熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定实验报告剖析

熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定

华南师范大学09化一

摘要：肉制品是一类深受人民群众喜爱的食品，在其生产过程中多采用亚硝酸盐作为发色剂，它不仅能使肉制品保持良好的色泽，还能抑制肉毒梭状芽孢杆菌，保证肉制品的后熟风味。但近年来由于亚硝酸盐摄入量过多引起的食物时中毒时有发生，且加硝处理过的肉制品中的亚硝酸盐可与胺类生成强致癌物亚硝胺，对人体健康产生潜在的危害。本实验用紫外分光光度法测定熏肉制品中亚硝酸盐的含量。

关键字：熏肉制品亚硝酸盐紫外分光光度法标准曲线法盐酸-萘乙胺

引言盐的性质:亚硝酸和硝酸的钠盐和钾盐常被加入用于腌肉的混合物中，用来产生和保持色泽、抑制微生物和产生特殊的风味。此外，亚硝酸盐（150-200mg/kg）可抑制罐装碎肉和腌肉中的梭状芽孢杆菌。亚硝酸盐的抗微生物作用为它使用于可能生成长肉毒梭状芽孢杆菌的腌肉中提供了正当的理由。亚硝酸盐含量只要控制在安全范围内使用不会对人体造成危害。肉制品中，亚硝酸盐含量不得超过30mg/kg，这是因为亚硝酸盐的中毒剂量是200毫克以上，而正常膳食中的亚硝酸盐即使是大量用亚硝酸盐做食品添加剂的肉类，也不会超过50毫克。

中毒后症状：亚硝酸盐是不会蓄积在体内的，膳食中绝大部分亚硝酸盐随尿排出，不会对人体造成危害。过量亚硝酸盐进入人体，会氧化血液中的血红蛋白为高铁血红蛋白，后者无携氧功能，导致组织缺氧，引起肠原性青紫症，皮肤青紫是本病的特征，尤以口唇青紫最为普遍。口服亚硝酸盐10分钟至3小时后，

可出现头晕、恶心、呕吐等症状。严重者出现意识丧失、昏迷、呼吸衰竭，甚至死亡。

亚硝酸盐作用机理

发色机理

当血红蛋白中的铁处于+2（亚铁）并且缺乏配体键合所需的第6部位时，它被称为肌红蛋白，是由珠蛋白和血红素组成的络合物，位居血红蛋白中央的

铁原子(d2sp3)具有6个配位部位，其中4

5个配位部位与珠蛋白的组氨酸残基键合，剩余的第6个配位部位可与各种配基提供的电负性原子络合。

亚硝酸盐为强氧化剂，进人人体后，可使血中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，失去运氧的功能，导致组织缺氧。

亚硝酸盐在肉中形成一氧化一氮，而一氧化一氮与血红素类化合物作用生成亚硝酰肌红蛋白，这种色素产生了腌肉的红色。

目前我国测定的食品中亚硝酸盐含量的方法有：离子色谱法，分光光度法，气相吸收光谱法，示波极谱法，格里斯试剂比色法 。

离子色谱法的原理：试样经沉淀蛋白质，出去脂肪后，采用相反的方法提取和净化，以氢氧化钾溶液为淋洗液，阴离子交换柱分离，电导检测器检测，以保留时间定性外标法定量。

分光光度法法原理：试样经沉淀蛋白质，出去脂肪后在弱酸条件下，亚硝酸

H 3

3N H 2N NH 2

H

盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色 染料，外标法测定亚硝酸盐含量。

气象吸收光谱法原理：在0.15～0.3mol/L 柠檬酸介质中加入，将亚硝酸盐瞬间转化成NO 2。用空气载入气相分子吸收光谱仪的吸光光谱中，在213.9mm 等波长处测得的吸光度与水样中亚硝酸盐浓度遵守比尔定律，以此计算出亚硝酸盐的含量。

现实生活中，食品检测人员经常采用亚硝酸盐快速测试盒测定食品中亚硝酸盐的含量，亚硝酸盐快速测试盒采用N-1-萘乙二胺代替传统的a-萘胺，使显色的灵敏度高，显色的摩尔质量增大，测定出来的结果更准确，但鉴于各方面的局限性，本实验我们采用紫外分光光度法，以a-萘胺为显色剂测定熏肉制品中亚硝酸盐的含量。其实验原理如下：

实验原理：自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与α-萘胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。其颜色的深度与样液中亚硝酸含量成正比，可比色测定。反应式如下：

N H 2SO 3H

N

+

N SO 3H

NO 2

-

H

+

O

H 2

++

+

N

SO 3H

N

NH 2

N

+

N

SO 3H

+

NH 2

肉制品中亚硝酸盐含量==50

150040100010001

⨯

⨯⨯⨯

m X （mg/kg ）

式中：X为由测得的吸光度什在标准曲线上对应的亚硝酸钠质量浓度（μg/mL）；m为样品质量（g）。

主要试剂及仪器

所有加入的量都要准确加入

（1）亚铁氰化钾溶液：称取10.6克亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]溶于水，并稀释至100mL。

（2）乙酸锌溶液：称取22.0克乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]，加3mL冰醋酸溶于水，并稀释至100mL。

（3）饱和硼砂溶液：5.0克硼酸钠（Na2BO4·10H2O）溶于100mL热水中，冷却备用。

（4）0.4%对氨基苯磺酸溶液（4g/L）。称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100mL 20%盐酸中，置棕色瓶中，混匀，避光保存。

（5）0.2%盐酸萘乙二胺溶液(2g/L) 。称取0.1g盐酸奈乙二胺固体溶于去离子水，定容至50mL。

（6）亚硝酸钠标准溶液（200μg/mL）：精确称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠（优级纯），加水定容到500mL。

（7）亚硝酸钠标准使用溶液（5μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液

5.00mL，置于200mL的容量瓶中，加水稀释到刻度。

（8）仪器：①研钵，②分光光度计，③分析天平，④2mL、5mL、10mL移液管各2支，⑤100mL容量瓶3个⑥200mL容量瓶1个，⑦500mL容量瓶