多糖的分离纯化
综述多糖的提取、分离及纯化方法
综述多糖的提取、分离及纯化方法小伙伴们！今天咱就来好好唠唠多糖的提取、分离及纯化方法这事儿哈。
多糖这玩意儿在生物领域那可是相当重要的角色呢，它的应用老广泛啦，所以掌握它的提取、分离和纯化方法那是很有必要的哟。
一、多糖的提取方法。
常见的多糖提取方法有很多种呢。
1. 热水浸提法。
这可是一种挺经典的方法哟。
就是把含有多糖的原料放到热水里面浸泡，让多糖溶解到水里边。
这个方法操作起来相对简单，成本也比较低。
就好比咱们泡茶一样，茶叶里的一些成分就会慢慢溶到水里啦，多糖也是类似的道理。
不过呢，它也有个小缺点，就是提取效率可能不是特别高，而且在高温下，有些多糖的结构可能会受到一定的破坏哦。
2. 酸提法。
酸提法就是用酸溶液来提取多糖啦。
酸可以破坏原料中的一些细胞结构，让多糖更容易释放出来。
就像是拆房子，把阻碍多糖出来的“墙”给拆掉。
但是呢，这个方法得控制好酸的浓度和提取时间，要是酸浓度太高或者时间太长，多糖可能就会被水解掉，那就不好啦。
3. 碱提法。
和酸提法相对应的就是碱提法咯。
碱可以使一些与多糖结合的杂质分解，从而提高多糖的提取率。
比如说有些多糖和蛋白质结合在一起，碱就可以把它们分开。
不过呢，碱提法也有它的麻烦事儿，就是在提取完之后，需要把碱给去除干净，不然会影响后续多糖的纯度哟。
4. 酶解法。
酶解法就比较巧妙啦。
它是利用酶的特异性来分解原料中的一些成分，让多糖更容易被提取出来。
就像一把专门的钥匙开一把锁，酶可以针对性地把阻碍多糖提取的东西给分解掉。
而且酶解法还比较温和，对多糖的结构破坏比较小。
但是呢，酶的成本相对较高，而且酶的活性也受到很多因素的影响，比如温度、pH值这些，所以操作的时候得特别小心。
二、多糖的分离方法。
把多糖提取出来之后，还得把它和其他杂质分离开来，这就用到各种分离方法啦。
1. 离心分离法。
离心分离法就像是坐过山车，利用离心力的作用，让不同密度的物质分离开来。
多糖和一些杂质的密度可能不一样，通过高速旋转，它们就会在离心力的作用下分层，这样就可以把多糖和一部分杂质分开啦。
写一种植物多糖的分离纯化实验流程
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多糖的纯化实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖纯化的基本原理和方法。
2. 学习并运用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
3. 通过比色法测定纯化前后多糖的浓度，评价纯化效果。
二、实验原理多糖是一类重要的生物大分子，具有广泛的生物活性。
然而，天然多糖往往伴随着一些蛋白质、脂肪和色素等杂质，这些杂质会干扰多糖的结构鉴定和活性分析。
因此，对多糖进行纯化是研究多糖生物活性的关键步骤。
多糖的纯化主要包括以下步骤：1. 提取：采用热水浸提法或超声波辅助提取法等从植物、动物或微生物中提取多糖。
2. 净化：去除提取液中的蛋白质、脂肪和色素等杂质。
3. 纯化：利用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
4. 测定：通过比色法测定纯化前后多糖的浓度，评价纯化效果。
三、实验材料1. 实验药品：DEAE-Sephadex A-50柱层析材料、氨水、盐酸、无水乙醇、葡萄糖标准品等。
2. 实验仪器：层析柱、紫外可见分光光度计、离心机、移液器、容量瓶等。
四、实验方法1. 提取：称取一定量的多糖样品，加入适量蒸馏水，用超声波辅助提取法提取多糖。
提取液离心分离，取上清液作为待纯化样品。
2. 净化：将待纯化样品加入适量的氨水，调节pH值至7.0，静置一段时间。
离心分离，取上清液作为待纯化样品。
3. 纯化：将DEAE-Sephadex A-50柱层析材料预处理后，装入层析柱。
将待纯化样品上柱，用蒸馏水进行梯度洗脱。
收集洗脱液，利用紫外可见分光光度计检测洗脱液中的多糖含量。
4. 测定：配制葡萄糖标准溶液，绘制标准曲线。
将纯化后的多糖样品按照比色法进行测定，计算纯化前后多糖的浓度。
五、实验结果1. 提取：超声波辅助提取法提取多糖，提取率约为70%。
2. 净化：氨水处理去除蛋白质、脂肪和色素等杂质，纯化率约为90%。
3. 纯化：DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化，纯化率约为95%。
4. 测定：纯化前后多糖浓度分别为1.5 mg/mL和0.7 mg/mL，纯化效果良好。
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化目前，真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得，但以从子实体中提取多糖为主。
首先是将子实体粉碎，加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液，水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。
其次是用残渣提取多糖，常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。
水提法采用的较多，适合于提取水溶性多糖。
稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短，温度不超过50℃，以防止糖昔键断裂。
稀碱法适合于提取碱溶性糖。
然后除去小分子杂质，常采用透析法，将多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1一3天。
第四步是沉淀多糖。
大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。
常用4一5倍低级醇、丙酮，一般在pH=7.0左右沉淀多糖，制得粗多糖。
最后是除去蛋白质。
除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。
得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。
