实验三血清总胆固醇的测定
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正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？
混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。
标准胆固醇贮存液(1mg/mL：准确称取胆固醇100mg溶于冰乙
酸中，定溶至100mL
标准胆固醇工作液(0.1mg/mL):将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰
乙酸稀释至100mL
二、测试样品
0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。
三、器材
试管1.5x15cm(X11)；移液枪，量筒50mL分光光度计。
操作方法
一、制作标准曲线
取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂:
管号
0
1
2
3
4
5Baidu Nhomakorabea
6
7
8
标准胆固醇工作液
(mL)
0
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
冰乙酸(mL)
0.40
0.35
0.30
0.25
0.20
0.15
光吸收值。以总胆固醇量(mg%为横坐标，光吸收值为纵坐标做出 标准曲线
二、样品测定
取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定:
管号
对照
样品①
样品②
稀释的未知血清样品
(mL)
0
0.40
0.40
邻苯二甲醛试剂(mL)
0.20
0.20
0.20
冰乙酸(mL)
0.40
0
0
混合酸(mL)
4.00
4.00
4.00
A550
加毕，温和混匀，20〜37C下静置10分钟，在550nm下测定光吸
收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。
注意事项
1.本法在20〜37C条件下显色。
2.混合酸粘度比较大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。
思考题
1.本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？
2.酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液， 为什么
实验三 血清总胆固醇的测定
目的要求
了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。
实验原理
血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、 临床诊断和 营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~250mg/mL。
胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成， 而且也是细胞的必要结构成分， 还可以转化成胆汁酸盐、 肾上腺皮质 激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式 存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。 本实验采用前一种方法。
0.10
0.05
0
邻苯二甲醛试剂
(mL)
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
0.20
混合酸(mL)
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
相当于未知血清中
总胆固醇量(mg%)
0
A550
加毕，温和混匀，20〜37C下静置10分钟，在550nm波长处测定
胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质， 此物
质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量 测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关 系。
本法不必离心，颜色产物也比较稳定。
试剂和器材
一、试剂
邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。
混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。
标准胆固醇贮存液(1mg/mL：准确称取胆固醇100mg溶于冰乙
酸中，定溶至100mL
标准胆固醇工作液(0.1mg/mL):将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰
乙酸稀释至100mL
二、测试样品
0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。
三、器材
试管1.5x15cm(X11)；移液枪，量筒50mL分光光度计。
操作方法
一、制作标准曲线
取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂:
管号
0
1
2
3
4
5Baidu Nhomakorabea
6
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标准胆固醇工作液
(mL)
0
0.05
0.10
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0.25
0.30
0.35
0.40
冰乙酸(mL)
0.40
0.35
0.30
0.25
0.20
0.15
光吸收值。以总胆固醇量(mg%为横坐标，光吸收值为纵坐标做出 标准曲线
二、样品测定
取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定:
管号
对照
样品①
样品②
稀释的未知血清样品
(mL)
0
0.40
0.40
邻苯二甲醛试剂(mL)
0.20
0.20
0.20
冰乙酸(mL)
0.40
0
0
混合酸(mL)
4.00
4.00
4.00
A550
加毕，温和混匀，20〜37C下静置10分钟，在550nm下测定光吸
收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。
注意事项
1.本法在20〜37C条件下显色。
2.混合酸粘度比较大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。
思考题
1.本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？
2.酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液， 为什么
实验三 血清总胆固醇的测定
目的要求
了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。
实验原理
血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、 临床诊断和 营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100 ~250mg/mL。
胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成， 而且也是细胞的必要结构成分， 还可以转化成胆汁酸盐、 肾上腺皮质 激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式 存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。 本实验采用前一种方法。
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邻苯二甲醛试剂
(mL)
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混合酸(mL)
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相当于未知血清中
总胆固醇量(mg%)
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加毕，温和混匀，20〜37C下静置10分钟，在550nm波长处测定
胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质， 此物
质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色法作总胆固醇的定量 测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关 系。
本法不必离心，颜色产物也比较稳定。
试剂和器材
一、试剂
邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。