实验4 水中细菌总数的测定
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。
一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。
二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。
2．干热灭菌(烘箱)。
3．水浴隔热培养箱。
4．冰箱。
5.培养皿(直径9ml)。
6．吸管(10.0ml、1.0m1)。
三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。
四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。
[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。
二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。
自来水中细菌总数的测定
自来水中细菌总数的测定自来水是我们生活中必需的一种水源，但由于其经过管道输送，可能会受到外界环境的影响，其中细菌是其中一种污染物。
因此，对自来水中的细菌总数进行测定，有助于判断自来水是否符合生活饮用水标准。
一、实验原理本实验采用了膜过滤法对自来水中的细菌总数进行测定。
其原理是通过将水样通过微孔膜滤器，将水中的微生物捕捉在滤膜的表面，再将滤膜培养在含有营养物质的琼脂培养基中，使细菌能够生长形成菌落，然后再通过计数器进行计数。
二、实验步骤1. 实验前处理：先将实验室的玻璃仪器清洗干净，用工业酒精将滤器放入灭菌杯中斜着着火杀菌，备用。
2. 取一个样品瓶，将自来水（1L）倒入瓶中。
将样品瓶放入一个不透明的塑料袋中，用胶带密封塑料袋，防止紫外线照射导致细菌死亡。
3. 首先将滤装置组装好，将滤膜放入滤装置的中间柄内，放入开口的滤膜夹中。
然后用无菌注射器将琼脂培养基吸入滤装置的压力室中，将压力室旋好。
4. 用烧杯等容器将自来水倒入滤装置中，通过压力室将水样通过滤膜，滤膜表面残留的微生物被滤装置中的滤膜抓住，滤液通过过滤口流出。
滤液需丢弃。
5. 将滤膜夹子取下，将滤膜放入用滤膜侧朝上的营养琼脂培养基培养皿中，培养皿需用无菌手套拆开。
将其覆盖好，标明标识，并用胶带作为封口。
6. 将培养皿竖起放入培养箱中，温度设定为37℃左右，需要放置24h以上，17~25℃下也可进行培养，培养天数也需要视不同微生物而定。
7. 取出培养皿，用目镜进行菌落计数。
计数时需要注意，培养皿中的菌落数量需要控制在20~200个之间。
计数完后将数据进行转换，得出升级菌落数，即水样中的细菌总数。
三、实验注意事项1. 玻璃仪器需要在实验前清洗干净，并且需要消毒处理，防止样品污染。
2. 在进行实验前，实验人员需要洗手，并穿戴洁净的实验服和手套，防止手部细菌对实验结果的影响。
3. 滤装置和培养皿需要在无菌条件下进行处理，避免细菌的交叉感染。
4. 培养皿中需要加盖，防止紫外线照射导致细菌死亡，同时也可以避免污染。
实验水中细菌总数的测定
实验水中细菌总数的测定前言水是我们生活的重要组成部分，无论是生命的起源，还是人类生活和生产都与水密不可分。
但是随着工业化进程的加快，水质越来越受到污染，水中细菌总数也成为常见的水质指标之一。
本文将介绍如何进行水中细菌总数的测定实验。
实验目的1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.熟悉细菌结构及其生长条件；3.加深对水质检测的认识。
实验原理水中的细菌一般通过卫生污染途径进入自来水、地下水、河流等水体，污染水源后就会对人们的生活、工作和生产带来很大的危害。
痢疾、霍乱、伤寒、腹泻等疾病多是由于口腔、消化系统中的有害菌群外移至消化道。
测定方法主要是基于发酵方法，通过统计水中微生物的数量，其基本依据在于微生物在适宜的温度和环境下，利用某些碳水化合物发酵而产生可测定的气体。
常用的指标为断氧时间（DT），根据氧的量来判断细菌数量的多少，一定程度上可以反映出水的卫生状况。
实验步骤1.取水样：从自来水水源处取出应检样品，需注意的是要使用无菌容器，最好是预先消毒过的。
在取水样前，最好流动5分钟以上方可取样，避免得到不实际的结果；2.加入营养元素：滤上滤膜后，再将约5ml的最少粉末培养基、4-5滴的氯化甲烷胺（1%）和约200ml无菌水混合均匀，将混合溶液倒入水样中；3.发酵过程：将水样发酵瓶通过逆时针旋紧，摇晃均匀；4.测定结果：记录下发酵瓶开始发酵的时间，水样中的气体不断地逸出，瓶内逐渐产生负压下降，直到完全断氧的时间。
断氧时间愈短，水质愈差，水中微生物愈多，反之亦然。
实验要点1.无菌取样，避免二次污染，结果更加准确；2.取样量及试剂加入的量要准确，否则会影响实验结果；3.发酵瓶要紧闭，防止气体泄漏；4.营养元素中含有的碳源、氮源等应与微生物的生长有适当的关系。
通过测定水中细菌总数，可以更加准确地判断水的卫生状况。
通过本实验的学习和操作，可以更加深入地了解微生物结构、生长条件以及水质检测的方法，具有较高的理论和实际应用价值。
水中细菌菌落总数和大肠菌群的测定.doc
水中细菌菌落总数和大肠菌群的测定摘要：水是微生物广泛分布的天然环境。
各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。
水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。
水中细菌菌落总数可作为判断被检水样被有机物污染程度的指标。
细菌数量越多，则水中有机质含量越高。
