金黄色葡萄球菌检验 ppt课件
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板上产生明显的溶血环。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形， 不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环
阳性
阴性
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
如结果可疑，从营养琼脂小斜面挑去菌落到BHI肉汤， 重复凝固酶试验。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——增菌
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受 15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。
36±1℃培养18h~24h。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——分离培养（血平板和BP平板）
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌定性检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
学习目的与要求
1. 了解金黄色葡萄球菌生物学特性。 2. 掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和 检验方法。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
一、生物学特性——菌体形态及培养特征
检验程序 ——确证鉴定2.血浆凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
试管法 挑取BP平板或血平板上至少5个可疑菌落（少于5个
全选，分别接种于BHI肉汤和营养琼脂小斜面， 36±1℃ 培养18h-24h。
取0.5mL无菌生理盐水加入瓶装冻干兔血浆中至完全 溶解，加入培养后的BHI肉汤培养物0.2-0.3mL，振荡摇 匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观 察6h，如凝固体积大于原体积一半时，判定为阳性。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
•葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病， 可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突 出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 •当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如 牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10 小时即可相当数量的肠毒素。
✓ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
✓ 丙酮酸钠是一种生长促进剂 ✓ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株
有毒性，并使菌落产生黑色 ✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 ✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制
作用。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.Hale Waihona Puke Baidu微米，镜检时呈单个、成 对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌(高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡黄 色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落)。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 B-P平板
圆形、光滑、黑色有光泽, 周围绕以不透明圈,其外有清晰带
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——确证鉴定1.革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
• 最适生长温度37℃，最适pH为7.4； • 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； • 可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下
还能生长； • 一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增
菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
二、检验程序与操作方法
食品安全国家标准GB 4789.10-2016 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质
36± 1℃ 18h- 24h
Baird-parker平板，血平板
36± 1℃
BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂小斜面
36± 1℃ 18h- 24h
血浆凝固酶试验
报告
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——样品处理
称取25g（mL）样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉 汤的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质 1min~2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均 质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2min。
在BP平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿 润、菌落直径为2mm~3mm, 颜色呈灰黑色至黑色,有光泽, 常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常 有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。
有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清 晰带外,其他外观基本相同。
从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色 常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙,质地较干燥。
• 所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来 源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血 浆。
• 金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂 肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然 的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生 磷脂环。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
生物学特性 ——致 病 性
•金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： •a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 •b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； •c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 •d.耐热核酸酶 •e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形， 不透明，表面光滑，菌落周围有完全透明溶血环。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血环
阳性
阴性
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
如结果可疑，从营养琼脂小斜面挑去菌落到BHI肉汤， 重复凝固酶试验。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——增菌
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（最高可耐受 15%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤增菌。
36±1℃培养18h~24h。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——分离培养（血平板和BP平板）
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌定性检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
学习目的与要求
1. 了解金黄色葡萄球菌生物学特性。 2. 掌握金黄色葡萄球菌定性检测程序和 检验方法。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
一、生物学特性——菌体形态及培养特征
检验程序 ——确证鉴定2.血浆凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
试管法 挑取BP平板或血平板上至少5个可疑菌落（少于5个
全选，分别接种于BHI肉汤和营养琼脂小斜面， 36±1℃ 培养18h-24h。
取0.5mL无菌生理盐水加入瓶装冻干兔血浆中至完全 溶解，加入培养后的BHI肉汤培养物0.2-0.3mL，振荡摇 匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观 察6h，如凝固体积大于原体积一半时，判定为阳性。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
•葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾病， 可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最为突 出而且普遍，腹痛、腹泻次之。 •当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如 牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经8-10 小时即可相当数量的肠毒素。
✓ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
✓ 丙酮酸钠是一种生长促进剂 ✓ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄的菌株
有毒性，并使菌落产生黑色 ✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 ✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制
作用。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
革兰氏阳性球菌，直径为0.5-1.Hale Waihona Puke Baidu微米，镜检时呈单个、成 对、四联或不规则的簇群，如葡萄状，故称为葡萄球菌。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌(高盐甘露醇平板：金黄色葡萄球菌为淡黄 色菌落；其他葡萄球菌为白色菌落)。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 B-P平板
圆形、光滑、黑色有光泽, 周围绕以不透明圈,其外有清晰带
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验 检验程序 ——确证鉴定1.革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，葡萄状，无芽孢，无荚膜
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
• 最适生长温度37℃，最适pH为7.4； • 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； • 可在高盐环境下生长，15%氯化钠环境下
还能生长； • 一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增
菌或7.5%氯化钠肉汤增菌。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
二、检验程序与操作方法
食品安全国家标准GB 4789.10-2016 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检样 25g(ml)样品+225ml7.5%氯化钠肉汤，均质
36± 1℃ 18h- 24h
Baird-parker平板，血平板
36± 1℃
BP平板 24h-48h 血平板 18h-24h
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂小斜面
36± 1℃ 18h- 24h
血浆凝固酶试验
报告
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
检验程序 ——样品处理
称取25g（mL）样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉 汤的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质 1min~2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤无菌均 质袋中,用拍击式均质器拍打1 min~2min。
在BP平板上典型菌落为：圆形,表面光滑、凸起、湿 润、菌落直径为2mm~3mm, 颜色呈灰黑色至黑色,有光泽, 常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常 有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。
有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清 晰带外,其他外观基本相同。
从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色 常较典型菌落浅些, 且外观可能较粗糙,质地较干燥。
• 所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来 源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血 浆。
• 金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂 肪酶和溶菌酶等，大多数菌株可水解天然 的动物蛋白并释放脂肪酸。在BP平板产生 磷脂环。
食品安全检验技术（微生物部分） 金色葡萄球菌检验
生物学特性 ——致 病 性
•金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取 决于其产生的毒素和侵袭性酶： •a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 •b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； •c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 •d.耐热核酸酶 •e.肠毒素：引起急性胃肠炎。