断和治疗提供有力的支持。
第六章-免疫比浊分析PPT课件
BNⅡ、BN100特种蛋白分析分析系统
（二）ARRAY分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的 前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散 射光速率变化大小与抗原浓度成正比。
速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗 原的浓度。
2.仪器基本组成
ARRAY系统由分析仪、电脑处理系统、打印 机构成，其主要构成部分为分析仪，由加液 系统、散射测浊仪、40孔样本转盘、20孔试 剂转盘、软盘驱动器等组成。
•41
• 4.单向琼脂扩散法可用于
• A.抗体定性 B.抗体定量
• C.抗原定性 D.抗原定量
• 5.双向琼脂扩散试验，两种受检抗原的性质完全 相同时，沉淀线出现
• A.二条直线相交叉 C.二条弧线部分融合
B.二条弧线完全融合 D.二条直线不连接
• 6.火箭免疫电泳达到终点时应
• A.火箭峰呈云雾状 B.火箭峰呈圆形
抗原抗体复合物形成时间与速率的关系
累计时间 复合物产 产生速率 生总量
5
8
—
10
13
5
15
25
12
20
60
35
25
150
90
30
230
80
35
300
70
40
360
60
45
415
55
50
450
45
55
480
30
60
500
20
•18
当抗体的浓度固定于一定范围时，复合物 形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比， 随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多， 抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。 通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。
免疫比浊法原理
免疫比浊法原理
免疫比浊法是检测类风湿因子的方法，是利用抗原和抗体相互结合，动态测定类风湿因子的方法，基本原理是抗原、抗体在特定稀释系统中反应，比例合适的时候形成可溶性免疫复合物，在稀释系统中的促凝剂作用下，从液体状态析出形成微粒，使反应液混浊，抗体浓度固定的时候形成的免疫复合物量，会随检测样中抗原量增加，反应液混浊度也会随之增加。
通过测定反应液的浊度，与一系列标准品进行对比，可以计算出检测样品中抗原含量。
所以，免疫比浊法是检测类风湿因子的定量检查，有时候在测定类风湿因子的时候会将检测方法写在检查结果后面，有利于临床医生对结果做出比较规范的判断。
在临床上也会采用其他检测方法进行类风湿因子的检测，有的是定性检测，报告只出现阴性、阳性结果，没有具体数值。
免疫比浊法是一种检测类风湿性因子的方法，是利用抗原抗体相互结合，动态测定类风湿因子的方法，其基本原理是：抗原、抗体在特定稀释系统中反应，适当比例后形成可
溶性免疫复合物，在稀释系统中的促凝剂作用下，从液体状态析出形成微粒，使反应液混浊，当抗体浓度固定时，所形成的免疫复合物量，就会随检测样中抗原量增加，反应液混浊度也会随之增加。
用该反应液测定浊度，并与标准系列产品对比，可计算出检测样品中抗原含量。
06第六章 免疫比浊分析
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人民卫生出版社
第六章
免疫比浊分析
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
改良。以发光二极管作为光源，检测前向角
13～24度的散射光，然后利用硅化光电二极 管接收散射光信号，经过微电脑处理，与标 准曲线进行比较，最后转换成待检物质的浓 度。
复合物产 产生速率 生总量
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
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免疫比浊分析
（二）技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。此外，要保证待测样本血清的性 状符合要求，如严重脂血等即为不合格样本。
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免疫比浊分析
在抗原或抗体量一定的条件下，可以利用比 浊仪在光源的光路方向上测定透射光强度与 入射光强度的比值或吸光度，来判断待测抗 原的量，这种方法称为透射比浊法 。
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透射免疫比浊法光路图
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（二）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
影响检测结果，因此需要选择均匀一致的
胶乳颗粒。此外，试剂需要加保护剂以提
高其稳定性，所用器皿要洁净，避免杂质 微粒的干扰。
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（三）方法学评价 该法敏感度高，试剂稳定，个体免疫复 合物对结果影响也小，因此结果稳定、可 靠，特异性好，精确度高，且不需要特殊
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（三）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
• 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗 体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。
（四）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
1．抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。 诊断试剂应尽可能 溶液中免
颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝
聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。
三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的 一种改良。以发光二极管作为光源，检测前
向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电
二、免疫散射比浊法