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。
由于水中的细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖。
因此采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基培养出的细菌总数仅是一种近似值。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
本实验采用多管发酵法，它是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过初步发酵实验，平板分离和复发酵实验三个部分来测定漓江水中的总大肠菌群数量，试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。
关键词：细菌、菌落、大肠菌群前言：水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数中不得超过3个/L，细菌总数不得超过100个/L。
细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(m L)。
它反映的是检样中活菌的数量。
大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
通过这两个实验的好处有：了解和学习水中细菌菌落总数和大肠菌群的检验原理、检验方法、数据处理和报告方法；学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法；学习和掌握测定水中大肠菌群的多管发酵法；了解大肠菌群数量与水质状况的关系,以及它在饮水中的重要性。
细菌总数测定实验报告
细菌总数测定实验报告细菌总数测定实验报告引言：细菌是一类微小的生物体，广泛存在于自然界的各个角落。
细菌的数量对于环境卫生和食品安全至关重要。
本实验旨在通过测定细菌总数的方法，了解样品中细菌的数量，并探讨不同环境条件对细菌总数的影响。
实验方法：1. 样品采集：我们选择了不同环境中的样品，包括自来水、空气、餐具表面和人体皮肤表面。
通过无菌棉签或无菌采样器，分别采集样品，并放入无菌试管中。
2. 稀释液的制备：我们准备了一种稀释液，以免细菌过多导致结果不准确。
稀释液的配方为：1克氯化钠和1克蛋白胨溶解在100毫升蒸馏水中。
3. 稀释样品：将采集到的样品取出一定量，加入稀释液中，进行逐级稀释。
我们选择了1:10、1:100和1:1000三个不同的稀释倍数。
4. 培养：将稀释后的样品分别接种在琼脂平板上，利用无菌棉签均匀涂抹样品。
然后将琼脂平板倒置放置于恒温培养箱中，温度设定为37摄氏度。
培养时间为24小时。
5. 细菌总数计算：在培养箱中，我们观察到琼脂平板上的菌落。
根据菌落的数量和稀释倍数，可以计算出原始样品中的细菌总数。
实验结果：我们进行了多次实验，得到了不同样品中的细菌总数。
结果显示，自来水中的细菌总数最低，空气中次之，餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多。
此外，我们还发现，稀释倍数越高，细菌总数越低。
讨论：细菌总数的测定对于环境卫生和食品安全具有重要意义。
通过本实验，我们了解到不同环境中细菌总数的差异，为进一步研究提供了基础数据。
自来水中的细菌总数较低，这可能是由于自来水经过了严格的处理和消毒。
空气中的细菌总数稍高，这是因为空气中存在着大量的微生物，例如细菌和真菌。
餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多，这与人们日常接触物体和环境有关。
稀释倍数的选择对于测定细菌总数至关重要。
过高的稀释倍数会导致菌落过少，难以准确计数；而过低的稀释倍数则会导致菌落过多，影响结果的准确性。
因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的稀释倍数。
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-V1
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-
V1
生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法
测定生活饮用水中细菌总数的一种方法是平皿计数法，本文将对这种方法进行详细介绍。
一、实验原理
平皿计数法是利用细菌在液体培养基表面生长成菌落的原理，通过计算菌落个数来确定水中的细菌总数。
二、实验步骤
1. 准备培养基，将培养基倒入无菌平皿中；
2. 取样，将水样取自自来水管道或自然水源中；
3. 稀释，将取样液进行10倍、100倍、1000倍稀释，分别将每份稀释液分别均匀分散在培养基表面，避免液滴残留；
4. 写标签，标注菌落计数的相关信息，例如样品名称、稀释倍数、菌落计数的日期等；
5. 培养，将培养皿放置在恒温培养箱中，设定温度为37℃，并在3-5天内进行观察和计数。
三、实验注意事项
1. 取样应避免超过24小时，以免菌群失去代表性；
2. 取用的平皿应事先灭菌处理，以避免外来细菌的污染；
3. 实验室应有专门的抽风设备、消毒液等清洁工具，以维持实验室的高度卫生。
通过以上三个步骤，我们就可以精确地测定出生活饮用水中细菌总数。
同时，这种方法也可以应用在其他领域，例如食品安全、环境监测等
方面。
但需要注意的是，实验过程中必须遵守实验室操作规程，以保
证实验结果的可靠性。
简要叙述水中细菌总数的测定步骤
水中细菌总数的测定步骤在环境监测和饮用水管理中，测定水中细菌总数是非常重要的一项工作。
