【生物技术】第六讲(3)花药(花粉)培养技术(精)

油菜成熟花药的结构
第一节 花药和花粉培养技术
一、花药和花粉的培养方法：
（一）花粉发育时期：
1、适宜时期：单核期,尤其是单核中、晚期(单核靠边期)
营养细胞 生殖细胞 精子
雄配子体的发育
第一节 花药和花粉培养技术
2、花粉发育时期的检测：
外部形态观察：(单核靠边期的花粉) 小麦旗叶源自文库旗叶下一叶之叶耳距离约是5～ 15cm。 烟草中，花蕾的花冠大约与萼片等长。 压片染色法：是检测花粉发育时期的简便有效 方法，常用染色剂为醋酸洋红。
第一节 花药和花粉培养技术
草莓花药愈伤组织,花药植株
第一节 花药和花粉培养技术
2、花粉培养
花粉培养成苗途径与花药培养比较: 相同点： 胚状体成苗途径、愈伤组织再分化成苗途径 不同点： 花粉培养： 需进行花粉的分离 特殊的花粉诱导培养

第一节 花药和花粉培养技术
花粉培养过程
消毒
预培养数天
第二节 花药和花粉培养的应用
花药和花粉培养的应用 ----单倍体植株育种
1、克服后代分离，缩短育种周期； 2、有利于筛选隐性突变体，选择效率高; 3、有利于隐性基因控制性状的选择 4、快速获得自交系的超雄株
第二节 花药和花粉培养的应用
大大缩短育种周期
本章小结：
(1)花药培养是器官培养，花粉培养属细胞培养。 (2)花药培养一般选择花粉的单核期进行接种。 (3)花药培养包括：选择材料-消毒-接种培养-愈合组织 生成-分化出单倍体植株。 (4)花粉培养包括花粉的分离-预处理-培养过程。
细胞分裂素可促进胚状体形成； 生长素可诱导愈伤组织形成。 细胞分裂素与生长素比值高时可诱 导愈伤组织分化苗
第一节 花药和花粉培养技术
（三）蔗糖浓度
较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织； 较低浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗。
第一节 花药和花粉培养技术
三、单倍体植株染色体加倍的方法
1、自然加倍：花粉细胞核有丝分裂或核融合，染色体可 自然加倍，获得纯合二倍体。 2、人工加倍：用秋水仙素处理单倍体植物，可使染色体 加倍（溶液浸苗、处理愈伤组织和用含0.4%秋水仙素 的羊毛脂涂抹单倍体植株的顶芽、腋芽，可得到能结实 的二倍体植株） 3、将单倍体植株诱导的愈伤组织反复继代培养，再分化 可得到二倍体植株。
选幼年树花蕾
第一节 花药和花粉培养技术
（二）培养过程
4）培养形成花粉植株。 培养方式： ①琼脂固化培养基表面培养 ② 30%Ficoll的液体培养基表面漂浮培养 ③固-液双层培养
第一节 花药和花粉培养技术
水稻花药培养过程：
旗叶鞘用70％酒精擦洗一遍 左手持穗，右手 用镊子取花药， 放无菌培养皿中 剥去旗叶鞘，取出稻穗
无菌水洗3次
10％漂白粉10 min
用接种环接种 到培养基上
培养5天，花药变褐，20天后花药裂 开，长出淡黄色的花粉愈伤组织， 先长芽，后长根，形成幼苗。
第一节 花药和花粉培养技术
花药培养脱毒技术
1974年日本：花药培养可以脱除草莓病毒； 花药采取时期
单核期：花蕾4-6mm，花药1mm 花药诱导愈伤组织培养基 MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 增殖分化培养基 MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 生根培养基 1/2MS+IBA0.2mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g+琼脂7g/L
第一节 花药和花粉培养技术
（二）培养过程
1 花药培养过程
1）预处理:低温冷藏是最常用的方法
烟草7～9℃ ，7～14d 黑麦1～3℃ ，7～14d
第一节 花药和花粉培养技术
（二）培养过程
2）表面消毒 用70%酒精喷洒或擦拭花器或包被着麦 穗的叶鞘表面，即可以达到灭菌的要求。
第一节 花药和花粉培养技术
（二）培养过程
3）接种 在无菌的条件下把雄蕊上的花药从 花丝上摘下，水平地放在培养基上进行 培养。 不要使花药受到损伤，否则会刺激 花药壁形成二倍体愈伤组织。 接种的“密度效应”，要有一个合 理的群体数量。
第一节 花药和花粉培养技术
（二）培养过程
4）培养形成花粉植株。 花粉---愈伤组织---苗 花粉---胚状体---苗
取花药
取花蕾（镜检） 培养
接种
分离花粉
愈伤组织发生
第一节 花药和花粉培养技术
二、培养基
蔗糖浓度
基本培养 基
激素种类 和浓度
第一节 花药和花粉培养技术
（一）基本培养基：

B5培养基：适合豆科和十字花科花药培养； N6培养基：适合禾谷类作物的花药培养。
第一节 花药和花粉培养技术
（二）激素种类和浓度
花药(花粉)培养
第一节 花药和花粉培养技术
花药和花粉培养技术
花药培养是将花粉发育至一定阶段的花药接种到 人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤 组织进而分化成植株的技术。
第一节 花药和花粉培养技术
花粉培养：是将花粉从花药中分离出来,接种到 人工培养基上进行培养，以形成花粉胚或愈伤 组织进而分化成植株的过程。