(一) 原理 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到 光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成 散射光。 悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的 大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因 素密切相关。
不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时，
(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角 度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry） 速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动 态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反
应液出现浊度。这种浊度可用仪器检测，用吸光度表
示。
第一节 免疫浊度分析原理
在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫复
合物量随抗原量的增加而增加，反应液的浊度亦随之
增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。
免疫比浊技术分类：
透射免疫比浊法
（turbidimetric immunoassay）
当抗体的浓度固定于一定范围时，复合物
形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比，
随着时间的延长，免疫复合物的量逐渐增多，
抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。
通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。
技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。 此外，要保证待测样本血清的性状符合要 求，如严重脂血等即为不合格样本。
(三)方法评价
散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本 法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密
等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的
准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质 量要求很高。
三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗
粒（一般为0.2 μm），在遇到相应抗原时，胶乳
疫复合物的量（不是免疫复合物累积的量），连续
测定各时间复合物形成的速率与其产生的散射光信
号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项
检测仅1～2min即可完成。
抗原抗体复合物形成时间与速率的关系
累计时间
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
复合物产 产生速率 生总量
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
二极管接收散射光信号，经过微电脑处理， 与标准曲线进行比较，最后转换成待检物质 的浓度。
2.仪器基本组成
系统由分析仪、计算机、条码读取器、打
印机四部分组成，其中分析仪是主要组成部分， 包括散射测浊仪、自动加样系统、运输装置和 比色杯装置。
BNⅡ、BN100特种蛋白分析分析系统
（二）ARRAY分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法，在抗体过量的 前提下，光束通过抗原抗体复合物时所产生的散 射光速率变化大小与抗原浓度成正比。
免疫比浊分析是将液相内的沉淀反应
与现代光学仪器和自动分析技术相结合的 一项分析技术。
第一节
免疫比浊的原理
一、透射免疫比浊法
二、散射免疫比浊法
三、免疫胶乳比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用 第二节 自动化免疫比浊分析
第一节 免疫浊度分析原理
抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小
分子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、NaF等）
速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗
原的浓度。
2.仪器基本组成 ARRAY系统由分析仪、电脑处理系统、打印
机构成，其主要构成部分为分析仪，由加液
系统、散射测浊仪、40孔样本转盘、20孔试
剂转盘、软盘驱动器等组成。
Array360、IMMAGE特种蛋白分析分析系统
二、免疫比浊分析的主要影响因素
散射免疫比浊法
（nephelometry immunoassay）
终点散射比浊法 速率散射比浊法
一、免疫透射比浊法
（一）原理：
一定波长的入射光线通过抗原抗体反应后的溶
液时，由于溶液中的免疫复合物微粒对光线的吸收、 反射和折射而使透射光减少，可用吸光度表示。 在一定范围内，吸光度与免疫复合物量呈正相 关，而形成的免疫复合物量与参与反应的抗原和抗
体的量呈函数关系。
抗原抗体反应曲线
（二）操作方法
1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。 2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准 品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗 原抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。 3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线 拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算 出抗原浓度。
散射光的强度在各个方向的分布均匀一致
，称Rayleighae散射。
当微粒直径大于或等于入射光的波长时，前
向散射光远远强于后向散射光，称Mile散射。
其中光线偏转的角度与发射光的波长和抗
原抗体复合物的大小和多少密切相关。
当固定检测角度与发射光的波长时，散射
光的强度与复合物的含量成正比，即待测的抗
原越多，形成的复合物越多，散射光就越强。