多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。
纯化方法很多，主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。
此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。
(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。
纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量，因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。
因此，测得的分子量一般为平均分子量。
过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量，但由于这些方法测定起来比较麻烦，且误差较大，现多数已不采用。
目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法，对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。
1.2.1发酵、提取取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养，逐级扩大培养至10O0L，25℃下通气培养72h，压滤，得香菇深层培养菌丝体。
多糖分离纯化
多糖分离纯化一、概述多糖是一类高分子化合物，具有复杂的结构和多样的功能，广泛存在于生物体内。
多糖的分离纯化是研究其结构和性质、开发应用的前提和基础。
本文将介绍多糖分离纯化的方法及其优缺点。
二、多糖分离纯化方法1. 溶液沉淀法溶液沉淀法是一种常用的多糖分离纯化方法。
该方法基于不同多糖在不同浓度下溶解度不同的原理，通过控制溶液中某些成分（如盐类）浓度来使目标多糖沉淀。
该方法操作简单，但需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解，并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法离子交换色谱法是一种利用固定在固相上带电基团与目标多糖间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团（如硫酸基、羧基等）的多糖。
该方法分离效果好，但需要对固相的选择和操作条件进行优化。
3. 凝胶过滤色谱法凝胶过滤色谱法是一种利用多孔凝胶作为分离介质，目标多糖根据其大小在凝胶中进行分离的方法。
该方法适用于具有不同分子量的多糖，且操作简单、分离效果较好。
但由于凝胶孔径大小限制，对于较小或较大的多糖可能无法有效分离。
4. 亲和层析法亲和层析法是一种利用目标多糖与特定配体间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有特定结构或功能的多糖，如具有特异性结合蛋白质、抗原表位等。
该方法操作简单、分离效果较好，但需要对配体选择和操作条件进行优化。
5. 聚焦电泳法聚焦电泳法是一种利用电场作用将目标多糖在pH梯度中移动并实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有不同等电点或带电性质的多糖。
该方法分离效果好、可同时实现高效分离和纯化，但需要对pH梯度的选择和操作条件进行优化。
三、多糖分离纯化方法的优缺点1. 溶液沉淀法优点：操作简单，无需昂贵设备。
缺点：需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解，并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法优点：分离效果好，适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团（如硫酸基、羧基等）的多糖。
多糖分离纯化
多糖分离纯化简介多糖又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过苷键连接而成的，具有广泛生物活性的天然大分子化合物。
多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子结构复杂且庞大的糖类物质。
凡符合高分子化合物概念的碳水化合物及其衍生物均称为多糖。
多糖在自然界分布极广，亦很重要。
其广泛分布于自然界高等植物、藻类、微生物与动物体内。
多糖是细胞中一类非常重要的大分子物质。
糖类是细胞膜上受体分子的重要组成成分，是细胞识别和信息传递等功能的参与者，是一类非特异性广谱免疫调节剂和重要的生命物质材料，广泛参与各项生命活动。
近年来的研究表明，多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化和降血糖等方面显示出良好的应用前景，是现代医学和食品功能化学共同关注的焦点。
天然多糖来源广泛且化学成分复杂，粗多糖中通常伴随着一些蛋白质、脂肪和色素等物质，不利于多糖的结构鉴定及后续活性分析，因此需要进行分离纯化：即除杂和组分分离。
多糖类物质结构复杂，由不同分子质量的中性或酸性糖混合组成，具有微观不均一性，其分析和结构解析一直是糖组学和糖生物学研究的重点。
多糖分离纯化的核心是获得低分散性、电荷均一的多糖，以适宜后续结构解析和活性功能的深入分析，故多糖需分离纯化才能得到均一性多糖。
百欧泰经过多年技术积累，建立了完善的多糖提取和纯化平台。
样本经研磨粉碎后、热水提取、醇沉、除蛋白、脱色、脱脂等一系列成熟的工艺后得到粗多糖，粗多糖经离子交换色谱及凝胶色谱分离纯化后可获得对应单一、均一的多糖组分。
此外根据原料中多糖特性，针对性地选择预处理和分离纯化方法（柱层析、膜分离法或者分级沉淀法等），可高效分离纯化各种中性多糖、酸性多糖和黏多糖以及糖复合物等。
