薄层色谱法
薄层色谱（Thin-Layer Chromatography: TLC）是在玻璃板上，塑料片或者铝箔覆盖有很薄的一层吸附剂的一种用于分离混合物的色谱法。
薄层板展开的方法是其中一端被溶剂浸润后，溶剂在吸附剂的间隙中扩散，溶剂往上方移动进行爬板（毛细管现象）。如果在板子上点样混合物的话，那么化合物也会随着溶剂的移动而移动。这个时候，由于化合物与固定相（吸附剂）的吸附度，移动相（溶剂）的亲和性的差异，混合物中各个化合物的移动速度与移动距离（Rf值）也不同。也是利用这个原理，该方法可以用于有机化合物的分离纯化。特别是在有机合成中，作为吸附剂的有硅胶，矾土，纤维素等等，展开溶剂的话通常有乙酸乙酯/正己烷体系，二氯甲烷/甲醇体系等等，根据具体情况运用到的体系也不同，这里就不多举例了。
TLC点板与跑板方法（出处：https://www.360docs.net/doc/a519211919.html,）
TLC跑板法可以称为追踪一个反应的眼睛，是十分简便但又特别重要的分析手段。往往不重视TLC或者对此方法掌握的不是很好的人，做实验也是多少有点问题的。
而怎样点板比较好呢？通常如上图所示，左边是原料，右边是混合物，中间是原料与反应混合物，这样的一个点板方式小编认为是比较推荐的。
而中间的这个原料与反应混合物叠加的点有以下三点作用：
由于展开的方法问题有可能造成爬板的时候不是直线爬，所以有时候原料与反应混合物的Rf值可能差距不大，会分不清楚
避免由于反应混合物中溶剂残留的问题，影响到Rf值
有时候反应混合物在点板的时候会分解，有可能观测不到。
除了以上三点以外，我想这样点板还有很多好处，希望能够作为参考。
另外展开后，如何确认点的位置，一般我们用UV 或者显色剂的方法来观测，这在我们chem-station 以前的文章（各种TLC显色剂的调配方法）中有详细阐述，有需要的同学可以作为参考。
薄层色谱法
薄层色谱法 薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 1.仪器与材料 （1）薄层板 市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。 自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板。最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求粒径为10～40μm，加水或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.2%~0.5%）适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。使用涂布器涂布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。 （2）点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 （3）展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或有双槽展开缸，展开时须能密闭，水平展开用专用的水平展开缸。 （4）显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出，浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 （5）检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。 （6）薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。 2.操作方法 (1) 薄层板制备 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。如在存放期间被
薄层色谱方法总结
薄层色谱方法总结 1.方法原理 (1)流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。 (2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极- (诱导) - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。 2.溶剂 使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比(如正丁醇- 冰乙酸- 水= 4：1：1，V/V/V)，或者绝对量(如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇)。其总量应足以使TLC/HP LC板的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相(上层或下层)，备用。 一、溶剂选择规则： 1、考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。 2、先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少量极性大的溶剂 3、一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶。 