小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及生物学特性分析
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第５ 月
中山大学学报 （ 医学科学版 ）
Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｕ Ａ ・Ｅ Ｎ Ｖ Ｒ ＩＹ（ Ｄ Ｃ ＬＳ ＩＮ Ｅ ） Ｏ Ｒ Ａ ＦＳ Ｎ Ｙ ＴＳ Ｎ Ｕ Ｉ Ｅ ＳＴ ＭＥ ＩＡ ＣＥ Ｃ Ｓ
Ｖｏ ．３ Ｎｏ３ １３ ．
Ｍ ａ ２０１ ｖ． ２
Ａ ｓ ａｔ 【 ｂ ｃｖ 】 ｏ ｓ ｂｓ ｆ ｔｅ ａ ｒｓｌｉ ｄ ｘａｓ ｎ ｆ ｏｓ ａｉ ｓ ｄｒｅ ｒ ａ ｃｌ （Ｄ Ｃ ， ｂｔ ｃ： Ｏｊ ｔｅ Ｔ ｔ ｌｈ ｎ ｆｃｖ ｗ ｙｏ ｉ ａｏ ａ ｐｎ ｏ ｕｅ ｄ ｏ —ｅｖｄ ｔｍ ｌ ｅｓ Ａ Ｓ ） ｒ ｅｉ ｅ ａ ｉ ａ ｅｅ ｉ ｆ ｏ ｔｎ ｎ ｅ ｉ ｏｍ ｐ ｅ ｉ ｓｏ ｌ
中 图分 类 号 ： ７ ５５ Ｒ ２ ． Ｒ ２ ．： ３ ９４ 文献标 志码 ： Ａ 文章 编 号 ：６ ２ ３ ５ （０ ２ ０ — ２ ９ ０ １７ — ５ ４ ２ １ ）３ ０ ９ — ６
Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ， ｄ ｎ ｉ ｃ ｔｏ ａ ｄ ｏ ｏ ｉａ ｓ ｌ ｔｏ Ｉ ｅ ｔｆ ａ ｉ ｎ， ｎ Ｂｉ ｌ ｇ ｃ ｌ ｉ Ｃｈａ ａ ｔ ｒ ｓｊ ｓ ｆ ｏ ｓ ｉ ｏ ｅｄｅ ｉ ｅ ｔ ｏ ａ ｌｓ ｒ ｃ ｅ ｉｔｃ Ｍ ｕ ｅＡｄ ｐ ｓ － ｒ ｖ ｄ Ｓ ｒ ｍ ｌ ｏ Ｃｅｌ
来 源提供更 广阔的选择 ， 以利于 Ｍ Ｃ在小 鼠模 型 中的研究 。【 法 】 Ｓ 方 体外 分离 、 纯化 Ｂ Ｌ ／ 鼠 Ａ Ｓ ， Ａ Ｂ Ｃ小 Ｄ Ｃ 进行 细胞形态 、 表
面标 志 、 成脂及 成骨分化潜 能鉴定 、 隆形成能 力 、 克 生长动 力学等方 面 的研 究 ， 通过淋 巴细胞增 殖抑 制试验研 究其 免疫调 并
Ｃ ４ 、 Ｄ１ｂ 第 ３ Ａ Ｓ Ｄ ５ Ｃ ｌ ； 代 Ｄ Ｃ可诱 导分化为成骨 细胞和脂肪细胞 ； ３代 Ａ Ｓ 第 Ｄ Ｃ有 很强 的集 落形成能力 ； ３代 Ａ Ｓ 第 Ｄ Ｃ倍增 时