它可以帮助我们了解水质的卫生情况，评估水是否符合生活饮用水标准，从而保障人们的健康。
那么，究竟应该如何测定水中细菌的总数呢？下面我将结合常用的方法，为大家详细介绍一下。
1. 收集水样我们需要准备好需要测定的水样。
这些水样可以来自自来水、地表水、井水或者其他水源。
在收集水样的过程中，需要注意使用无菌瓶或者消毒过的玻璃瓶，避免外界细菌的污染。
在收集水样的过程中，也需要避免使用含氯的消毒剂，以免对后续操作产生影响。
2. 制备稀释液收集好水样之后，接下来需要制备稀释液。
一般来说，我们会选择生理盐水或者蒸馏水作为稀释液的基质。
在制备稀释液的过程中，需要进行严格的无菌操作，以确保稀释液不会受到外界细菌的污染。
3. 进行稀释将收集到的水样加入到制备好的稀释液中，进行适当的稀释。
一般情况下，我们会选择进行多次等比稀释，以确保在测定范围内可以准确计数。
稀释完成后，需要进行摇匀，确保水样和稀释液充分混合。
4. 填充平板接下来，我们需要将稀释后的水样填充到已经准备好的平板上。
填充平板的过程中，需要采用无菌技术，避免细菌污染。
填充完成后，需要在平板上进行横向和纵向的晃动，以确保水样均匀分布在平板表面。
5. 孵育培养填充好水样的平板需要置于培养箱中进行孵育。
一般情况下，会选择在35-37摄氏度下进行孵育，孵育的时间一般为24小时。
在孵育过程中，需要注意防止平板干燥，以免影响细菌的生长。
6. 计数和分析经过孵育后，我们可以观察到在平板上形成的菌落。
这时候就需要进行计数和分析了。
一般来说，我们会选择菌落计数板或者显微镜进行观察和计数。
通过计数和分析，我们就可以得到水样中细菌的总数。
测定水中细菌总数的步骤主要包括收集水样、制备稀释液、进行稀释、填充平板、孵育培养和计数分析。
这些步骤需要严格遵守无菌操作和实验室安全规范，以确保测定结果的准确性和可靠性。
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测（1）录入时间:2010-9-25 11:17:29 来源：生物信息网（一)实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。
(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。
(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
（二)实验原理水是微生物广泛分布的天然环境。
各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。
水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。
水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。
所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。
这些细菌都可随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
(完整版)水中细菌总数的测定
水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2.菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后,所得1 mL水样所含菌落的总数.细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。
由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。
3.培养基与试剂2.1 营养琼脂成分2.2 制法：根据实际需要量,按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7。
6,分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤.），经103。
43 kPa（121°C，15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。
4.仪器和材料4.1仪器:高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱.4.2材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。
4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。
5.样品采集5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3—5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml.5.2纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.5.3地表水的取样:应取距水面10-15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。
6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
自来水中细菌总数的测定
自来水中细菌总数的测定摘要水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物含量越大。
