非小细胞肺癌患者EGFR突变率及与临床病理关系和TKI靶向治疗效果

㊃论著㊃

非小细胞肺癌患者ＥＧＦＲ突变率及与临床病理关系和ＴＫＩ靶向治疗效果

张海涛㊀王㊀春㊀张映铭㊀王彩英㊀方申存㊀吴㊀静㊀许㊀斌㊀刘㊀丹

ＤＯＩ：１０．３８７７／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４⁃６９０２．２０１９．０２．００９

基金项目：江苏省科技计划面上项目（ＳＢＥ２０１８７４０４７６）作者单位：２１００２９江苏省南京市胸科医院九病区通信作者：张海涛，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｔ１９７８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ

ʌ摘要ɔ㊀目的探讨非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）突变率及与临床病理关系和酪氨酸酶抑制剂（ＴＫＩ）靶向治疗效果㊂方法选取２０１４年５月至２０１６年８月我院收治的ＮＳＣＬＣ患者１００例为研究对象，采用聚合酶链反应⁃直接测序法检测患者肿瘤组织ＥＧＦＲ基因１８⁃２１号外显子突变情况，分析ＥＧＦＲ突变与临床病理的关系及其突变特点，比较ＥＧＦＲ突变型与野生型采用ＴＫＩ靶向治疗的疗效及１年生存率㊁２年生存率㊂结果本次纳入的１００例ＮＳＣＬＣ患者中共４４例发生ＥＧＦＲ突变，ＥＧＦＲ突变率为４４．００％；ＮＳＣＬＣ患者ＥＧＦＲ突变率特点：女性高于男性，吸烟患者高于不吸烟患者，腺癌高于非腺癌，差异对比均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析显示性别为女性㊁病理类型为腺癌是导致ＮＳＣＬＣ患者发生ＥＧＦＲ突变的独立危险因素（Ｐ＜０．０５）；ＥＧＦＲ突变类型包括１８号外显子点突变４．５４％（２／４４）㊁１９号外显子缺失突变４３．１９％（１９／４４）㊁２０号外显子插入突变及点突变１１．３６％（５／４４）㊁２１号外显子点突变４０．９１％（１８／４４）；ＥＧＦＲ突变型患者ＴＫＩ治疗有效率６８．１８％明显高于ＥＧＦＲ野生型１０．７１％（Ｐ＜０．０５）；ＥＧＦＲ突变型与野生型患者１年㊁２年生存率对比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）㊂

结论性别㊁病理类型是导致ＮＳＣＬＣ患者发生ＥＧＦＲ基因突变的独立危险因素，对于ＥＧＦＲ突变型患者采用ＴＫＩ靶向治疗可获得较好疗效，但２年生存率与ＥＧＦＲ野生型患者尚无明显差异㊂

ʌ关键词ɔ㊀非小细胞肺癌；㊀表皮生长因子受体；㊀突变率；㊀酪氨酸酶抑制剂；㊀靶向治疗中图法分类号：Ｒ７３４．２

文献标识码：Ａ

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ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀Ｎｏｎ⁃ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ；㊀ＥＧＦＲ；㊀Ｍｕｔａｔｉｏｎｒａｔｅ；㊀Ｃｌｉｎｉｃａｌｐａｔｈｏｌｏｇｙ；㊀Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ；㊀ＴＫＩ⁃ｔａｒｇｅｔｅｄｔｈｅｒａｐｙ

㊀㊀肺癌为临床常见恶性肿瘤，该病发病率及病死率在近年来呈上升趋势，严重威胁人类健康及生命安全，其中非小细胞肺癌（ｎｏｎ⁃ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ＮＳＣＬＣ）为常见类型，占所有肺癌８０％，该类型肺癌生长分裂及扩散转移较慢，虽然其治疗技术在不断改进，但放化疗疗效多不理想，预后较差［１⁃２］㊂表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）信号通路为ＮＳＣＬＣ形成及发展过程中至关重要的通路，其ＥＧＦＲ为蛋白老氨酸激酶受体，可抑制肿瘤细胞死亡，促进肿瘤细胞增殖㊁肿瘤血管生成与转移，因此分析该基因突变与ＮＳＣＬＣ患者临床病理特征的关系对指导疾病治疗有重要意义［３⁃６］㊂靶向药物治疗在ＮＳＣＬＣ中的疗效已获得国内外肿瘤专家认可，其疗效与肺癌细胞ＥＧＦＲ基因第１９及２１外显子突变状态关系密切，其中酪氨酸酶抑制剂（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＴＫＩ）靶向治疗所用的主要药物吉非替尼㊁厄洛替尼是ＥＧＦＲ抑制剂，对ＥＧＦＲ基因突变患者疗效较好，且不良反应轻［７⁃９］㊂本文选取２０１４年５月至２０１６年８月我院收治的ＮＳＣＬＣ患者１００例为研究对象，分析其ＥＧＦＲ突变率与临床病理关系和ＴＫＩ靶向治疗效果，现报道如下㊂

