临床微生物SOP革兰染色标准操作规程

1.目的
规范革兰染色标准操作规程。

2.原理
细菌样本先经紫色草酸盐结晶复合物染色，之后用Lugol-PVP煤染剂处理以促进染料与革兰阳性菌的结合。

经酒精-丙酮的脱色作用，革兰染色阴性菌中的结晶紫会被洗脱。

番红精则是作为复染剂：革兰染色阴性的细菌呈粉红色，而革兰染色阳性的细菌呈现紫色。

3.试剂
3.1 结晶紫草酸盐溶液结晶紫2％；酒精20％；草酸铵0.8％。

3.2 稳定Lugol-PVP复合物碘1.3％；碘化钾2％；PVP（聚乙烯呲咯烷酮）10％。

3.3 脱色剂 95％酒精50％；丙酮50％。

3,4 番红精溶液番红精0.25％；95％酒精10％。

4. 质控
4．1 采用大肠埃希菌ATCC25922质控标准菌株，每周一次，有室内质控记录。

4.2 采用金黄色葡萄球菌ATCC25923质控标准菌株，每周一次，：有室内质控记录。

5．操作步骤
5.1 初染第一液初染剂（结晶紫）染色一分钟，水洗。

5.2 媒染第二液媒染剂（碘液）染色一分钟，水洗。

5.3 脱色第三液脱色剂（95％酒精）用到无紫色脱落为止，水洗。

5.4 复染第四液复染剂（石炭酸复红或沙黄）染色30秒，水洗。

自然干燥后镜检。

6．结果判断
革兰阳性菌呈紫色，革兰阳性菌呈红色。

7. 注意事项
7.1 染色的结果常受操作者技术影响，尤其是容易过度脱色，往往阳性染成阴性。

7.2 在同一载玻片上，需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌作阳性及阴性对照。

7.3 染色关键在于涂片和脱色，涂片不宜过厚，固定不宜过热，脱色不宜过度。

7.4 菌龄为18～24 小时为佳。

8. 临床意义
8.1 鉴别细菌可将细菌分为阳性和阴性两大类，因而可以初步识别细菌，缩小范围，有利于进一步鉴定。

8.2 选择药物革兰阳性菌与阴性菌的细胞壁结构有很大差别，因而抗菌药物有差异。

参考文献
[1] 周庭银编著．临床微生物学诊断与图解．第二版．上海：上海科学技术出版社，2007
[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编．全国临床检验操作规程．第三版．南京：东南大学出版社，2006。