本实验应用平板菌落记数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，他们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，是水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的细菌总数仅是近似值[1]。
本实验采用普通营养琼脂培养基，该培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。
所谓细菌总数，是指在1mL水样在普通营养琼脂培养基中，37℃经24h培养后，所生长出来的菌落数。
通过培养观测得到平均1mL自来水中含有85个细菌菌落，符合国家标准。
关键词自来水平板菌落计数技术细菌总数测定引言水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的[2]。
良好的饮用水细菌总数应<100CFU∕mL,而>500CFU∕mL则不适宜饮用，我国饮用水卫生标准（GB5749-85）规定，每毫升水样中细菌总数37℃培养24h不得大于100个[3]。
细菌种类对人类健康更为重要，许多致病细菌常常存在于水中，人们饮用后引发各种疾病，如痢疾，伤寒等，大多是饮用水污染了这些病原菌之故，因而测定饮用水中的病原菌是必需的。
本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
通过此实验我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。
我们可以了解水质评价的微生物学卫生标准和本地区自来水的卫生状况，从而不断的改善并很好的治理。
1材料与方法1.1时间与地点2010年10月27日太原师范学院南区微生物实验室1.2实验材料牛乳膏蛋白胨琼脂培养基、自来水、蒸馏水、烧杯、玻璃棒、培养皿、电炉、高压蒸汽灭菌锅、天平、量筒等1.3方法1.3.1牛乳膏蛋白胨琼脂培养基的制备[4]计算并称量一定量的普通标准琼脂培养基固体置于烧杯中，先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅拌，然后再电炉上加热使其溶解，完全溶解后补充水量至所需的总体积，不断搅拌直至沸腾，沸腾后继续加热3~5分钟。
实验4--水中细菌总数的测定
8
2．细菌总数测定 （1）自来水（每个小组做两个平板） （a）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿
（b）自最后三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿 中，每一稀释度做两个培养皿。
（c）各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的培养基，立即放在桌上 混匀。
（d）凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。
10
3．菌落计数方法
（1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中 一个培养皿有较大片状菌苔生长时，则不应采 用，而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀 释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培 养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀 时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全培养 皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落 数。
摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管， 稀释度分别为10-1、10-2与10-3。稀释倍数以培养后平板的菌落数在30—
300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法 计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样，取10-1、10-2、10-3三 个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见表ⅪⅤ-1，例6）。
13
五、实验报告 1．结果 （1）自来水 （2）池水、河水或湖水等
水中细菌总数的测定(课堂PPT)
10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-1
10
（2）接种
以无菌操作方法用无菌吸管吸取原水样l ml或取 2-3个适宜浓度稀释液l ml，注入灭菌平皿中。倾 注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋 白胨琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样与培 养基充分混匀，每个稀释度平行三皿。另设三皿 空白对照（？）。
5
三、实验操作步骤
1. 水样的采集 供细菌学检验用的水样，必须按一般无菌操作的基 本要求进行采样，并保证在运送、贮存过程中不受 污染。为了要正确反映水质在采样时的真实情况， 水样在采取后应立即送检；一般从取样到检验不应 超过4小时。条件不允许立即检验时，应存于冰箱， 但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。