4、混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。 5、展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。 6、一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂),达到最佳效果;如果没有分开的迹象(斑点较“拖”)，最好是换溶剂。 二、展开剂的选择条件： ①对的所需成分有良好的溶解性; ②可使成分间分开; ②待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间; ③不与待测组分或吸附剂发生化学反应; ⑤沸点适中，黏度较小; ⑥展开后组分斑点圆且集中; ⑦混合溶剂最好用新鲜配制。 三、溶剂极性参数表 环已烷:-0.2、石油醚(Ⅰ类，30~60℃)、石油醚(Ⅱ类，60~90℃)、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2 1、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离; 2、中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离; 3、强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。 四、展开剂的选择 物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。 以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。 1、类极性较小的挥发性物质 冰片：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚朴酚：苯-醋酸乙酯(9:1.5)、 α-香附酮：苯-醋酯乙酯-冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：环己烷-醋酸乙酯(3:1)， 结论：以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的作用，
薄层色谱法原理
薄层色谱法原理 薄层色谱法（TLC）是一种以固体膜为基础的分离和分析技术， 它可以有效地对多组分的混合物进行分子级的分离和分析，使用简单、便捷、成本低廉，灵敏度高、分离效果好，同时收集物质的灵敏度也可以达到微克的水平，因此在分离和分析有机物中也广泛应用。 薄层色谱法的原理是将被分析物质涂布在一个固体膜上，在被分析物质有该被可以溶解在固体膜上的溶剂中，经过固体膜上的移动和分离，被分析物质会在固体膜上形成一条条浓薄不一的条带。由于被分析物质和其它物质在溶剂上移动和分离的速度不同，当移动到一定高度时便可以形成不同的条带，由此可以区分出不同的被分析物质。 薄层色谱法的实际操作也比较简单，首先需要将混合物分解，然后将分解出的溶质用一定的溶剂溶解，将溶液均匀地涂布在确定的固体膜上，当膜在移动到另外一端，条带便可以形成，然后便可以进行色谱检测，从而分析出不同的混合物组分，可以对不同的混合物组分进行定量分析。 薄层色谱法在分析有机物方面应用最广泛，特别是配和染料荧光素类，可以做出比较精确的分析和分离。另外，薄层色谱法在解决一些复杂的混合体系和微量物质的分析学方面也有很好的作用。例如，薄层色谱法可以有效地对系统性染料进行分析和分离分析，可以定量分析矿物溶剂及其它物质，还可以运用色谱技术分析蛋白质和核酸分子等。 薄层色谱法在实际应用中，还可以采用热法来获得更好的分离效
果，即在被分析或检测物质在固体膜上运动的过程中，采取一定的温度对它们进行加热，以提高它们的分离效果，也可以改变溶剂的浓度，增加移动溶剂的物理性质，从而获得更好的分离效果。 总之，薄层色谱法是一种简单、便捷、成本低廉、灵敏度高、分离效果好的分离和分析技术，在有机物分析和检测以及复杂混合体系和微量物质的分析学等方面有着广泛的应用。它的操作简单，原理明确，灵敏度高，能够有效地分离和分析混合物中的各种组分，是一种有效的色谱分析方法。
0502薄层色谱法
0502薄层色谱法 薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器 用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适 宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检査或含量测定。 1.仪器与材料 (11薄层板按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝 板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。固定相中可加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、G、H表示含或不含石膏黏合剂。F254为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。