海藻液肥制取方法

海藻——洗净——晒干——研磨——匀浆——高温高压处理——过滤——浓缩

海藻——洗净——匀浆——过滤——浓缩——海藻液肥

滤渣

8%KOH,75—80℃或Ca（OH）2,105—109℃

角叉菜胶

取一定量的新鲜褐藻（海带），按料水比1:0.25研磨制成匀浆，5摄氏度冷藏备用。

海藻消解方法

1：研磨、碾碎法是使细胞在玻璃球或钢球被碾碎，或使细胞和助磨剂相互摩擦碰撞而破碎，此法代价便宜，但需高效冷却，所用设备有细胞珠磨碎机、各种研磨机等:

2：冷冻粉碎发即将新鲜海藻冷冻粉碎经离心后得到提取液，然后再按不同情况，使用透析过滤后得到浓缩液

:3：碱解法（化学方法）碱解法即利用脂的皂化作用使细胞膜增溶，碱解法是国外生产海藻肥通常采用的方法，即将褐藻干品置于一定溶液的碳酸钠溶液中进行加压消解，除去不溶性组分，再经干燥处理后得到，碱解还可以使藻体中结合态的生长素被释放出来。

取1500ml褐藻匀浆，分装至15个250ml三角瓶，每瓶装量100ml，调节pH6，按质量0.3%分别添加PPC复合酶，在50摄氏度温度条件下进行酶解反应，在0、24、48、72、96h分别取样，3次重复，然后以2000r/min离心，取上清液测定海藻酸含量，海藻酸含量的测定参照文献（蒋新国，奚念朱，1990；鲍士旦，2000；王泽文，冷凯良等，2009）中的方法。PPC复合酶选用了纤维素酶、果胶水解酶、蛋白水解酶等进行组合优化

发酵时间48小时，发酵温度40摄氏度，功能性菌剂添加量0.2%，100ml/250ml的装液量。发酵初始pH=6。

功能性菌剂

菌种枯草芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，乳酸菌，酵母菌，均为本实验室保藏菌种

仪器：恒温摇床，低速大容量离心机，电子天平，722可见分光光度计，电热干燥箱

菌剂制作方法

取斜面菌种一环，将枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌接种至LB液体培养基（1%胰蛋白胨，0.5%酵母提取物，1%氯化钠），乳酸菌接种至MRS培养基（1%牛肉膏，1%蛋白胨，0.5%酵母膏，2%葡糖糖，0.5%醋酸钠，0.2%磷酸氢二钾，0.2%柠檬酸三胺，0.01%吐温-80,0.058%七水硫酸镁，0.025%四水硫酸锰），酵母菌接种至YPD液体培养基（1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡糖糖），200rpm，37摄氏度培养18小时，所得菌液等体积混合，备用。