间为（ ２±３ ｈ 第 ５代 Ａ Ｓ ２ ）， Ｄ Ｃ倍增 时间为（ ４－３ ｈ 第 ８代 Ａ Ｓ ２ ４ ）， － Ｄ Ｃ倍 增时 间为 （０±３ ｈ 第 ５代后 的 Ａ Ｓ ３ ）， Ｄ Ｃ增 殖速度 随着代 数 的增 加逐渐减慢 ： Ｄ Ｃ可 以抑制 Ｔ淋 巴细胞 的增 殖 ， Ｃ、 Ａ Ｓ Ｂ、 Ｄ组的抑制 率分别 为 ２ ． ８ ４ ．４ ６ ． ０ 抑制能 力和骨 ０ ７ ％、７９ ％、０ ７ ％，
Ｌ Ｕ Ｓ ｏ －ｈ ｎ ＥＩ ｕ －ｉ Ｉ ｎ Ｉ ｈ ｕ ｓ ｅ ｇ，Ｌ ｎ ｘａ ，Ｌ Ｊ Ｙａ ｇ ，ＸＩ ＡＮＧ Ｐ ｎ ＨＯＵ ｎ ｈ ａ ｅ ｇ ，Ｚ Ｄｕ — ｕ （ ．ｅａｔ ｅ ｔ ｆ ａｄａ ｉｓ Ｓ ｃｎ ｆｌ ｔ ｏｐｔ ， ｕ ａ— ｎＵ ｉ ｒｉ ， ｕ ｎ ｚｏ １ １０ Ｃ ｉａ １ ｐ ｒ ｎ ｅｉｔｃ， ｅｏｄＡ ｆｉ ｅ Ｈ ｓｉ ｌ Ｓ ｎＹ ｔ ｅ ｎｖ ｓｙ Ｇ ａ ｇｈ ｕ ０ ２ ， ｈｎ ； Ｄ ｍ ｏＰ ｒ ｉａ ｄ ａ ｓ ｅ ｔ ５ ２ Ｚ ｏ ｇｈ ｎＳ ｈｏ ｏ ｄｃ ｅ Ｓ ｎＹ ｔ ｅ ｎｖｒｉ ， ｕｎ ｚｏ １０ ０ Ｃ ｉａ ． ｈ ｎｓａ ｃ ｏｌ ｆ Ｍｅ ｉｎ ， ｕ ａ— ｎＵ ｉ ｓｙ Ｇ ａ ｇｈ ｕ５ ０ ８ ， ｈｎ ） ｉ ｓ ｅ ｔ
髓 间充质干细胞 （Ｍ Ｃ 相似 。 【 Ｂ Ｓ） 结论 】 通过贴 壁培养可 以从 小 鼠脂肪 中分离培养 出高 纯度 Ａ Ｓ ， 法效率高 ， Ｄ Ｃ 该方 培养 出的
Ａ Ｓ Ｄ Ｃ具 有 Ｂ Ｃ的一般特性 ， 与 Ｂ Ｃ相 比更易纯化 ， ＭＳ 且 ＭＳ 具有更 快的增殖速 度 ， 望作为小 鼠 ＭＳ 有 Ｃ的有效来源 。 关键词 ： 问充质干细胞 ； 鼠 ； 小 骨髓 ； 脂肪组织 ； 免疫调节
（ Ｄ Ｃ１ ０ 孔 ）Ｈ组 （ Ｄ Ｃ２ Ｏ 孑 ） Ａ Ｓ ×１４ 、 ／ Ａ Ｓ ×１４ Ｌ作为参 照组 。 Ｃ Ｋ８ ／ 用 Ｃ ． 法检测作用前 后 Ｔ细胞功能 。结果 】 Ｄ Ｃ 下形态呈贴 【 ＡＳ镜
壁 、 型 。 随着 代数 的增 加 ， 梭 且 细胞 逐渐 增 大 ； ３代 Ａ Ｓ 第 Ｄ Ｃ高表 达 Ｃ ２ Ｄ ９和 Ｃ ４ 中表 达 Ｓａ１ 低 表 达或 不 表达 Ｃ ３ 、 Ｄ ４， ｃ ．， Ｄ ４
节 特性 ： 用终浓 度为 ２ ｇ ｍＬ的 Ｃ ｎ ０￣ ／ ｏ Ａ作 用 于 Ｔ淋 巴细胞 （ １×１ ） 以不 同数 量 的 Ａ Ｓ ０个 ， Ｄ Ｃ分 别与活化 Ｔ淋 巴细胞作用 ， 根据 Ａ Ｓ Ｄ Ｃ数量 不 同实验 分为 Ａ组 （ ｏＡ＋ Ｃ ｎ Ｔ细胞 ）Ｂ组 （ Ｄ Ｃ １×１ 孔 ＋Ｃ ｎ Ｔ细胞 ）Ｃ组 （ Ｄ Ｃ １×１４￣ ＋Ｃ ｎ 、 Ａ Ｓ ０ ／ ｏＡ＋ 、 Ａ Ｓ ０ Ｌ ｏＡ＋ ／ Ｔ 细胞 ） Ｄ组 （ Ｄ Ｃ２×１４￣ ＋Ｃ ｎ 、 Ａ Ｓ ０／ Ｌ ｏＡ＋Ｔ细胞 ） 同时 Ｅ组 （ ， 单纯 Ｔ细 胞 ） 为阴性 对 照组 ， 作 Ｆ组 （ Ｄ Ｃ １ ０／ ） Ｇ组 Ａ Ｓ ×１，孔 、
