液相色谱溶剂效应

进样体积对色谱行为的影响
当样品溶剂不同于流动相时，进样体积对色谱行为影响较为显著。
当样品用流动相溶解时，进Baidu Nhomakorabea体积对色谱行为影响较小。
消除溶剂效应的方法
尽量用与流动相比例相同或相近的溶剂溶解样品。
对于梯度洗脱，采用初始的流动相比例。
对于在流动相中溶解度小，必须用强溶剂时，减少进样体积以
消除溶剂效应的影响
作稀释剂时，色谱峰面积不稳定，峰面积重新性较差。 《中国药典》2000年版二
部改为用流动相为稀释剂后，峰面积重新性良好。 电离状态差异，例如样品的稀释剂是pH6.8溶出介质，流动相中缓冲液是pH3.0的 磷酸盐，这就可能发生保留时间不稳定及色谱峰变形的现象。
溶剂强度对色谱行为的影响
溶剂强度顺序
反向色谱中，溶剂强度洗脱顺序为：二氯甲烷＞丙醇＞ 四氢呋喃＞ 乙醇＞ 乙腈＞ 甲醇＞ 水（最弱）。
洗脱能力差异导致的色谱行为差异
样品溶剂强于流动相时，样品溶剂可看成流 动相的一部分，溶解于强溶剂的洗脱带，一 部分样品会被强溶剂迅速洗脱出色谱柱，另 一部分在洗脱过程中溶于流动相，被流动相 洗脱出，这样会造成色谱峰的展宽或分叉。
溶剂效应
什么是溶剂效应？
样品溶液的溶剂强度强于流动相溶剂强度时，可能会造成的峰展宽、峰分叉现象。
溶剂效应的现象
色谱图上较早洗脱的峰前沿或开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为正常。
可能发生溶剂效应的情况
保留弱，出峰时间早 进样量大 溶解性差异，例如《中国药典》2000年版二部盐酸环丙沙星片含量测定时，用水
案例分享
溶剂强度对色谱行为的影响
目录
进样体积对色谱行为的影响 消除溶剂效应的方法
样品溶剂： 格列吡嗪含量均匀度分析方法 色谱柱：Waters Nova-Pak C-18， 150*3.9mm,4um 进样量：20uL 波长：225nm 流速：1.0mL/min 流动相：甲醇：PH6.0磷酸盐缓冲液=45:55 峰展宽 纯甲醇
样品溶剂：
甲醇：磷酸盐缓冲液=45:55
样品溶剂： 纯甲醇 《中国药典》2010版瑞格列奈左旋异构体液相方法 色谱柱：Chiral AGPTM手性柱，100*4.0mm,5um 进样量：20uL 波长：240nm 流动相A：pH7.0磷酸盐缓冲液 流动相B：乙腈 梯度洗脱： 样品溶剂： 甲醇：磷酸盐缓冲液 =60:40