HPLC同时测定赤芍和白芍中没食子酸等6种成分的量

收稿日期：2014-12-17 基金项目：国家自然科学基金资助项目（30901968） 作者简介：余捷婧，女，硕士在读。E-mail: jiejing_yu@163.com *通信作者 杨 柳，女，研究员，硕士生导师，主要从事中药活性成分和质量评价研究。Tel: (020)39318778
E-mail: yangliume@aliyun.com
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对照品（230 nm） 6
1 材料与方法 1.1 材料与仪器
赤芍 Paeoniae Rubra Radix 和白芍 Paeoniae Alba Radix 药材产自我国内蒙古、吉林、四川、浙 江、安徽、上海、江西、广东、台湾、云南、香港 等地，经广东省中医院杨柳教授鉴定为毛茛科植物 芍 药 Paeonia lactiflora Pall. 或 川 赤 芍 Paeonia veitchii Lynch 的干燥根。没食子酸、芍药内酯苷、 芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖、苯甲酰芍 药苷对照品均由本实验室制得，质量分数均高于 98%。没食子酸甲酯对照品质量分数大于 98%（批 号 27975，上海一基实业有限公司）。甲醇、乙腈均 为色谱纯，购自美国 Fisher 公司；其他化学试剂均 为分析纯，购自广州化学试剂厂；超纯水经过 Milli-Q 系统纯化制备。美国 Waters Alliance 2695 高效液相色谱仪；十万分之一电子分析天平（Mettler Toledo AB135-S 型）。 1.2 色谱条件
图 1 对照品与样品 HPLC 色谱图 Fig.1 HPLC of reference substance and sample
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月
关键词：赤芍；白芍；没食子酸；没食子酸甲酯；芍药内酯苷；芍药苷；1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖；苯甲酰芍药苷；HPLC
中图分类号：R286.6
文献标志码：A
文章编号：0253 - 2670(2015)11 - 1673 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.11.021
Simultaneous quantitative determination of six active compounds from Paeoniae Rubra Radix and Paeoniae Alba Radix by HPLC
YU Jie-jing1, WU Jin-xiong1, LIANG Ya-feng2, XU Shun-jun3, YANG Liu1
色谱柱：Waters symmetry C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：A 相为 0.1%磷酸水溶液（pH 2.7），B 相为乙腈；梯度洗脱：0～5 min，10%～15% B；5～25 min，15%～22% B；25～45 min，22%～ 70% B；45～46 min， 70%～80% B；46～48 min， 80% B；体积流量 0.8 mL/min；检测波长为 230 nm 和 270 nm；柱温 30 ℃；进样量 10 μL。对照品和 样品的色谱图见图 1。
摘 要：目的 建立同时测定赤芍 Paeoniae Rubra Radix 和白芍 Paeoniae Alba Radix 中没食子酸、没食子酸甲酯、芍药内酯 苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷的 HPLC 方法，测定和比较 32 批不同产地和收集地赤芍和白芍中
6 种化学成分的量。方法 采用 HPLC 法进行测定，流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，体积流量 0.8 mL/min，柱温 30 ℃，检 测波长为 230 nm 和 270 nm。结果 结果显示，没食子酸、没食子酸甲酯、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄 糖、苯甲酰芍药苷分别在 0.783～50.10、1.094～70.00、2.367～151.5、7.823～500.6、3.125～200.0 和 0.348～22.25 μg/mL 内 具有良好的线性关系（r2＝0.999），平均回收率分别为 102.1%、98.88%、99.25%、100.4%、104.2%、100.6%。结论 赤芍 和白芍药材样品中芍药内酯苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、没食子酸和没食子酸甲酯的量差异较显著，除芍药苷外，单萜 苷类成分在白芍中量明显较高，而多元酚类化合物在赤芍特别是川赤芍中量普遍居高。
1. Guangdong Hospital of Chinese Medicine, Guangzhou 510120, China 2. The Hospital of Qingxi, Dongguan 523660, China 3. Imvin Pharmaceutical Co., Ltd., Guangzhou 510530, China
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月
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HPLC 同时测定赤芍和白芍中没食子酸等 6 种成分的量
余捷婧 1，吴金雄 1，梁亚凤 2，许舜军 3，杨 柳 1*
1. 广东省中医院，广东省中医药科学院，广东 广州 510120 2. 东莞市清溪医院，广东 东莞 523660 3. 广州万正药业有限公司，广东 广州 510530