按固定相粒径大小分为普通薄层板（10?4(^m)和髙g薄层板(5?10pm)0 ^保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和 化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。固定相颗粒大小一般要求粒径为10?40pm。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。 (2)点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全 自动点样器材。、 (3>展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专 用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的
水平展开槽。 (釣显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾 器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸溃显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 (5)检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光 光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用。暗箱光源应有足够的光照度《 (6)薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上 有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。 2.操作方法 (1)薄层板制备 市售薄层提临用前一般应在110°C活化30分钟。聚 ■■■■ _IM_I -—* 酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板、塑料薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的固定相层不得有破损。如在存放期间被空气中杂质污染，使用前可用三氣甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，晾
tlc薄层色谱法
tlc薄层色谱法 薄层色谱法（TLC），系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值（Rf）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值（Rf）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。 薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。 吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。 物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。而处于固体表面的
分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子 之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。 例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的Rf值(后面介绍Rf 值)对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以 定量。 薄层板制备 薄层板 薄层板 除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.2～0.3mm)，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。
薄层色谱法
薄层色谱法 一、概述 色谱法(又称层析法)，是一种物理的分离方法。色谱法总有两个相，一个固定相和一个流动相，因为流动相的流动以及各成分在两相中的性质的差别而得到分离。薄层色谱法，是色谱法中应用最普遍的方法之一，其特点:分离速度快、效率高、适用性强、操作简便。在植物成分研究、生物化学、药物化学、卫生化学、毒物检验中广泛用来分离、精制和鉴定化学物质等。 二、色谱法分类 (一). 按分离原理分 1.吸附色谱法:利用被分离物质在吸附剂上被吸附能力的不同，用溶剂或气体洗脱使各组份得到分离;常用吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。 2.分配色谱法:利用被分离物质在两相中分配系数的不同使各组份得到分离;其中一相被涂布或键合在固体载体上，称固定相，另一相为液体或气体，称流动相;常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。 3.离子交换色谱法:利用被分离物质在离子交换树脂上交换能力的不同，使各组份得到分离;常用的离子交换树脂有不同强度的阳离子交换树脂、阴离子交换树脂，流动相为水或含有有机溶剂的缓冲液。 4.排阻色谱法:分子排阻色谱法又称凝胶色谱法，利用被分离物质分子大小的不同导致在填料上渗透程度不同，使各组份得到分离;常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物或玻璃珠等，根据固定相和供试品的性质选用水或有机溶剂作为流动相。 (二).按分离方法分