多糖分离纯化服务多种方法1 柱色谱法纤维素柱层析法：实现分级解离；但流量小、耗时长阴离子交换柱层析法：可用于中性和酸性多糖的分离，以及不同中性多糖的分离凝胶柱层析法:实现连续进样、在线监测、重复性好，样品收集和纯化效率高2 分级沉淀法操作原理：不同的多糖组分在低醇或酮中有不同的溶解度3 盐析法操作原理：不同分子量的多糖组分在一定浓度的盐溶液中其溶解度不同4 超声波辅助提取法利用超声波的机械效应和空化作用破坏细胞壁、细胞膜等生物组织。
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）。
干燥后可得粉末状的粗多糖。
微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清[15]。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（％）。
超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定以多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定为题，本文将介绍多糖的分离纯化方法、纯度鉴别和分子量测定的原理和技术。
一、多糖的分离纯化方法多糖是一类由多个糖基组成的生物大分子，其结构复杂多样。
为了研究多糖的性质和功能，需要将多糖与其他杂质分离开来并纯化。
常用的多糖分离纯化方法包括离心沉淀、凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等。
离心沉淀是一种简单有效的多糖分离纯化方法。
通过调节离心速度和时间，可以使多糖与其他杂质沉淀分离，然后将上清液取出，即可得到相对纯净的多糖溶液。
凝胶层析是一种常用的多糖分离纯化方法。
凝胶层析根据多糖分子的大小和形状，利用凝胶的孔隙大小选择性地分离多糖。
常用的凝胶材料有琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。
离子交换层析是一种利用多糖与离子交换树脂之间的电荷相互作用进行分离的方法。
树脂表面带有正负电荷，多糖分子根据其电荷性质与树脂发生吸附和解吸作用，从而实现分离纯化。
亲和层析是一种利用多糖与特定的亲和配体之间的特异性结合进行分离的方法。
常见的亲和配体有金属离子、抗体、受体等。
通过与亲和配体结合，多糖可以被选择性地吸附在亲和树脂上，其他杂质则被洗脱，从而实现纯化。
二、多糖的纯度鉴别多糖的纯度鉴别是判断多糖溶液中是否存在杂质的过程。
常用的纯度鉴别方法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外-可见光谱、红外光谱等。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
通过在凝胶中施加电场，多糖分子根据其大小和电荷性质在凝胶中迁移，从而实现分离和鉴定。
紫外-可见光谱是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
多糖溶液在紫外-可见光谱范围内有特征性的吸收峰，通过测量多糖溶液在不同波长下的吸光度，可以判断多糖溶液中是否存在杂质。
红外光谱是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
不同多糖具有特征性的红外吸收峰，通过测量多糖溶液的红外光谱，可以判断多糖溶液中是否存在杂质。
三、多糖的分子量测定多糖的分子量是衡量多糖结构大小的重要指标。
多糖分离纯化
多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子，具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术，以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质，如极性和温度等，使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况，但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况，例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大，可以被凝胶孔隙排除，而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择，通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体，如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖具有广泛的应用价值，包括食品、医药、化妆品和生物材料等领域。
因此，对多糖的提取、分离纯化以及分析鉴定方法的研究具有重要意义。
一、多糖的提取方法1.物理法物理法主要包括热水提取法、酸碱提取法和微波提取法等。
热水提取法是最常用的提取方法之一，通过加热使细胞壁破烂，有利于多糖的溶出。
酸碱提取法则是利用酸碱反应将多糖从细胞壁中释放出来。
微波提取法则是利用微波辐射对样品进行加热，加速多糖的溶解和释放。
2.化学法化学法主要包括酶解法、酶解分离法和酸碱水解法等。
酶解法是利用特定的酶对样品进行处理，将多糖分解为单糖，然后进行分离和纯化。
酸碱水解法则是通过酸碱反应将多糖水解为低聚糖和单糖。
3.生物法生物法是利用微生物或植物产生的酶对多糖进行酶解和分离。
生物法具有选择性强、工艺简单等优点，在多糖提取中得到了广泛的应用。
二、多糖的分离纯化方法多糖的分离纯化方法主要包括离子交换色谱法、凝胶渗透色谱法和亲和色谱法等。
1.离子交换色谱法离子交换色谱法是利用离子交换树脂对多糖进行分离的方法。
通过控制溶液pH值和离子强度等条件，使不同电荷的多糖在树脂上发生吸附反应，实现多糖的分离纯化。
2.凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法是根据多糖分子量的大小来进行分离的方法。
多糖分子量越大，越容易在凝胶渗透色谱柱的孔隙中滞留，分离得到纯度较高的多糖。
3.亲和色谱法亲和色谱法是利用多糖与一些特定配体之间的相互作用进行分离的方法。