ａｄｔ ｏｓ ｖ ｔ ｉｏｉ ｌ ｈｒ ｔ ｓｃ ｏ ｍ ｕｅ Ｄ Ｃ 【 ｅ ｏｓ Ａ Ｓ ｅ ｂ ｉ ｄｆ ｍ ａｉ ｓ ｏ Ｂ Ｌ ／ ｏｓ， ｎ ｂｅ ｅｈ ｂ ｌ ｃ ａ ｃ ｒｔｓ ｆ ｏｓ Ａ Ｓ ． Ｍ ｔ ｄ】 Ｄ Ｃｗｒ ｏｔｎ ｏ ｐ ｅ ｆ Ａ Ｂ Ｃｍ ｕｅ ｏ ｒ ｅ ｏ ｇ ａ ｃ ａ ｅ ｉ ｉ ｈ ｅ ａｅ ｒ ｄ ｏ
小鼠脂肪问充质干细胞的分离培养及生物学特性分析
刘 寿 生 ，雷俊 霞 ，黎 阳 ’ ，项 鹏 ，周 敦华
（ 中山大学 １附属第二 医院 儿科 ， ． 广东 广州 ５ ０ ２ ；． １ １０ ２中山医学院 ， 广东 广州 ５ ０ ８ ） １０ ０
摘
要 ： 目的 】 【 建立 一种有 效的分离 、 培养小 鼠脂 肪 间充 质干 细胞 （ Ｄ Ｃ 的方 法 ， Ａ Ｓ） 从而 为小 鼠间充质 干细胞 （ Ｓ ） ＭＣ的
中山大学学报 （ 医学科学版 ）
Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｕ Ａ ・Ｅ Ｎ Ｖ Ｒ ＩＹ（ Ｄ Ｃ ＬＳ ＩＮ Ｅ ） Ｏ Ｒ Ａ ＦＳ Ｎ Ｙ ＴＳ Ｎ Ｕ Ｉ Ｅ ＳＴ ＭＥ ＩＡ ＣＥ Ｃ Ｓ
Ｖｏ ．３ Ｎｏ３ １３ ．
Ｍ ａ ２０１ ｖ． ２
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中 图分 类 号 ： ７ ５５ Ｒ ２ ． Ｒ ２ ．： ３ ９４ 文献标 志码 ： Ａ 文章 编 号 ：６ ２ ３ ５ （０ ２ ０ — ２ ９ ０ １７ — ５ ４ ２ １ ）３ ０ ９ — ６
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来 源提供更 广阔的选择 ， 以利于 Ｍ Ｃ在小 鼠模 型 中的研究 。【 法 】 Ｓ 方 体外 分离 、 纯化 Ｂ Ｌ ／ 鼠 Ａ Ｓ ， Ａ Ｂ Ｃ小 Ｄ Ｃ 进行 细胞形态 、 表
面标 志 、 成脂及 成骨分化潜 能鉴定 、 隆形成能 力 、 克 生长动 力学等方 面 的研 究 ， 通过淋 巴细胞增 殖抑 制试验研 究其 免疫调 并
Ｃ ４ 、 Ｄ１ｂ 第 ３ Ａ Ｓ Ｄ ５ Ｃ ｌ ； 代 Ｄ Ｃ可诱 导分化为成骨 细胞和脂肪细胞 ； ３代 Ａ Ｓ 第 Ｄ Ｃ有 很强 的集 落形成能力 ； ３代 Ａ Ｓ 第 Ｄ Ｃ倍增 时
