疫苗制备工艺

灭活疫苗 减毒活疫苗 亚单位疫苗
基因工程亚 蛋白质疫苗 单位疫苗
基因缺失疫 核酸疫苗 苗
载体疫苗 核酸疫苗
多糖疫苗
疫苗制备
概述
组分疫苗
是用单一组分制备的疫苗。
类毒素疫苗：用丧失毒性而保留免疫原性的毒素所制 成的疫苗，如白喉类毒素、破伤风类毒素
亚单位疫苗：病原微生物的表面抗原成分制成的疫苗， 如乙肝表面抗原疫苗。
• 物理方法，化学方法
疫苗制备
灭活技术
一、灭活技术
•物理方法灭活
• 加热：使蛋白质变性失活，病原体失去传染能 力。菌毒液于水浴（56－60℃），维持1小时。 受热要均匀，注意不同病原体的耐热性。如霍 乱疫苗、布氏菌制剂、假单胞杆菌疫苗等。
• 紫外线：使核酸形成TT二聚体，失去遗传功能。 最大限度保留了完整抗原性和免疫原性，但灭 活程度不完全，有光复活的可能性，未在实际 中应用。
疫苗制备
灭活技术
化学方法灭活
一、灭活技术
• 甲醛，β-丙内酯，磷酸三丁酯，丙酮，乙烯亚胺， 双乙烯亚胺，戊二醛，硫柳汞。
• 甲醛灭活：破坏蛋白质的结构，使核酸烷基化。过 程复杂，有时抗原性受到破坏，但病原体仍然存活。 在实际操作中要严格控制各种条件，如温度、浓度、 时间和pH等，保证疫苗的安全和稳定性。
•体外减活 •温敏性突变 •化学诱变
疫苗制备
减活技术
体外减活技术
体外减活：连续传代减活。病毒可在单一宿主 中反复传代，也可在异源宿主中繁殖连续传代
登革热病毒在狗肾或非洲绿猴肾细胞上系列传 代减毒，达到人用安全性。
卡介苗，传代230代，得到一株致病力完全丧失 的活菌株。
疫苗制备
减活技术
冷适应性减活技术
3）防腐剂：防止外来微生物污染。硫柳汞、2-苯氧 乙醇、氯仿等。
4）稳定剂：乳糖、明胶、山梨醇等。
5）灭活剂：丙酮、酚、甲醛等。
6）其他成分：缓冲液、盐等。
疫苗制备
概述
三、疫苗发展简史
• 1721:英国医师 Edward Jenner，感染牛痘的人不会再 感染天花。
• 1796: Jenner，将挤奶员手上的牛痘溃疡接种8岁男孩 手臂，未感染天花。疫苗接种开始。
• 类预防类生物制品；通过免疫机制预防疾病
• 概念：通过注射或黏膜或口服接种，诱导机体产 生对特定病原体的特异性抗体或细胞免疫，获得 保护或消灭治疗该病原体的能力。
特殊性：用于健康人群，婴幼儿和儿童为主 要求：绝对安全
疫苗制备
概述
疫苗的分类
材料来源
传统疫苗
新型疫苗 免疫原成分
细菌性疫苗 病毒性疫苗 组分疫苗
收集菌体或细胞，破碎、 过滤、色谱等制备抗原
加入适当的佐剂或生理缓 冲体系制剂成型。
疫苗制备
主要技术
第二节 疫苗制备的主要技术
• 灭活技术 • 减活技术 • 质量控制
疫苗制备
灭活技术
一、灭活பைடு நூலகம்术
• 灭活是破坏微生物的生物学活性，使其 丧失感染力和致病性，尽可能最大限度 保留免疫原性和抗原性。
• 灭活剂：灭活微生物的试剂与化学物质。
• 甲醛一般浓度为0.2-0.4%。可灭活多种病毒和细菌， 乙脑炎病毒、脊髓灰质炎病毒、流感病毒、狂犬病 毒、人巨噬病毒、甲肝病毒和HIV等，伤寒杆菌、棒 状杆菌、绿脓杆菌。
疫苗制备
减活技术
二、减活技术