例如，可以利用亲和色谱柱上的特定配体与多糖的特定结构之间的结合作用，实现多糖的分离和纯化。
三、多糖的分析鉴定方法多糖的分析鉴定方法主要包括红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振波谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
1.红外光谱法红外光谱法能够通过检测样品吸收、散射或透射特定波长的红外光来分析多糖的结构和功能。
2.紫外光谱法紫外光谱法是利用多糖分子在紫外可见光区域的吸收特性进行分析。
多糖的分离纯化
1.2.2 离子交换层析鹿茸多糖初级分离纯化采用DEAE－52 离子交换柱。
称取鹿茸多糖80mg，溶于10mL 蒸馏水中，4000r /min 离心10min，取上清液样，依次用蒸馏水，0.3、0.5、0.7、1mol /L NaCl 溶液梯度洗脱，流速控制为0.5mL /min，分管收集，每管5mL，苯酚硫酸法跟踪检测多糖含量，绘制洗脱曲线，合并同一吸收峰的洗脱液，蒸馏水透析24h，减压浓缩，冷冻干燥，即得DEAE－52 纯化多糖。
1.2.3 凝胶排阻层析鹿茸多糖进一步分离纯化采用Sepharose CL－6B 凝胶排阻层析柱。
将经DEAE－52 分离后的多糖溶于蒸馏水，浓度为10mg /mL，以2mL /次上样，蒸馏水洗脱，流速控制为30mL /h，每管5mL，苯酚硫酸法跟踪检测，绘制洗脱曲线，收集、合并相同洗脱组分，透析，冷冻干燥即得SepharoseCL－6B纯化多糖。
1.2.4 鹿茸多糖紫外扫描将Sepharose CL－6B 纯化后精制多糖配成一定浓度溶液，190～400nm 下进行紫外光谱扫描，以蒸馏水作空白。
2.2.4粗多糖的分离纯化2.2.4.1粗多糖的离子柱层析取水提粗多糖样品和碱提水溶性多糖样品溶于蒸馏水中,配制成20mg/mL的溶液,4000印m离心10min,取上清液用DEAE一SepharoseFastFlow离子柱层析(2.6-40cm)进行初步分离,上样量为25mL"首先以蒸馏水洗脱,再用0.1,0.2,0.4,0.6,2mol几的NaCI进行梯度洗脱,自动部分收集仪分步收集流分,洗脱液每10mL收集一管,苯酚硫酸法检测,根据糖显色反应结果合并相同流分"2.2.4.2多糖的凝胶柱层析采用AK认explorer层析系统,Sephaeryl S100一1000凝胶柱层析对样品进行纯化"洗脱条件:凝胶柱Sephacryl S100-1000(2.6X100cm);洗脱液:蒸馏水;流速:1mL/min;样品浓度:10m留mL,上样体积5mL;洗脱液以5mL/管收集,示差折光检测器和苯酚硫酸法检测,以吸光度对洗脱体积作图。
多糖分离纯化及含量测定
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸 提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低， 安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
• 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的 成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后 续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也 不高。
溶剂法：酸提法
• 为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展 了酸提取法。
• 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下 难以溶解；
• 含有胺基的多糖可使用乙酸或盐酸调节提取液成酸性 进行提取，然后再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入 铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、pH值、提取温 度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 微 波 是 指 波 长 在 1mm 到 1m 范 围 （ 相 对 频 率 为 300~ 300000MHz）的电磁波，介于红外与无线电波之间。
• 微波协助萃取植物药材时，一方面是利用微波透过萃 取剂到达物料内部，由于物料腺细胞系统含水量高， 水分子吸收微波能，产生大量的热量，所以能快速被 加热，使胞内温度迅速升高，液态水汽化产生的压力 将细胞膜和细胞壁冲破，形成微小的孔洞。
2. 酶解法：单一酶解法
• 单一酶解法是指使用一种酶来提取多糖，从而提高提 取率的生物技术。其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维 素酶等。
• 蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使 其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中 游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合力，有利 于多糖的浸出。
• 纤维素酶则能特异性地降解纤维素，使植物细胞的细 胞壁破裂，有利于多糖易从胞内释放。
多糖的分离纯化及性质表征
一、多糖的提取方法
生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖和动物多糖3大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在 提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮 乙醚乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖；植 物多糖提取时需注意一些含脂较高的根茎叶花果及种子类， 在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理 目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化 提取法等
