牛病毒性腹泻与粘膜病精品PPT课件
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本病多发于寒冷季节，过分拥挤可促进本病发 生。
BVDV的病原学
• 属黄病毒科、瘟病毒属
• 有囊膜，直径25-30nm，正链RNA
• 胎牛肾、睾丸、猪肾、胎羊睾丸可增殖 传代 BVDV。BVDV 可以分成致细胞病变 型（CP）和非致细胞病变型（NCP）。
BVDV的基因结构及其蛋白
5'-Npro（P20）-C(P14)-Erns(gp48)-E1 (gp25)E2(gp53)-P7- NS2-3 (P125)-NS4A (P10)- NS4B (P30)- NS5A (P58)- NS5B (P75)-3',其中C，ERNS， E1，E2是病毒的结构蛋白。其余为非结构蛋白。
近年来，为了避 免非特异性染色反 应，则可以使用单 克隆抗体+生物素化 抗鼠抗体-链酶亲和 素过氧化物酶检测 方法。
分子生物学诊断
1
2
RT-PCR 核酸探针检测
RT-PCR
RT–PCR 是目前广泛应用的分 子生物学技术，对于检测 BVDV 的 RNA 是一个合适的方法。根据 BVDV 基因组序列合成一对或几对特异性 引物，可以高度特异、敏感的检测 出器官、组织、细胞培养物中的 BVDV，并可区别 CSFV、BDV，还可 对 BVDV 的基因型和生物型作进一 步的鉴定
内容摘要
1
BVDV的流行病学
2
BVDV的病原学
3 BVDV的基因结构及其蛋白
4
BVDV的研究进展
5 6
BVDV的主要诊断方法 BVDV的防治
BVDV的流行病学
传 染 源：病牛和带毒牛是主要传染源。
传播途径：主要通过消化道和呼吸道传播；直接或 间接接触也可以传播；吸血昆虫也是重要的传播 媒介。
易感动物：主要感染牛（肉牛、奶牛），也可感染 猪。
E2 Npro
与抗BVDV抗体结合、 介导免疫中和反应及 与宿主细胞识别、吸
附的主要部位
具有自体蛋白酶活性， 有较高的保守，可以对 瘟病毒进行种、群或型
的鉴定
❖5'-UTR：5'末端无甲基化的“帽子”结构，5'UTR序列在BVDV的各毒株间有较高的保守性，因 此常根据5'-UTR的序列设计引物来检测 BVDV或 对 BVDV 进行分型。5'-UTR 在病毒转录、翻译 过程中起重要的作用。
BVDV，监测牛群中 BVD 抗体水平，评估潜伏 感染情况。其中最常用的是双抗夹心 ELISA 和间接 ELISA，也有使用 BVDV 单克隆抗体与 ELISA 联合诊断 BVD。
研究较多的IBRV诊断蛋白有NS3，E2蛋白
免疫过氧化物酶技术（IP）
免疫过氧化物酶技术 （IP）诊断 BVDV 准确、 可靠，可用于了解 BVD 的总体分布情况。链酶亲 和素-生物素过氧化物酶 检测方法，可以用来检测 福尔马林固定、石蜡包埋 组织切片中的BVDV。
BVDV的主要基因、蛋白研究进展
核衣壳组成 成分，具有
免疫原性
内有一高度保 守结构域，可 用于研究亚单 位疫苗，也可 作为基因工程
诊断抗原
ERNS
BVDV 基因组 具有较高的保
守性
C
5‘-UTR
BVDV
NS3
瘟病毒属内高度 保守，在病毒复 制、病毒RNA转 译或者病毒多聚 蛋白加工过程中
具有重要作用
❖2009年魏伟等用BVDV NS3 蛋白中有免疫反 应性的重组片段作为包被抗原，建立了一个 BVDV 抗体检测的间接 ELISA 方法。
诊断方法的进展
1
血清学诊断
2
免疫学诊断
3
分子生物学诊断
SUCCESS
THANK YOU
2020/12/17
可编辑
13
血清学诊断
常见的方法为主要包括血清中和试验 和琼脂扩散试验两种。
PCR引物多数选在BVDV保守区5’-UTR 和NS3基因内，尤其5’UTR是BVDV进行鉴定 、基因分型的首选区域。
2007年王伟利建立了 BVDV 荧光 RTPCR 检测方法并进行了初步应用，2007年 国家质量监督检验检疫局制定了牛病毒性 腹泻/黏膜病反转录聚合酶链反应操作规程
琼脂扩散试验准确性较低，检出的结果 常常有假阳性。
血清中和试验重复性高，准确性好，已作 为 BVDV 诊断的“金标准”，但血清中和试 验在基层使用时，常遇到费时、费力，需要 细胞培养等试验室技术问题，无法得到推广
免疫学诊断
免疫荧光技 术（IFA）
酶联免疫吸 附试验 （ELISA）