(见表4-3-1例次6)。
17
表 4-3-1 计算菌落总数的方法举例
例
不同稀释度的平均菌落数 两个稀释 菌落总数 报告方式 备注
次
10-1
10-2
10-3 度菌落之 （个/ml） （个/ml）
比20
-
16400 1.6×104 两位以
后的数
2
2 760
294
46
1.6 37700 3.8×104 字采取
2
一、实验目的 二、实验仪器与材料 三、实验操作步骤 四、实验结果 五、思考题
3
一、实验目的
掌握水样的取样方法； 掌握水体中细菌总数的测定方法； 了解国家的相关法规。
4
二、实验仪器与材料
1. 仪器： 高压蒸汽灭菌器、恒温箱、冰箱、体视镜(放大镜)、带刻 度试管（3）、培养皿（4）、微量移液器（配枪头）、 三角瓶（2 ） 、计数器。 2. 培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
水中细菌总数的测定
• 测定水中的细菌总数；（天然水、饮用水） • 学会制备琼脂营养培养基； • 熟练掌握超净工作台的操作。
实验前准备
• 仪器准备：培养皿（12个）、试管（25ml,4支） 、移液管（1ml,4支）、锥形瓶、烧杯、玻珠、胶 塞、棉花、洗耳球、电炉、牛皮纸、棉绳、天平 、高压锅、超净工作台 • 试剂准备：营养琼脂粉、酒精、饮用水、天然水 、无菌水
采样地点
• 天然水采样地点 • 饮用水采样地点
3楼，办公 室，饮水机
实验步骤
菌落的计数及图片
空白实验
ห้องสมุดไป่ตู้
饮用水
天然水
结果计算及报告
天然水体 1 10-1 10-2 饮用水 空白对照
N（个/ml）
116
205
2
5
1
根据我国天然水体卫生标准规定，在100-1000（个/mL）范围内的天 然水库为清洁，1.2×102个/mL在100-1000 （个/mL）范围内，所以我们 所测的湖水清洁标准。 根据我国生活饮用水卫生标准规定，细菌总数1mL自来水中不得超过 100个，由于5个/mL<100个/mL，所以本次实验所取的实训楼D栋3楼办公 室饮用水达标。
问题讨论
• 1、为什么水样稀释10倍后的细菌总数比原水样 的细菌总数还多? 答：因为在移取稀释10倍的水样到培养皿的时候 吸耳球中带有水，在吸取水样时，吸耳球中的水 流入移液管中，导致水样被污染，造成菌落总数 增加。
• 2、为什么空白对照的结果不是0？ 答：组内有一成员由于在超净工作台操作前双 手灭菌不完全，接触空白培养皿，导致被污染。 在移取稀释10的水样时，由于不小心把液 体溅到超净工作台上，导致超净工作台受污染。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定一、实验目的1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水的平板菌落技术的原则。
二、实验材料1、无菌培养皿、无菌吸管、无菌锥形瓶、无菌水（每管有9mL灭菌过的自来水）2、营养琼脂培养基（已灭菌的）3、酒精灯、恒温箱（培养箱）等。
三、实验步骤1、平板的制作1）将无菌培养皿编号0、1、2、3。
其中0#培养皿作为空白对照，1、2、3#培养皿作为平行实验。
2）另取一支1mL的无菌吸管从自来水中吸取1mL水样注入灭菌培养皿中。
每次吸取时，吸管都应在水样中反复吸洗几次，其中0#培养皿中不注入水样，只倾注营养琼脂培养基作空白对照。
3）在每个灭菌培养皿中倾注15mL（每一个培养皿内加入的培养基量需根据培养皿的大小决定，以能使培养皿底部铺满培养基而形成厚约2~3mm的薄层为适当）已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基（温度不可过高，否则微生物容易被烫死；温度过低，培养基容易凝固，平板不平。
如果经验不足，可以将培养基瓶置于45℃水浴锅中降温，但所需时间较长），倾入后迅速盖上皿盖，平放桌上，轻轻转动，使培养基和水样充分混合均匀，冷却后，即成平板。
4）待冷却凝固后，翻转平皿，使底面朝上，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱内培养24小时，观察有无菌落长出，并进行计数，即为1mL水样中细菌总数。
培养皿所以要倒置是为了防止培养基内水分蒸发到皿盖上而使皿盖变干。
2、菌落计数及报告方法作培养皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平皿的菌落计数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同一稀释度的平均计数时，若其中一个平皿优较大片状菌落生长，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半菌落数分布又很均匀，则可将此半平皿计数后乘以2以代表全皿菌落数。
四、实验结果（我国应用水的卫生学指标：在1mL自来水中细菌总数不得超过100个）平板菌落数1mL自来水中细菌总数1#2#3#。
水中总大肠菌群的测定
微生物综合实验：水中细菌总数和大肠菌群的测定一实验目的1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水源水的平板菌落计数的原则。
3、学习检测水中大肠菌群的方法，了解大肠菌群数量与水质状况的关系。
二、实验原理水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
我国规定1ml自来水中细菌总数不得超过100个。
大肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37℃培养24~28h能发酵乳糖产酸与产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌，它们普遍存在于肠道中，且具有数量多，与多数肠道病原菌存活期相近，易于培养和观察等特点。
大肠菌群数是指每升水中含有的大肠菌群的近似值。
大肠菌群的检测方法有多管发酵法和滤膜法两种。
本实验采用多管发酵法，它被称为水的标准分析法，即将一定量的样品接种乳糖发酵管，根据发酵反应的结果，确证大肠菌群的阳性管数后在检索表中查出大肠菌群的近似值。
我国规定：每升自来水中大肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料和用具：1、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，乳糖蛋白胨培养基，三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基，伊红美兰培养基（EMB培养基）。
2、试剂：无菌水、结晶紫染液、卢氏碘液、95%乙醇、番红染色液。
3、器皿：灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管，德汉氏小管，载玻片，无菌空瓶，移液管，接种环，酒精灯，注射器，显微镜等。
四、实验步骤第一周（2008-11-11）1、制备无菌水：取4支试管，向每支试管中加入9ml自来水。
2、配制：牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15~20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）乳糖蛋白胨培养基（蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，NaCl 5g，1．6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基（将上述乳糖蛋白胨培养基浓缩3倍配制）3、将以上配制的无菌水和培养基全部进行灭菌处理。
水质 细菌总数的测定 菌落计数
水质细菌总数的测定菌落计数本方法适用于测定饮用水、水源水、地表水中细菌总数的测定。
平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。
但是，由于细菌在水中以不同形式存在，因此可能会导致由此法所得的菌落数低于真正存在的活细菌的总数。
所需仪器包括高压蒸汽灭菌器、电热干燥箱、恒温培养箱、冰箱和解剖镜，以及采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿。
这些器皿需要在121℃（20min）高压蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。
培养基则为市售营养琼脂培养基，按说明配制后经过121℃高压蒸汽灭菌15min，并经过无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。
在进行菌落计数前，需要选择适宜的稀释度，以确保在平皿上的菌落总数介于30～300之间。
对于大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL，所得的菌落总数可适于计数。
水样的稀释方法包括将水样用力振摇20～25次，使可能存在的细菌凝团成分散状，并以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌水的试管中，混匀成1：100稀释液。
按同法依次稀释成1：1000、1：稀释液（稀释倍数按水样污浊程度而定）。
在操作时，需要注意吸取不同浓度的稀释液时，必须更换吸管。
操作方法包括以无菌操作方法用1mL灭菌吸管吸取充分混匀的水样或2～3个适宜浓度的稀释水样1mL，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每个水样应倾注两个平皿。
待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于37℃恒温箱内培养24h，进行菌落计数。
在进行菌落计数时，需要立即进行。
如果计数必须暂缓进行，平皿需存放于5～10℃冰箱内，且不得超过24h。
但是不可以使这种做法成为常规的操作方式。
在进行平皿菌落计数时，需要使用解剖镜进行检查，以避免漏计。
在记录每个平皿的菌落数后，需要计算同一稀释度的平均菌落数。
如果其中一个平皿有较大的片状菌落生长，就不应该使用它，而应该使用无片状菌落生长的平皿来代表该稀释度的菌落数。
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五、实验报告 1．结果 （1）自来水 （2）池水、河水或湖水等
（b）自最后三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿 中，每一稀释度做两个培养皿。
（c）各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的培养基，立即放在桌上 混匀。 （d）凝固后倒臵于37℃培养箱中培养24小时。
3．菌落计数方法 （1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中