1. 柱色谱法分吸附柱色谱和分配柱色谱两类。吸附柱色谱中吸附剂颗粒通常多采用直径为0.07-0.15mm的颗粒，尽可能保持大小均匀，柱长一般为30,100cm 或大于100cm。适用于分离或精制较大量的样品，多组份分离。但整个分离过程需要几小时甚至几天才能完成。 2. 薄层色谱法原理上属吸附层析法。以玻璃板、塑料板或铝基片为载体， 在载体上涂布均匀的固定相，把要分析或分离的样品点在薄层板上，用展开剂展开，再用显色剂显色的分配色谱。将要分离的混合物点在用固定相均匀涂布的薄层板上，用适当的展开剂在密闭的层析缸中展开，被分离的组分不随展开剂流动，而是选择性地保留在原点和溶剂前沿之间，被分离的化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf)表示，Rf=0，表示样品留在原点，Rf=1，表示样品不被保留，置紫外灯下或直接喷显色剂即可观察。优点:操作、显色比较方便，薄层色谱法斑点集中，薄层板耐腐蚀。 3. 纸色谱法以纸为载体,以纸上所含水分或其它物质为固定相，用展开剂展开的分配色谱。可用比移值(Rf)表示各组份的位置。操作分上行法和下行法两种。优点:操作、显色比较方便，以纸为支持剂，没有薄层色谱法铺层的麻烦;缺点:不能用腐蚀性显色剂，分离效果不如薄层色谱法斑点集中。 4. 气相色谱法气相色谱法流动相为气体(载气)，色谱柱内装吸附剂、高分子多孔小球或涂有固定液的载体。注入进样口的供试品被加热气化，被载气带入色谱柱内分离后，各组份先后进入检测器，用记录仪记录色谱图。操作形式上属于柱色谱法，按原理可分为吸附及分配色谱。优点:高效能、高选择性、高灵敏度、用量少、分析速度快、并可制备高纯物质。 5. 液相色谱法液相色谱法流动相为液体，使用较细的色谱柱(直径1,4mm)，使用5,40um颗粒的吸附剂，在洗脱溶剂上加高压，得到较好的流速和较快的分
薄层色谱法(TLC)
单一溶剂的极性顺序为（从小到大）： 石油醚→环己烷→四氯化碳→三氯乙烯→苯→甲苯→二氯甲烷→氯仿→乙醚→乙酸乙酯→乙酸甲酯→丙酮→正丙醇→甲醇→吡啶→乙酸 混合溶剂的极性顺序（从小到大）： 苯∶氯仿（1+1）→环己烷∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶丙酮（95+5）→苯∶丙酮（9+1）→苯∶乙酸乙酯（8+2）→氯仿∶乙醚（9+1）→苯∶甲醇（95+5）→苯∶乙醚（6+4）→环己烷∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶乙醚（8+2）→氯仿∶甲醇（99+1）→苯∶甲醇（9+1）→氯仿∶丙酮（85+15）→苯∶乙醚（4+6）→苯∶乙酸乙酯（1+1）→氯仿∶甲醇（95+5）→氯仿∶丙酮（7+3）→苯∶乙酸乙酯（3+7）→苯∶乙醚（1+9）→乙醚∶甲醇（99+1）→乙酸乙酯∶甲醇（99+1）→苯∶丙酮（1+1）→氯仿∶甲醇（9+1） 1．薄层板的选择和铺制 （1）薄板的选择最常用的薄板是玻璃板，其大小选择：根据目的、样品量、组分的数目多少和展开的方式等综合而定。 小量制备：待分离组分总量在0.5～1g左右，可采用400mm×350mm的薄板1~3块即可。预试或定性分析：用单项展开时，多用载玻片（200mm×50mm，200mm×25mm或75mm ×25mm）。双向展开或小量制备时，一般采用200mm×200mm或400mm×200mm的大板。玻璃板要求：平整、光滑、干净。 （2）制板方法：干铺法和湿铺法 干铺法 概念：就是将吸附剂颗粒或粉末均匀地平铺在玻璃板上的方法，所制得薄板称为干板。 吸附剂粒度要求：一般为150~200目左右。 涂铺方法：把玻璃板平放在平台上或实验台面上，先将吸附剂大致平摊在玻板上，然后两手握住一根带有两个套圈的粗玻璃棒，按照图所示方向推动，把多余的吸附剂除去，便可得到一块均匀的薄板。玻棒套圈可以用塑料管或胶布等制成。 两个套圈的厚度和距离，便是薄层的厚度和宽度。 湿铺法 概念：将溶剂或含粘合剂的溶剂和吸附剂按一定的比例，[一般硅胶为30g/(75～90) ml，氧化铝为25g/50ml]，加到一起，调成糊状，然后再将糊状物均匀的铺在薄板上的方法。 湿铺法的操作步骤： ①调糊 硅胶G、氧化铝G、硅胶GF254或不含粘合剂的吸附剂如硅胶H、氧化铝H的充分调匀，均是取1份吸附剂，加入2~3份水。 用CMC作粘合剂：0.5%羧甲基纤维素钠溶液100ml, 加硅胶H（200～250目）30g或氧化铝50g，充分调匀后，即可涂铺。 用淀粉作粘合剂时：取硅胶H（200～250目）0.95份，加0.05份淀粉（可溶性淀粉不能用），加水2-3份，将容器放在沸水浴上加热，不停搅拌下煮沸5分钟，直到获得最大的粘稠度，再加水1份，再煮1-2min，调匀，冷后涂铺。 纤维素粉作粘合剂：纤维素粉1份，加水（或丙酮）5～6份调成糊状后涂铺。 聚酰胺作粘合剂：聚酰胺1g，加6mL 85%甲酸，搅拌溶解后，再加70%乙醇3mL，调匀后，