免疫过氧化 物酶技术 （IP）
牛病毒性腹泻与黏膜病
牛病毒性腹泻
牛病毒性腹泻，又称牛病毒性腹泻/粘膜病，是由 BVDV引起的，主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反刍动物及 猪的一种重要传染病。临床主要表现为发热、粘膜糜烂 、溃疡、白细胞减少、持续感染、咳嗽及怀孕母牛流产 或产生畸形胎儿。同一种病原引起的多种病状的传染病
我国1980年李佑民首从国外进口奶牛分离出BVDV； 上世纪90年代郑志刚等在全国范围内调查，BVDV平均阳 性率为19.56%，近年来本病在国内阳性检出率呈逐年上 涨的趋势。本病给养牛业造成明显损失（产乳↓、重↓ 、流产等）。
❖E2 是形成 BVD 基因工程疫苗的最好的选择。 ❖BVDV E2 DNA 疫苗是近年来 BVDV 免疫研究的热点。 如2007吴明福等构建真核表达质粒 pcDNA3.1(+)-E2 并免疫小鼠，可诱导小鼠产生一定程度的体液和细胞 免疫应答。
❖NS-3：NS3区域与病毒的毒力，生长特性有 关。NS3在瘟病毒属内高度保守，在病毒复制、 病毒RNA转译或者病毒多聚蛋白加工过程中具 有重要作用。NS3的表达与宿主细胞CPE的产生 有密切关系。
免疫荧光技术（IFA）
免疫荧光技术（IFA）又称荧光抗体技 术，可用于检测细胞培养物以及病变组织 的冰冻切片中 BVDV ห้องสมุดไป่ตู้染情况。
免疫荧光抗体技术特异、敏感、快速， 但它需要荧光显微镜，使得此技术无法得 到推广应用。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
ELISA ELISA 常被用于检测组织器官培养物中
❖2010年张兴娟等分别用5'-UTR设计一对引物， 预扩增片段125bp；2010年孟雨等人也利用5'UTR设计一对引物，预扩增片段218bp，实验证明 利用5'-UTR设计引物具有很好的特异性和敏感性。
❖E2：是BVDV的主要保护性抗原，能诱导机体产生中 和抗体，所以新型疫苗都是针对E2结构蛋白的。也是 与抗 BVDV 抗体结合、介导免疫中和反应及与宿主细 胞识别、吸附的主要部位，E2 基因一直是国内外学者 研究瘟病毒的重点。
BVDV的病原学
• 属黄病毒科、瘟病毒属
• 有囊膜，直径25-30nm，正链RNA
• 胎牛肾、睾丸、猪肾、胎羊睾丸可增殖 传代 BVDV。BVDV 可以分成致细胞病变 型（CP）和非致细胞病变型（NCP）。
BVDV的基因结构及其蛋白
5'-Npro（P20）-C(P14)-Erns(gp48)-E1 (gp25)E2(gp53)-P7- NS2-3 (P125)-NS4A (P10)- NS4B (P30)- NS5A (P58)- NS5B (P75)-3',其中C，ERNS， E1，E2是病毒的结构蛋白。其余为非结构蛋白。
近年来，为了避 免非特异性染色反 应，则可以使用单 克隆抗体+生物素化 抗鼠抗体-链酶亲和 素过氧化物酶检测 方法。
分子生物学诊断
1
2
RT-PCR 核酸探针检测
RT-PCR
RT–PCR 是目前广泛应用的分 子生物学技术，对于检测 BVDV 的 RNA 是一个合适的方法。根据 BVDV 基因组序列合成一对或几对特异性 引物，可以高度特异、敏感的检测 出器官、组织、细胞培养物中的 BVDV，并可区别 CSFV、BDV，还可 对 BVDV 的基因型和生物型作进一 步的鉴定
内容摘要
1
BVDV的流行病学
2
BVDV的病原学
3 BVDV的基因结构及其蛋白
4
BVDV的研究进展
5 6
BVDV的主要诊断方法 BVDV的防治
BVDV的流行病学
传 染 源：病牛和带毒牛是主要传染源。
传播途径：主要通过消化道和呼吸道传播；直接或 间接接触也可以传播；吸血昆虫也是重要的传播 媒介。
易感动物：主要感染牛（肉牛、奶牛），也可感染 猪。
E2 Npro
与抗BVDV抗体结合、 介导免疫中和反应及 与宿主细胞识别、吸
附的主要部位
具有自体蛋白酶活性， 有较高的保守，可以对 瘟病毒进行种、群或型
的鉴定
❖5'-UTR：5'末端无甲基化的“帽子”结构，5'UTR序列在BVDV的各毒株间有较高的保守性，因 此常根据5'-UTR的序列设计引物来检测 BVDV或 对 BVDV 进行分型。5'-UTR 在病毒转录、翻译 过程中起重要的作用。
