固氮菌、解磷菌的分离筛选讲课教案

固氮菌、解磷菌的分离筛选

一、目的要求:

1、掌握选择培养基的筛选原理。

2、掌握固氮菌、解磷菌的分离方法。

3、学习平板划线分离法。

二、实验原理：

选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理化学抗性而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需的微生物从混杂的微生物中分离出来。固氮菌可以利用空气中的氮作为氮源进行自身代谢，根据这一原理可以利用无氮培养基将固氮菌从混合菌中分离出来。解磷菌可以在含有难溶性磷酸盐或有机磷的固体培养基产生溶磷圈，根据这一特性可以分离出解磷菌。同样，可以根据解钾菌的生理特性选择合适的培养基将其分离出来。

在本实验中，分离固氮菌我们采用阿须贝氏（Ashby）培养基，分离解磷菌采用无机磷培养基。

选择培养基的配方如下

Ashby培养基：

磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.2 g

硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2 g

氯化钠(NaCl) 0.2 g

碳酸钙(CaCO3) 5.0 g

甘露醇(C6H14O6) 10.0 g

硫酸钙(CaSO4·2H2O) 0.1 g

琼脂 18.0 g

蒸馏水 1000 mL

pH 6.8～7.0

无机磷培养基：

葡萄糖 10.0 g

(NH₄)₂SO₄ 0.5 g

NaCl 0.3 g

KCl 0.3 g

MgSO₄•7H₂O 0.3 g

FeSO₄•7H₂O 0.03 g

MnSO₄• 4H₂O 0.03 g

Ca₃(PO₄)₂ 10 g

琼脂 18 g

蒸馏水 1000 ml

三、实验材料:

1、试剂及样品：Ashby培养基、无机磷培养基、无菌水、土壤样品（自带）。

2、仪器及其它用具：培养皿、玻璃棒、烧杯、量筒、天平、高压蒸汽灭菌锅、

生化培养箱、超净工作台、接种环、酒精灯、PH试纸等。

四、方法步骤:

培养基的配制

1、根据要求，配置好三种培养基，115℃条件下高压灭菌25min。

2、将灭菌后的培养基在超净工作台倒平板，备用。

样品处理

3、在离心管中，将自带土壤样品按5g土样\10ml无菌水的比例溶解，土壤样品

要充分溶解，使土壤中的微生物全部溶解在无菌水中。

4、样品溶解后，将离心管放在离心机中，3000r\min，离心5min。

接种

5、在超净工作台，用灭菌的接种环蘸取离心后上清液，用平板划线分离法分别

在Ashby培养基和无机磷培养基上接种土样各一个平板。

6、接种完成后在培养基上贴上标签，注明培养基名称和样品编号，接种日期。

如Ashby①，2011.8.27；无机磷③2011.8.27。

7、将培养皿放在恒温培养箱中28℃培养。