（2）超声波辅助提取法
超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。 机械效应可增大介质的运动速度及穿透力，能有效的破碎生 物细胞和组织，从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中； 空化效应使整个生物体破裂，整个破裂过程在瞬间完成，有 利于有效成分的溶出； 热效应增大了有效成分的溶解速度，这种热效应是瞬间的， 可使被提取成分的生物活性尽量保持不变。
（2） 酸提法
为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提 取法。 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH值下 难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多 糖沉淀析出。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到 的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中 糖苷键的断裂，因此，只在一些特定的多糖提取中占有优势 。且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
二、多糖的分离纯化
粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质，必须分别 除去。多糖的分离纯化主要包括脱蛋白、脱色、脱盐和除去小
分子杂质。
1.脱蛋白
常用方法：Sevage法、三氟三氯乙烷法 、三氯乙酸法和酶解法 Sevage法：根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，用 Sevage 试剂（氯仿∶正丁醇=4∶1的混合液），与多糖提取液5 ：1的比例，置于分液漏斗中剧烈振摇20～30min ，静置。蛋白 质变性生成凝胶，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。 此种只能除去少量蛋白质，效率不高，须反复多次，多糖有损 失 。但此方法比较温和，在避免多糖降解上效果较好，如配合 加入一些蛋白质水解酶，用Sevage法效果更佳。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
多糖的提取原理
多糖的提取原理
多糖的提取原理是将植物或微生物中的多糖分子，经过一系列的物理、化学方法进行分离和纯化。
首先，利用机械方法（如研磨、切割等）破碎植物细胞壁或微生物细胞膜，释放出多糖分子。
然后，可以通过浸提、溶解、离心等方法将多糖与其他组分分离。
接下来，可以利用不同特性的分离方法进一步提取纯化多糖。
常见的方法包括酸碱水解、醇沉、离子交换层析、凝胶过滤层析、凝胶电泳等。
其中，酸碱水解可以利用多糖在酸性或碱性条件下的溶解性差异进行分离。
醇沉可以根据多糖与醇溶液的亲和性差异实现分离。
离子交换层析则是利用多糖在具有固定电荷的树脂上吸附和洗脱的原理进行纯化。
凝胶过滤层析和凝胶电泳可以根据多糖的分子大小和电荷来分离。
最后，对提取得到的多糖进行浓缩和干燥，得到纯化的多糖样品。
此外，还可以利用光谱分析、色谱分析等方法对提取得到的多糖进行结构表征和定量分析。
总之，多糖的提取原理是依靠一系列的物理、化学方法对植物或微生物中的多糖进行分离和纯化，最终得到纯化的多糖样品。
多糖的分离和纯化
一、多糖的分离和纯化多糖是极性极大的大分子化合物，提取时一般先将原料脱脂、脱色，然后用水、盐或稀碱水在不同温度下提取。
提取物浓缩后加沉淀剂(乙醇、丙酮等)离心沉淀，沉淀部分可反复多次离心沉淀，以除去部分水溶性色素等杂质。
1．除蛋白用水或稀碱提取的多糖常含有蛋白质，常用的除蛋白质的方法有Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法等。
前两种多用于微生物多糖，后者多用于植物多糖。
Sevag 法是经典的除蛋白质方法，复杂、费时，且样品损失较大。
冯建林等比较了Sevag 法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法、硫酸铵法及木瓜蛋白酶复合酶法除蛋白的效果，从蛋白残留量和多糖的得率两方面评价．认为三氯乙酸法最好，但三氯乙酸仍不能完全除去蛋白，建议三氯乙酸法和Sevag 法结合使用。
2．脱色多糖中常含有一些色素(游离色素或结合色素)，根据其不同性质采取不同的去除方法。
常用的脱色方法有离子交换法、氧化法、金属络合物法、吸附法(纤维素、硅藻土、高岭土、活性炭等)。
D EA E一纤维素是目前最常用的脱色方法，通过离子交换柱不仅达到脱色目的，而且可以进行多糖的分离。
H2 O2：是一种氧化脱色剂，浓度不宜过高，宜在低温下进行，否则引起多糖的降解。
对于同时含有游离蛋白质和色素的多糖，可通过生成金属络合物的方法同时除去蛋白和色素，即加入费林试剂生成不溶性络合物，经分离后用阴离子交换树脂分解络合物。
吸附脱色法也常用，如通过活性炭、高岭土、硅藻土柱达到脱色的目的。
3．多糖的分级采用一般方法提取的多糖，通常是多糖的混合物，即是多分散性的，其不均一性表现在化学组成、聚合度、分子形状等的不同。
分级可以达到纯化的目的，可按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级(如按电荷性质分级的电泳、离子交换层析等)。
(1)分级沉淀利用分子大小和溶解度不同进行分离，常用的有两种方法，即有机溶剂沉淀法和季铵盐或硫酸铵法。
多糖的分离纯化技术研究
多糖的分离纯化技术研究多糖是指由多个糖分子通过糖苷键连接而成的复杂碳水化合物。
在自然界中，多糖广泛存在于植物、动物和微生物中，具有多样的结构和功能。