一个培养皿有较大片状菌苔生长时，则不应采 用，而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀 释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培 养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀 时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全培养 皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落 数。
2．细菌总数测定 （1）自来水（每个小组做两个平板） （a）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿 中。共做两个平皿。 （b）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右 的培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样 与培养基充分混匀。 （c）培养基凝固后，倒臵于37℃温箱中，培养 24小时，进行菌落计数。 两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌 总数。
（2）池水、河水或湖水等
（a）取加入9ml水的灭菌试管。取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内，
摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管， 稀释度分别为10-1、10-2与10-3。稀释倍数以培养后平板的菌落数在30—
300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法 计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样，取10-1、10-2、10-3三 个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。
水中细菌总数的测定
一、目的要求
1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测 定的方法。 2．了解水的平板菌落计数的原则。
二、基本原理
生活用水的水源常被生活污水、工业废水以及 人畜粪便所污染。 腐生性微生物对人无害，而病源性微生物则能 引起传染病甚至流行病，如霍乱、伤寒、细菌 性痢疾和阿米巴性痢疾以及脊髓灰质炎和传染 性肝炎等病毒性疾病。
（2）首先选择平均菌落数在30—300之间的， 当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时， 则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的 细菌总数（见表ⅪⅤ-1，例1）。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的 平均菌落数乘以稀释倍数（见表ⅪⅤ-1，例4）。 （5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平 均菌落数乘以稀释倍数（见表ⅪⅤ-1，例5）。 （6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见表ⅪⅤ-1，例6）。
二、基本原理
水中的细菌总数越多，说明水中有机物的含量就越高，水体被有 机物污染的程度越重。 水中细菌的种属繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很 大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均 能生长繁殖，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来 的水中的细菌的总数实际上是一种近似值。 肠道中的绝大多数腐生性和致病性的细菌，可在牛肉膏蛋白胨培 养基上进行生长。因此应用平板菌落计数技术来测定水样中的细 菌总数基本上能代表水样中细菌的数量。
（1）自来水先将自来水龙头用消毒处理，再开 放水龙头使水流一定量后，以灭菌三角烧瓶接 取水样，以待分析。
（2）池水、河水或湖水应取距水面10-15cm的深 层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸 入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流 入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出， 最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。
水中细菌总数的测定和计算
在牛肉膏蛋白胨培养基上，1ml水样， 经37℃，24h 培养后所生长出来的总 菌数。 我国饮用Байду номын сангаас的卫生学指标：在1ml自来 水中细菌总数不得超过100个。
三、器材 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基； 灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养 皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
四、操作步骤 1．水样的采取