薄层色谱法的应用
（一）薄层色谱的应用 薄层色谱技术的优点：薄层图谱以彩色图像呈现，直观、易于辨认；广泛的适用性，至今为多国药典用于植物药的鉴别；多样品在同板同时平行比较；色谱可供多层次分析，制成的摄影可长期保留；可利用不同参数进行多次分析计算，不必重复分离。 TLC在中药质量控制中的主要应用：鉴别、半定量评估、化合物定量分析。在没有任何化学对照品的情况下，对比TLC板上相同位置斑点颜色，也能够很容易地识别不同药材。半定量评估包括过程控制、稳定性测试、限量检查三个方面。在cGMP环境下，记录原料在生产过程的每一步中如何转换/保存、如何与成品比较、每一批产品的组分如何保持稳定等很有必要。利用HPTLC指纹图谱，通过比较斑点数目、顺序和相对强度（或者光密度扫描产生的峰）可以完成这些工作。且可以用鉴定过的原料或有独立规范的成品作为参比物。稳定性测试是HPTLC比较新的一个应用，用以确定提取物和成品的保质期。测试是要确认产品在规定时间内能否保持稳定。另一方面，方法要能检测到所有的降解产物。倘若方法经过严格验证，可用半定量检测进行稳定性测试，对被测的标示物无需测定其绝对量。采用定量配制的对照品对照或对照品稀释对照。供试品溶液色谱中待检查的斑点应与对应的对照品溶液或系列对照品溶液的相应斑点比较，颜色（或荧光）不得更深。或照薄层色谱扫描法操作，峰面积值不得大于对照品的峰面积值。必要时应规定检查的斑点数和限量值。化合物定量分析化合物定量分析对TLC来说是最高要求。由于受到该技术分
离能力的限制，像植物材料这样的复杂样品对其所有组分往往不能实现基线分离，因而大多数分析采用HPLC。 薄层色谱方法标准操作规程：薄层色谱是一开放体系，环境因素对色谱层析行为影响很大。而薄层色谱实验过程各单元独立，实验人员参与的步骤操作多，因此不同人的操作技巧会明显地影响色谱质量。同一份样品，往往在不同人或不同实验室得出完全不同的结果，这就要求必须建立薄层色谱SOP。而薄层色谱方法标准操作规程包括以下方面：代表性样品的收集；薄层色谱条件的确立；样品提取与前处理、点样、饱和、展开剂、不同品牌薄层板、温度、湿度、耐用性的考察；薄层板标注、文件名称标注、图谱输出等。其中展开剂的选择和优化属关键环节。
薄层色谱法
薄层色谱法 概要:薄层色谱法是平面色谱法中应用最广泛的方法之一。它是以涂布于支持板上的支持物作为固定相,以合适的溶剂为流动相,对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法,从50年代发展起来至今,仍被广泛采用。 关键词:薄层分析定量分析仪器色谱 基本原理 薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法,它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同,使在移动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中,连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,从而达到各成分的互相分离的目的。 薄层层析可根据作为固定相的支持物不同,分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。 吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面,吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上,都可能发生吸附现象。 物质分子之所以能在固体表面停留,这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部,分子之间相互作用的力是对称的,其力场互相抵消。而处于固体表面的分子所受的力是不对称的,向内的一面受到固体内部分子的作用力大,而表面层所受的作用力小,因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响,就会被吸引而停留下来。吸附过程是可逆的,被吸附物在一定条件下可以解吸出来。
在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开 此表面的分子之间可以建立动态平衡,称为吸附平衡。吸附层析过程就是不 断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。 仪器与材料 (1) 载板 用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板,对薄层板的要求是:需要有 一定的机械强度及化学惰性,且厚度均匀、表面平整,因此玻璃板是最常用的。载板可以有不同规格,但最大不得超过20×20,玻璃板在使用前必须洗净、干燥备用。 玻板除另有规定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm ×20cm的规格,要求光滑、平整,洗净后不附水珠,晾干。 (2) 固定相(吸附剂)或载体 薄层层析硅胶薄层层析硅胶最常用的有硅胶G、硅胶GF〈[254]〉、硅胶H、硅胶HF〈[254]〉,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F〈[254]〉等。其颗粒大小,一般要求直径为10~40μm。薄层涂布,一般可分无粘合剂和含粘合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻璃板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合剂,一般常用10~15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小时),混匀后加水适量使用,或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5~0.7%)适量调成糊状,均匀涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。 (3) 涂布器 应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 (4) 点样器
色谱分析薄层色谱法
色谱分析薄层色谱法 薄层色谱是一种微量、迅速和容易的色谱办法。它可用于分别混合物，鉴定和精制化合物，是近代有机分析化学中用于定性和定量的一种重要手段。它兼有柱色谱和纸色谱的优点，它绽开时光短，分别效率高（可达到300一4000块理论塔板数），需要样品少（数微克）。假如把吸附层加厚，试样点成一条线时，又可用作制备色谱，用以精制样品。薄层色谱特殊适用于挥发性小的化合物，以及那些在高温下易发生变幻、不宜用气相色谱分析的化合物。薄层色谱的原理和柱色谱类同，属于固--液吸附色谱。样品在涂于玻璃板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相）之间举行分别。常用的吸附剂是和。各种化合物的吸附能力各不相同，在绽开剂上移时，它们举行不同程度的解吸，从而达到分别的目的。假如采纳和为支撑剂，则其原理为分配。薄层色谱的操作办法（如点样、绽开、显色等）都和纸色谱基本相同。显色剂除能用法纸色谱的显色剂外，还可采纳腐蚀性的显色剂，如浓、浓等。斑点位置亦以比移值表示。 (1)吸附剂薄层色谱的吸附剂最常用的是和，其颗粒大小普通为260目以上。颗粒太大，绽开时溶剂移动速度快，分别效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不抱负。国产硅胶有：(含有煅石膏作黏合剂）、(不含煅石膏，用法时需加入少量、等作黏合剂）和硅胶F254（含有荧光物质），后者用法之后可在紫外光下观看，有机化合物在亮的荧光板上呈暗色斑点。硅胶常用于湿法铺层。 (2)铺层试验室常用20cmx5cm、20cmx10cm,20cmx20cm的玻璃板来铺层。玻璃板要预先洗净擦干。铺层分湿法和干法两种。湿法铺层：先将吸附剂调成糊状，例如，称取硅胶G20一50g，放入研钵中，加入水40一50ml，调成糊状。此糊大约可涂5cmx20cm的板20块左右，涂层厚0.25mm。注重，糊易凝聚，所以必需现用现配，不宜久放。为了得到厚度匀称的涂层，可以用涂布器铺层。将洗净的玻璃板在涂布器中间摆好，夹紧，在涂布槽中倒入糊状物，将涂布器自左至右快速推动，糊状物就匀称涂于玻璃板上（图2.34)。假如没有涂布器也 第1页共2页
薄层色谱法
第二部分色谱分析 第一章薄层色谱法（TLC） 一薄层色谱法概述 薄层色谱法是一种基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配或保留而将其分离的方法。与HPLC不同，TLC将固定相涂铺在栽板上，使之形成均匀的薄层。被分离的样品溶液点加在薄层板下沿的位置，再把下沿向下放入盛有流动相（深度约5mm）的密闭缸中，进行色谱展开，实现混合组分分离。被展开的组分斑点即色谱谱带，通过适当技术对色谱谱带进行处理可得到定性和定量的检测结果。 薄层色谱法具有技术比较简单，操作容易，分析速度快，高分辨能力，结果直观，不需昂贵仪器设备就可以分离较复杂混合物等特点。 二薄层色谱法中的薄层板、薄层板的涂铺、点样和展开（一）薄层板 TLC分离的选择性主要取决于固定相的化学组成及其表面的化学性质。可通过改变涂层材料的化学组成或对材料表面进行化学改性来实现改变薄层色谱分离的选择性。此外，固定相的物理性质，如比表面积、比空容、平均孔径等也对其色谱行为产生影响。 （1）载体对TLC载体的基本要求为：机械强度好、化学惰性好（对溶剂、显色剂等）、耐一定温度、表面平整、厚度均匀、价格适宜。 （2）固定相TLC固定相包括改性固定相和未改性固定相两类。硅胶和氧化铝是最常用的两种未改性固定相。 （3）粘合剂在制备薄层板时，一般需在吸附剂中加入适量粘合剂，其目的是使吸附剂颗粒之间相互粘附并使吸附剂薄层紧密的附着在载板上。常用的粘合剂可分为无机粘合剂和有机粘合剂两类。 （4）荧光指示剂荧光指示剂是便于在薄层色谱图上对一些基本化合物斑点（无颜色斑点、无特征紫外吸收斑点）定位的试剂。加入荧光指示剂后，可以使这些化合物斑点在激发光波照射下显出清晰的荧光，便于检测。 （二）薄层板的涂铺