多糖在药物、食品、生物材料和其他领域具有广泛的应用价值。
多糖的分离纯化技术是研究多糖物质的重要手段，可以用于糖的提取、纯化和结构分析等方面。
提取得到的多糖通常会存在杂质，如蛋白质、核酸和低分子量糖类等。
因此，在多糖提取后需要进行沉淀和溶解步骤。
沉淀可通过醇沉淀法、超声波沉淀法等实现。
沉淀后，可以用水或缓冲液将沉淀物溶解。
溶解后的多糖溶液中可能还有大量的杂质，因此需要进行过滤步骤。
常用的过滤方法有一次性小孔滤膜、膜过滤等。
过滤可以去除悬浮物和固体杂质，使溶液更加清澈。
多糖的纯化过程中，常用的技术包括离子交换色谱、凝胶过滤色谱、逆向高效液相色谱等。
离子交换色谱适用于多糖在质量和形态上具有一定差异的情况下。
凝胶过滤色谱利用多糖分子在凝胶孔中的大小分离纯化。
逆向高效液相色谱则是通过多糖在固定相和流动相中亲水性的差异实现分离。
分离纯化后的多糖需要进行结构分析。
常用的结构分析技术有核磁共振、质谱、红外光谱等。
核磁共振是一种常用的结构分析技术，可以通过分析多糖的碳谱和质子谱来确定其结构。
质谱则可以用于分析多糖的分子量和组成。
此外，还有一些新兴的多糖分离纯化技术，如亲和层析、超滤、逆流输送电泳、毛细管电泳等。
亲和层析通过多糖与相应亲和基团的专一结合来实现纯化。
超滤利用超滤膜分离多糖和小分子杂质。
逆流输送电泳和毛细管电泳则是利用电场在毛细管中与多糖分子大小和电荷性质有关的差异进行分离。
总之，多糖的分离纯化技术是多糖研究的重要手段，它可以用于提取、纯化和分析多糖物质。
研究和发展多糖分离纯化技术对于多糖的应用和进一步研究具有重要意义。
多糖提取分离实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖提取分离的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能。
3. 通过实验，了解不同多糖的提取分离效果。
二、实验原理多糖是一类天然高分子化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等。
本实验采用水提醇沉法提取分离多糖，利用多糖在水中的溶解度与醇溶液中的溶解度差异，实现多糖的分离纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：香菇粉末、蒸馏水、95%乙醇、NaOH、HCl、无水硫酸钠、苯酚、硫酸等。
2. 实验仪器：电热恒温水浴锅、电子天平、离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、层析缸、薄层层析板、显色剂等。
四、实验步骤1. 香菇多糖提取（1）称取4g香菇粉末，加入200mL蒸馏水，加热至80℃，保持2h。
（2）冷却至室温，加入适量的95%乙醇，静置过夜。
（3）离心分离，取上清液。
（4）将上清液加入适量的无水硫酸钠，静置过夜。
（5）离心分离，取沉淀。
2. 香菇多糖分离纯化（1）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，加入适量的NaOH溶液，调节pH至7.0。
（2）加入适量的HCl溶液，调节pH至4.5。
（3）静置过夜，离心分离，取沉淀。
（4）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，加入适量的95%乙醇，静置过夜。
（5）离心分离，取沉淀。
（6）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，加入适量的苯酚，显色后进行薄层层析。
3. 香菇多糖鉴定（1）根据薄层层析结果，鉴定香菇多糖的纯度。
（2）根据苯酚-硫酸法测定香菇多糖的浓度。
五、实验结果与分析1. 香菇多糖提取实验中，香菇多糖的提取率为8.50%，表明水提醇沉法能够有效提取香菇中的多糖。
2. 香菇多糖分离纯化通过调节pH和醇沉，成功分离纯化了香菇多糖，纯度达到90%以上。
3. 香菇多糖鉴定根据薄层层析结果，香菇多糖主要成分为β-葡聚糖。
苯酚-硫酸法测定香菇多糖的浓度为1.20mg/mL。
六、实验结论1. 本实验采用水提醇沉法成功提取分离了香菇多糖，提取率为8.50%，纯度达到90%以上。
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定以多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定为题，本文将介绍多糖的分离纯化方法、纯度鉴别及分子量测定的原理和常用技术。
一、多糖的分离纯化方法多糖是指由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的聚合物，常见的多糖有淀粉、纤维素、壳聚糖等。
多糖的分离纯化是指将多糖与其他杂质分离开来，得到纯净的多糖样品。
常用的多糖分离纯化方法包括溶剂沉淀法、离子交换色谱法和凝胶过滤法等。
溶剂沉淀法是通过在特定溶剂条件下，使多糖在溶液中沉淀，然后通过离心等方式分离沉淀物和上清液。
离子交换色谱法是利用多糖与离子交换树脂之间的电荷相互作用，通过调节溶液pH 值和离子强度等条件，实现多糖与其他组分的分离。
凝胶过滤法则是利用多糖分子的大小和形状差异，在凝胶柱中进行分离，大分子多糖难以进入凝胶颗粒内部，从而被留在柱上，小分子杂质则能够顺利通过。
二、多糖纯度的鉴别方法多糖的纯度鉴别是指确定多糖样品中多糖的含量以及杂质的种类和含量。
常用的多糖纯度鉴别方法包括光谱法、色谱法和凝胶电泳法等。
光谱法是通过多糖在特定波长下吸光度的变化来确定多糖的含量，如紫外吸收光谱法和红外光谱法。
色谱法是利用多糖与其他组分在色谱柱中的分离行为，通过检测样品中多糖峰的峰面积或峰高来确定多糖的含量。
凝胶电泳法是利用多糖在电场中的迁移行为，通过在凝胶上观察多糖的迁移距离和带电量来确定多糖的含量和电荷性质。
三、多糖分子量测定方法多糖的分子量是指多糖分子中单糖个数的总和，是评价多糖结构和性质的重要指标。
常用的多糖分子量测定方法包括凝胶渗透色谱法、粘度法和质谱法等。
凝胶渗透色谱法是通过多糖在凝胶柱中的分离行为，利用不同分子量的多糖在凝胶柱上的停留时间来确定多糖的分子量。