Abstract: Objective A high performance liquid chromatographic method was established to simultaneously quantify the gallic acid, methyl gallate, albiflorin, paeoniflorin, 1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose, benzoylpaeoniflorin of red peony root, and white peony root. Methods The content of six components from 32 batches of samples collected from different product areas and markets was determined and compared by means of this established method. The mobile phase comprised of acetonitrile and water containing 0.1% phosphoric acid. Flow rate was 0.8 mL/min and column temperature was 30 ℃. Chromatography was monitored at 230 and 270 nm. Results The correlation coefficients between concentration and chromatographic peak area of gallic acid, methyl gallate, albiflorin, paeoniflorin, 1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose, and benzoylpaeoniflorin, respectively were over 0.999 9 in the ranges of 0.783 0— 50.10, 1.094—70.00, 2.367—151.5, 7.823—500.6, 3.125—200.0, and 0.348 0—22.25 μg/mL. The average recoveries of the six compounds were 102.1%, 98.88%, 99.25%, 100.4%, 104.2%, and 100.6%, respectively. Conclusion All the contents of albiflorin, 1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose, gallic acid, and methyl gallate show a remarkable difference between Paeoniae Rubra Radix and Paeoniae Alba Radix. And the latter usually contains more monoterpene glycosides than the former dose except paeoniflorin. On the other hand, Paeoniae Rubra Radix, especially originating from Paeoniae veitchii always contains more polyphenols than Paeoniae Alba Radix dose. Key words: Paeoniae Rubra Radix; Paeoniae Alba Radix; gallic acid; methyl gallate; albiflorin; paeoniflorin; 1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose; benzoylpaeoniflorin; HPLC
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中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月
芍药为中医临床常用药材，应用十分广泛，可 用于治疗常见的免疫系统、心血管系统疾病以及肿 瘤等。芍药有赤芍 Paeoniae Rubra Radix 和白芍 Paeoniae Alba Radix 之分[1]，其中赤芍为毛茛科植 物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 或川赤芍 Paeonia veitchii lynch 的干燥根，而白芍为毛茛科植物芍药 水煮去皮后晒干的根。虽然赤芍和白芍在生物基源 上有许多共同特征，但在临床应用方面却有明显的 区别。在中医临床上，赤芍、白芍同为寒性药，具 有清热的共性，但白芍属补虚药，长于补血平抑肝 阳，赤芍属清热药，偏清热凉血祛瘀。而从化学组 成来看，赤芍和白芍均以单萜苷及多元酚类化合物 为代表性成分，这是相近的生物基源所决定的，但 是由于生长环境的不同及药材采收后加工处理方式 的差异，又使得这些成分在 2 味药材中的量比例各 有不同[2-8]。为了探明赤芍和白芍化学组成的差异与 药性及功能主治分化的相关关系，促进中医临床更 好地理解和应用这 2 味中药，准确测定 2 种药材的 主要化学成分，并进行详尽地比较是非常重要的。 本研究采用 HPLC 法同时测定赤芍和白芍样品中的 没食子酸、没食子酸甲酯、芍药内酯苷、芍药苷、 1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖和苯甲酰芍药苷，并 比较 2 味药材中这些化学成分的量差别，为深入了 解赤芍和白芍化学组成的共性与差异，及有效控制 赤芍、白芍药材质量和确保药物临床疗效提供科学 依据。
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4Βιβλιοθήκη Baidu
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1-没食子酸 2-没食子酸甲酯 3-芍药内酯苷 4-芍药苷 5-1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖 6-苯甲酰芍药苷 1-gallic acid 2-methyl gallate 3-albiflorin 4-paeoniflorin 5-1,2,3,4,6-O-pentagalloylglucose 6-benzoylpaeoniflorin