资料与方法

一㊁一般资料

选取２０１４年５月至２０１６年８月我院收治的晚期ＮＳＣＬＣ患者１００例为研究对象，均符合‘中国表皮生长因子受体基因突变和间变淋巴瘤激酶融合基因阳性非小细胞肺癌诊断治疗指南（２０１３版）“中ＮＳＣＬＣ诊断标准，纳入标准：①入院时卡氏评分（ＫＰＳ）＞６０分，美国东部肿瘤协作组活动状态评分０或１分，且具有细胞病理学诊断证据，肿瘤分期Ⅲ⁃Ⅳ期；②血液学㊁生化检查评价器官功能正常，肿瘤直径不超过５ｃｍ；③治疗前均已放弃放化疗治疗，并签署知情同意书［１０］㊂排除标准：①近期使用其他治疗或既往应用过铂类联合紫杉醇类方案化疗；②不可控制且有症状的脑转移，活动状态评分＞１分或其他原因无法耐受ＴＫＩ化疗者；③ＣＴ检查发现癌细胞发生远处转移，活体检测发现远处淋巴结有转移现象㊂

二㊁研究方法

１．ＥＧＦＲ突变率检测：用无菌刀片刮取５ １０张８μｍ厚的连续石蜡切片中癌组织区域，保证肿瘤细胞含量在３０％以上，石蜡组织脱蜡后以ＤＮｅａｓｙ组织试剂盒（Ｑｉａｇｅｎ，德国）自肿瘤组织中提取ＤＮＡ，应用ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００分光光度计（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，美国）测定ＤＮＡ浓度，所有ＤＮＡ吸光度值Ａ２６０／２８０均在１．８ ２．０，用无水ＤＮａｓｅ水稀释至１００ｎｇ／μｌ备用㊂采用人类ＥＧＦＲ基因突变检测试剂盒（厦门艾德生物医药科技有限公司，中国）应用荧光聚合酶链反应（ＰＣＲ），依据试剂盒说明书操作，测定ＥＧＦＲ第１８⁃２１号外显子的最常见２９种体细胞突变情况㊂ＰＣＲ引物：ＥＧＦＲ基因第１８号外显子上游引物：５ ⁃ＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＣＴＴＧＴＣＴＣ⁃３ （２０ｂｐ），下游引物：５ ⁃ＣＴＣＣＣＣＡＣＣＡＧＡＣＣＡＴＧＡ⁃３ （１８ｂｐ）；第１９号外显子上游引物：５ ⁃ＣＡＴＧＴＧＧＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＣＡ⁃３ （１９ｂｐ），下游引物：５ ⁃ＣＡＧＣＴＧＣＣＡＧＡＣＡＴＧＡＧＡＡ⁃３ （１９ｂｐ）；第２０号外显子上游引物：５ ⁃ＣＡＴＧＣＧＴＣＴＴＣＡＣＣＴＧＧＡＡ⁃３ （２０ｂｐ），下游引物：５ ⁃ＡＧＣＡＧＧＴＡＣＴＧＧＧＡＧＣＣＡＡＴ⁃３ （１９ｂｐ）；第２１号外显子上游引物：５ ⁃ＣＣＴＣＡＣＡＧＣＡＧＧＧＴＣＴＴＣＴＣ⁃３ （２０ｂｐ），下游引物：５ ⁃ＴＧＣＣＴＣＣＴＴＣＴＧＣＡＴＧＧＴＡ⁃３ （１９ｂｐ），测序产物经ＮａＡｃ与乙醇纯化后，在ＡＢＩ３５００ＸＬ基因分析仪