间为（ ２±３ ｈ 第 ５代 Ａ Ｓ ２ ）， Ｄ Ｃ倍增 时间为（ ４－３ ｈ 第 ８代 Ａ Ｓ ２ ４ ）， － Ｄ Ｃ倍 增时 间为 （０±３ ｈ 第 ５代后 的 Ａ Ｓ ３ ）， Ｄ Ｃ增 殖速度 随着代 数 的增 加逐渐减慢 ： Ｄ Ｃ可 以抑制 Ｔ淋 巴细胞 的增 殖 ， Ｃ、 Ａ Ｓ Ｂ、 Ｄ组的抑制 率分别 为 ２ ． ８ ４ ．４ ６ ． ０ 抑制能 力和骨 ０ ７ ％、７９ ％、０ ７ ％，
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Ａ Ｓ Ｄ Ｃ具 有 Ｂ Ｃ的一般特性 ， 与 Ｂ Ｃ相 比更易纯化 ， ＭＳ 且 ＭＳ 具有更 快的增殖速 度 ， 望作为小 鼠 ＭＳ 有 Ｃ的有效来源 。 关键词 ： 问充质干细胞 ； 鼠 ； 小 骨髓 ； 脂肪组织 ； 免疫调节
（ Ｄ Ｃ１ ０ 孔 ）Ｈ组 （ Ｄ Ｃ２ Ｏ 孑 ） Ａ Ｓ ×１４ 、 ／ Ａ Ｓ ×１４ Ｌ作为参 照组 。 Ｃ Ｋ８ ／ 用 Ｃ ． 法检测作用前 后 Ｔ细胞功能 。结果 】 Ｄ Ｃ 下形态呈贴 【 ＡＳ镜
壁 、 型 。 随着 代数 的增 加 ， 梭 且 细胞 逐渐 增 大 ； ３代 Ａ Ｓ 第 Ｄ Ｃ高表 达 Ｃ ２ Ｄ ９和 Ｃ ４ 中表 达 Ｓａ１ 低 表 达或 不 表达 Ｃ ３ 、 Ｄ ４， ｃ ．， Ｄ ４
节 特性 ： 用终浓 度为 ２ ｇ ｍＬ的 Ｃ ｎ ０￣ ／ ｏ Ａ作 用 于 Ｔ淋 巴细胞 （ １×１ ） 以不 同数 量 的 Ａ Ｓ ０个 ， Ｄ Ｃ分 别与活化 Ｔ淋 巴细胞作用 ， 根据 Ａ Ｓ Ｄ Ｃ数量 不 同实验 分为 Ａ组 （ ｏＡ＋ Ｃ ｎ Ｔ细胞 ）Ｂ组 （ Ｄ Ｃ １×１ 孔 ＋Ｃ ｎ Ｔ细胞 ）Ｃ组 （ Ｄ Ｃ １×１４￣ ＋Ｃ ｎ 、 Ａ Ｓ ０ ／ ｏＡ＋ 、 Ａ Ｓ ０ Ｌ ｏＡ＋ ／ Ｔ 细胞 ） Ｄ组 （ Ｄ Ｃ２×１４￣ ＋Ｃ ｎ 、 Ａ Ｓ ０／ Ｌ ｏＡ＋Ｔ细胞 ） 同时 Ｅ组 （ ， 单纯 Ｔ细 胞 ） 为阴性 对 照组 ， 作 Ｆ组 （ Ｄ Ｃ １ ０／ ） Ｇ组 Ａ Ｓ ×１，孔 、
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小鼠脂肪问充质干细胞的分离培养及生物学特性分析
刘 寿 生 ，雷俊 霞 ，黎 阳 ’ ，项 鹏 ，周 敦华
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摘
要 ： 目的 】 【 建立 一种有 效的分离 、 培养小 鼠脂 肪 间充 质干 细胞 （ Ｄ Ｃ 的方 法 ， Ａ Ｓ） 从而 为小 鼠间充质 干细胞 （ Ｓ ） ＭＣ的