减活：使强菌株、毒株转化为弱毒株，残留毒力达 到隐性感染，但不诱生临床症状的安全有效的程度
设计上要在毒力和免疫原性之间平衡，残留毒力达 到安全性和有效性，而不诱发疾病。毒力与免疫原 性具有一定相关性，毒力越大，免疫原性越强。过 度减毒将导致失去免疫原性。
特点：多种免疫原性和稳定性的抗原，接种途径简便， 一次接种产生多种疫苗肺炎。
结合疫苗是化学方法将两种以上抗原相互偶合制成的 疫苗
疫苗制备
概述
二、疫苗的组成
1）抗原：减活或灭活的病毒或细菌、或提取物、有 效成分等。
2）佐剂：能特异性地与抗原结合，增强免疫应答反 应的物质，无毒安全。金属盐类，铝佐剂和油制佐 剂。如Al(OH)3，弗氏佐剂。
制药工艺学
Pharmaceutical Technology
疫苗制备工艺
第一节 疫苗概述 第二节 疫苗制备主要技术 第三节 细菌性疫苗制备工艺 第四节 病毒性疫苗制备工艺
疫苗制备
概述
第一节 疫苗概述
一、疫苗概念 二、疫苗的组成 三、疫苗的发展 四、疫苗制备的基本过程
疫苗制备
概述
1、疫苗(Vaccine）的概念
• 1901：von Behring，发现白喉毒素，获得诺贝尔奖。 • 1909：Calmetee和Guerin在甘油胆汁马铃薯培养基
上，传代230代，制成减毒活疫苗，即卡介苗。
• 1955：脊髓灰质炎灭活疫苗生产。 • 1986：重组乙肝疫苗生产。 • 1990：B型流感嗜血杆菌疫苗，多糖结合疫苗生产。 • 1995：水痘疫苗、无细胞型百日咳疫苗生产。 • 2000：结核肺炎球菌疫苗生产。
•脂多糖疫苗：胰蛋白酶水解伤寒杆菌制备。
•优点：减少了机体的反应 •缺点：分子量小，抗原性弱，要加入佐剂，增强免疫 效果。
疫苗制备
概述
联合疫苗
能预防多种疾病的联合制剂，不同抗原进行物理混合 后制成。
多联疫苗：用于预防不同病原体引起的疾病，如白百 破联合疫苗。
多价疫苗：用于同一病原体的不同菌株或不同血清型 引起的同一疾病，如肺炎多糖疫苗，由23种不同血 清型的细菌多糖组成，只能预防肺炎链球菌。
• 1798：医学界正式接受疫苗预防疾病。
• 1884：Pastuer，第一个病毒减活疫苗—狂犬病疫苗。
• 1885：Ferran，霍乱肉汤培养物，开始疫苗的注射。
• 1870：Pasteur，第一个细菌减活疫苗——鸡霍乱疫苗
• 1897：Wright制成伤寒全菌苗。
疫苗制备
概述
三 、疫苗发展简史
疫苗制备
概述
四、疫苗制备的基本过程
•制 备 的 疫 苗 需 进 行生化和免疫及安 全性检定或动物实 验，确定其安全性 和免疫原性。
•疫 苗 制 备 的 生 产 人员、厂房、实验 动物及其他条件要 严 格 遵 循 GMP 的 要 求和管理。
对菌毒株进行优化和筛选， 建立合格完善的毒种库
在完全控制条件下，进行菌 体或细胞培养，合成抗原。
冷适应性稳定减毒策略：低温下能生长，失去毒力 ，达到减毒目的。
病毒表现型和体内减毒定向选择，连续或分段培养 ，低温下的冷适应株或温度敏感株。
流感病毒野毒株适应在较低温度下生长，使其不能 在较高温度下复制，来达到减毒的目的。如H2N2毒 株32℃在鸡胚传20代，在25℃传17代，28℃传8代， 25℃传22代，获得了更加减毒的冷适应株。