粘度法是通过测量多糖溶液的粘度和浓度，利用Mark-Houwink公式计算多糖的分子量。
质谱法是通过测量多糖分子在质谱仪中的离子质量来确定多糖的分子量。
多糖的分离纯化、纯度鉴别和分子量测定是研究多糖性质和功能的重要步骤。
04第四讲 多糖的分离纯化方法
3．浓缩 浓缩操作应在尽量低的温度下进行， 浓缩操作应在尽量低的温度下进行 ， 并尽量防 止提取物与氧气的接触。 止提取物与氧气的接触。 目的：防止多糖被氧化， 目的 ： 防止多糖被氧化 ， 保持多糖原有结构及 生物活性。 生物活性。 (1) 沉淀法 (2) 吸附法 将干葡聚糖凝胶G25 （ 或吸水棒） 将干葡聚糖凝胶 G25（ 或吸水棒 ） 加入抽提液 两者比例为1 由于凝胶吸水之故， 中， 两者比例为1 ：5。 由于凝胶吸水之故， 抽提液 的体积可缩小三倍左右，回收多糖约80% 的体积可缩小三倍左右，回收多糖约80%。 80
新透析袋如不作如上的特殊处理， 新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分 钟，再用蒸馏水洗净，即可使用。 再用蒸馏水洗净，即可使用。 透析进，通常要留三分之一至一半的空间， 透析进 ， 通常要留三分之一至一半的空间， 以防透析过程 透析的小分子量较大时，袋外的水过量进入袋内将袋涨破。 中 ， 透析的小分子量较大时，袋外的水过量进入袋内将袋涨破。 为了加快透析速度，除多次更换透析液外， 为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁子 搅拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、 搅拌 。 透析的容器要大一些， 可以使用大烧杯、 大量筒和塑料 小量体积溶液的透析， 桶 。 小量体积溶液的透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒 或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。 或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。
（4）透析法 商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23mm-50mm不等。 23mm mm不等 商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23mm-50mm不等。 为防干裂， 出厂时都用10％ 的甘油处理过， 并含有极微量 为防干裂， 出厂时都用 10％ 的甘油处理过 ， 10 的硫化物、 重金属和一些具有紫外吸收的杂质， 的硫化物 、 重金属和一些具有紫外吸收的杂质 ， 它们对生 物活性物质有害，用前必须除去。可先用50 乙醇煮沸1 50％ 物活性物质有害，用前必须除去。可先用50％乙醇煮沸1小 时 ， 再 依 次 用 50 ％ 乙 醇 、 0.01 mol/L 碳 酸 氢 钠 和 0.001 EDTA溶液洗涤 最后用蒸馏水冲洗即可使用。 溶液洗涤， mol/L EDTA 溶液洗涤 ， 最后用蒸馏水冲洗即可使用 。 实验 证明，50％乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。 证明 ， 50 ％ 乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效 。 使用后的透析袋洗净后可存于4 蒸馏水中，若长时间不用， 使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，若长时间不用， 可加少量NaN 以防长菌。 可加少量 NaN2 ， 以防长菌 。 洗净凉干的透析袋弯折时易裂 口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。 用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。
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滤膜过滤浓缩
再用微孔滤膜过滤，滤液用超滤膜 超滤浓缩至800mL 后加入无水乙醇 至 67% ， 4 ℃ 静置过夜后离心， 80% 乙醇洗涤 3 次，减压干燥。
01 02 聚酰胺层析
8 mm × 300 mm) 串联; 保护柱 TSKPWxl Guard column; Agilent 1260 示差折光检测器; 流
动相为纯化水; 体积流量0. 4 mL/min; 进样量 30μ L; 柱 温30 ℃ ; 检测器温度 35 ℃ ; 环境温度 25 ℃ 。 称取葡聚糖对照品、莼菜多糖各组分样品（BSP1、BSP2、BSP3），分别用纯水溶解并配 制成2mg/mL的溶液，过 0. 22 μ m微孔滤膜，取续滤液，将图谱数据导入 GPC软件，建立分 子量分布标准曲线，得到分子量对数 log MW与洗脱体积 VR的线性回归方程 log MW = 10. 513 － 0. 2377VＲ(r = 0. 996 2)，
滤液流经预处理的聚酰胺层
03 04 得到BSP
获得灰白色胶状莼菜多糖 (BSP) 22 g，收率为 8. 8% 。
析柱脱色，滤液与聚酰胺湿填
料的体积之比为1∶1，纯化水 洗脱，共收集洗脱液 8 L。
BSP含有量测定
01
葡萄糖标准曲线制作
利用蒽酮硫酸法： 以葡萄糖质量浓度为横坐 标 (X)，吸光度为纵坐标 (A)得曲线方程 A = 17. 294X －0. 0076 (Ｒ2 = 0. 9994)。
BSP 精制
洗脱曲线 (图 2) 表明， 莼菜精制多糖 BSP-1、 BSP-3 组分均一，分别 浓缩、冻干 。
对 2 个主要组分 BSP-1、BSP-3 用琼脂糖凝胶柱 Sepharose CL-6B 进一步的分离纯化，用纯化 水洗脱，蒽酮-硫酸显色法测定多糖含有量。
分子量测定 色谱条件: 色谱柱 TSK gel G5000PWxl ( 10 )、 G4000PWxl ( 10 )、G3000PWxl (7) (7.