BVDV，监测牛群中 BVD 抗体水平，评估潜伏 感染情况。其中最常用的是双抗夹心 ELISA 和间接 ELISA，也有使用 BVDV 单克隆抗体与 ELISA 联合诊断 BVD。
研究较多的IBRV诊断蛋白有NS3，E2蛋白
免疫过氧化物酶技术（IP）
免疫过氧化物酶技术 （IP）诊断 BVDV 准确、 可靠，可用于了解 BVD 的总体分布情况。链酶亲 和素-生物素过氧化物酶 检测方法，可以用来检测 福尔马林固定、石蜡包埋 组织切片中的BVDV。
BVDV的主要基因、蛋白研究进展
核衣壳组成 成分，具有
免疫原性
内有一高度保 守结构域，可 用于研究亚单 位疫苗，也可 作为基因工程
诊断抗原
ERNS
BVDV 基因组 具有较高的保
守性
C
5‘-UTR
BVDV
NS3
瘟病毒属内高度 保守，在病毒复 制、病毒RNA转 译或者病毒多聚 蛋白加工过程中
具有重要作用
❖2009年魏伟等用BVDV NS3 蛋白中有免疫反 应性的重组片段作为包被抗原，建立了一个 BVDV 抗体检测的间接 ELISA 方法。
诊断方法的进展
1
血清学诊断
2
免疫学诊断
3
分子生物学诊断
SUCCESS
THANK YOU
2020/12/17
可编辑
13
血清学诊断
常见的方法为主要包括血清中和试验 和琼脂扩散试验两种。
PCR引物多数选在BVDV保守区5’-UTR 和NS3基因内，尤其5’UTR是BVDV进行鉴定 、基因分型的首选区域。
2007年王伟利建立了 BVDV 荧光 RTPCR 检测方法并进行了初步应用，2007年 国家质量监督检验检疫局制定了牛病毒性 腹泻/黏膜病反转录聚合酶链反应操作规程
琼脂扩散试验准确性较低，检出的结果 常常有假阳性。
血清中和试验重复性高，准确性好，已作 为 BVDV 诊断的“金标准”，但血清中和试 验在基层使用时，常遇到费时、费力，需要 细胞培养等试验室技术问题，无法得到推广
免疫学诊断
免疫荧光技 术（IFA）
酶联免疫吸 附试验 （ELISA）
免疫过氧化 物酶技术 （IP）
牛病毒性腹泻与黏膜病
牛病毒性腹泻
牛病毒性腹泻，又称牛病毒性腹泻/粘膜病，是由 BVDV引起的，主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反刍动物及 猪的一种重要传染病。临床主要表现为发热、粘膜糜烂 、溃疡、白细胞减少、持续感染、咳嗽及怀孕母牛流产 或产生畸形胎儿。同一种病原引起的多种病状的传染病
我国1980年李佑民首从国外进口奶牛分离出BVDV； 上世纪90年代郑志刚等在全国范围内调查，BVDV平均阳 性率为19.56%，近年来本病在国内阳性检出率呈逐年上 涨的趋势。本病给养牛业造成明显损失（产乳↓、重↓ 、流产等）。
❖E2 是形成 BVD 基因工程疫苗的最好的选择。 ❖BVDV E2 DNA 疫苗是近年来 BVDV 免疫研究的热点。 如2007吴明福等构建真核表达质粒 pcDNA3.1(+)-E2 并免疫小鼠，可诱导小鼠产生一定程度的体液和细胞 免疫应答。
❖NS-3：NS3区域与病毒的毒力，生长特性有 关。NS3在瘟病毒属内高度保守，在病毒复制、 病毒RNA转译或者病毒多聚蛋白加工过程中具 有重要作用。NS3的表达与宿主细胞CPE的产生 有密切关系。
免疫荧光技术（IFA）
免疫荧光技术（IFA）又称荧光抗体技 术，可用于检测细胞培养物以及病变组织 的冰冻切片中 BVDV ห้องสมุดไป่ตู้染情况。
免疫荧光抗体技术特异、敏感、快速， 但它需要荧光显微镜，使得此技术无法得 到推广应用。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
ELISA ELISA 常被用于检测组织器官培养物中
❖2010年张兴娟等分别用5'-UTR设计一对引物， 预扩增片段125bp；2010年孟雨等人也利用5'UTR设计一对引物，预扩增片段218bp，实验证明 利用5'-UTR设计引物具有很好的特异性和敏感性。
❖E2：是BVDV的主要保护性抗原，能诱导机体产生中 和抗体，所以新型疫苗都是针对E2结构蛋白的。也是 与抗 BVDV 抗体结合、介导免疫中和反应及与宿主细 胞识别、吸附的主要部位，E2 基因一直是国内外学者 研究瘟病毒的重点。