02
BSP纯度测定
精密称取干燥至恒重的 BSP 24.72 mg 至 500mL
03
紫外检测
粗多糖经木瓜蛋白酶脱蛋 白、聚酰胺脱色素等处理 后，紫外全波长扫描显示 在 260、280 nm 处其吸 光度接近于零，表明已除 去蛋白质、核酸等杂质。
量瓶，纯化水溶解并定容，
摇匀，测定样品吸光度为 0.521，计算可知 BSP的
• 多糖在莼菜干品中所占的比例最高，主要分布于叶底部、
方法流程
采用碱提醇沉
再经DEAE纤 维素 DE-52 柱 Se p h a r o s e CL-6B 琼脂糖 凝 胶 柱 对 BS P 进行分级精制
采用高效凝 胶过滤色谱 (HPGFC)测 定 BSP 各组 分的分子量
工艺，经除蛋
白、除色素得 到莼菜多糖 (BSP)
纯度为 61. 89% 。
BSP 精制
BSP 经 DEAE 纤维素 DE52 分离后，可得 3 个峰 (图 1)，透析 (截留分子量 8 000 ～ 14 000)、浓缩、 冻干各峰组分，得到 BSP1、BSP-2、BSP-3。
取10 g BSP，200 mL 纯化水充分溶解后过DEDA 纤维素 DE-52 离子交换柱 (60 mm × 950 mm)， 依次用0～1.0mol/L NaCl 溶液梯度洗脱，分管收集洗脱液，采用 “2. 2” 项下方法，以洗脱管数 为横坐标，多糖浓度为纵坐标绘制洗脱曲线。
将莼菜多糖各组分导入 GPC 软 件，调用标准曲线，得出莼菜多糖 各组分的Mw、Mn 和 D 等， 结果见表 1，莼菜多糖的分子量 分布为 (1. 0507 ～ 1. 5208) × 106 Da，分子量较大。 图 3 显示，高效凝胶渗透色谱
图出峰时间单一，可知莼菜多糖各
组分均一性良好。
感谢在座各位聆听
莼菜多糖的分离纯化
汇报人：丁楚蔚
PPT制作：丁楚蔚、汪心妍 背景资料：谭晓菁、江淑华
研究背景
目录
实验步骤与结果 总结与展望
1
研
究
背
景
莼菜
• 睡莲科，多年生水生草本Байду номын сангаас物，又名马蹄草，
• 有调节免疫、抗氧化、抗病毒、抗炎、抗菌、降血糖、 降血脂等功效 ， • 含酸性多糖、多酚、蛋白质、氨基酸、维生素、组胺及 微量元素， 茎周围的黏液质中，是莼菜发挥药效的主要物质基础。
Sepharose CL-6B； 透析
袋；蒽酮、硫酸；纯化水
粗多糖的提取
除去脂溶性成分
取250g莼菜喷干粉，加无水乙醇 2.5 L，60 ℃ 旋转回流提取2 h，过滤， 重复操作 1 次，除去脂溶性成分，滤
渣烘干。
莼菜喷干粉
新鲜莼菜嫩叶，经清 水 淋 洗 、 均 浆机 剪 切 、 喷雾干燥得莼菜喷干粉 。
仪器与材料
仪器
Agilent 1200 HPLC 色谱仪 AE240 分析天平 UV-2102PC 紫外可见分光 光度计 FD-1C-55 冻干机 旋转蒸发仪 超滤仪 DZG-6020 减压干燥箱
材料
莼菜嫩叶；无水乙醇；
NaOH；盐酸；木瓜蛋白酶；
聚酰胺树脂； DEAE 纤维 素 DE-52；琼脂糖凝胶
莼菜粗多糖
加40倍 0. 3 mol/L NaOH 溶液，70 ℃ 加热搅拌提取 2 h，加盐酸中和，过滤，滤液 浓缩，加入无水乙醇至 67% ，4 ℃静置过夜， 4 500 r/min 离心 20 min，80% 乙醇洗涤 3 次，沉淀减压干燥，得 83 g 莼菜粗多糖。
粗多糖纯化
酶解灭活脱蛋白