DNS法测定菊芋中还原糖含量的研究(1)
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由表 2 K 及 R 值可知, 以干浸膏得率为考察指标 时, A3> A 2> A 1, B2> B1> B3, C3> C2> C1, C 因 素影响最大, B、A 因素次之。结合表 3 干浸膏得率方差 分析知, 各因素作用主次为 C> A> B, 其中 C 因素影 响比较显著, A、B 次之, D 因素影响较小, 均无显著性 差异, 因此水煎煮最佳提取工艺为 A 3B2C3。由表 2 K 及 R 值可知, 以川续断皂苷Ⅵ提取量为考察指标时, A3> A2> A 1, B2> B1> B3, C3> C1> C2, A 因素影 响最大, B、C 因素次之。结合表 4 川续断皂苷Ⅵ提取量 方差分析, 水煎煮最佳提取工艺为 A 3B2C3。
0. 2406
0. 2 0. 4367 98. 05 96. 78% 1. 27%
0. 2406
0. 4 0. 6273 96. 7
2. 8 样品测定 取菊芋提取液 1mL , 按 2. 3 项下 步骤连续测定 3 批样品, 还原糖含量分别为 1. 97、1. 95、2. 02g/ 100g , RSD= 1. 82% 。
道微环境、促进矿物质钙、镁、锌、铜等的吸收、调节血 糖、降低血脂、预防肥胖症以及抗癌等生理作用, 对于 调节机体平衡、恢复胃肠功能、促进新陈代谢、预防疾 病有着良好的保健作用[ 2] 。
本研究发现: 菊芋中的还原糖对菊糖含量测定影 响较大。DN S 法[ 3] 操作简便快速、试剂消耗少、重现性 好、杂质干扰小、准确度也能达到分析要求, 故应用广 泛, 但关于此法测定条件的研究未见详细报道。为使 DNS 法更准确地反映菊芋中还原糖含量, 本文进一步
2. 2. 4 验证试验: 由于优选的工艺不包括在正交 表的 9 次试验中, 故对其进行了验证试验。用同一批药
材, 称取 1/ 10 处方量, 按 A 3B2C3 进行对比试验, 测定 水煎浸膏得率及川续断皂苷Ⅵ含量, 结果见表 4。
表 4 验证试验结果
试验组 干浸 膏得率/ % 川续断皂苷Ⅵ提取量 / mg
2
9. 63
C 401. 35 2 200. 67 20. 83 P < 0. 05
D 150. 14 2 75. 07 7. 79 P > 0. 05
川续断皂苷 A 29. 39 2 14. 69 1. 79 P > 0. 05
Ⅵ含量 B 16. 41 2
8. 20
表 2 稳定性试验
t / min 10
20
30
40
50
60
A 0. 150 0. 151 0. 152 0. 153 0. 155 0. 157
2. 6 重复性试验 取同一批供试品溶液 3 份, 按
2. 3 项下的方法测定。结果 RSD= 0. 78% 。表明本法有
较好的重复性。
2. 7 回收率试验 精密吸取已知浓度的供试品
3g , 置 圆 底 烧 瓶 中 加 蒸 馏 水 90mL , 90℃加 热 提 取
50m in, 趁热过滤, 并将滤液定容至 100m L , 备用。
2. 2 DNS 比色法试验条件的选择 2.L , 置于 25mL 具塞试
管中, 补水至 2mL , 加 DNS 液 1. 5mL , 摇 匀, 沸水 浴
15 36
陕西中医 2009 年第 30 卷第 11 期
优化了相关测定条件, 并做了相应的方法学研究, 以期 得到最佳测定条件。
1 实验材 料 1. 1 仪器与试 药 U V-265F W 可见紫外分光光度计; 电热恒温水浴锅; L A-164 型电 子天平; 葡萄糖( 标准品) 。其它所用试剂均为分析纯。
主题词 菊科/ 化学 还原糖/ 化学 @ DNS 法
菊芋, 俗称洋姜, 属药食同源植物; 其中富含的菊 糖, 是由 D-果糖经 -2, 1-糖苷键聚合且末端连有一个 葡萄糖的链状多糖。近年来, 国内外证实它是一种优良 的水溶性膳食纤维和双岐杆菌增值因子, 具有改善肠
* 陕西省科技厅基金项目( FH07343) 西北大学研究生创新基金项目( 08YSY ) △通讯作者 ▲ 陕西省中医药研究院( 西安 710003)
5min, 流水迅速冷却, 加水至刻度。空白调零。在 400～
700nm 扫描, 最后确定以干扰较少、测定稳定 且灵敏
度较高的 540nm 作为测定波长。
2. 2. 2 显色剂用量的确定: 使反应体系与不同浓
度的 DNS 试剂显色, 按 2. 2. 1 项测定。结果表明: 当
显色剂用量增加至 2mL 之后, 吸光度基本保持不变。
摘 要 目的: 建立菊芋中还原糖含量的测定方法。方法: 采用 3, 5-二硝基水杨酸法( DNS 法) , 在 540nm 处测菊芋还原糖含量。结果: 回归方程为 Y= 0. 688X-0. 0165, r= 0. 9994, 线性范 围为 0～1. 2mg / mL , 平均回收率为 96. 78% , RSD= 1. 27% 。结论: 方法简便、精密度高、 重现性好, 为菊芋菊糖的进一步研究奠定良好基础。
1. 2 原料及预处理 购自西安农贸市场, 经鉴定 为菊科菊芋( H elianthus t uberosus L . ) 的干燥根。将 新鲜菊芋根洗净、晾干、切片、60℃下烘干、粉碎、过 20 目筛得干粉备用。
2 方法与结果 2. 1 试液配制 2. 1. 1 DNS 试
剂的配制: 3, 5-二硝基水杨酸 1% , 苯酚 0. 2% , 亚硫
1 537
参考文献
[ 1] 谭晓琼, 董 全, 丁红梅. 功能 保健食 品菊糖的 研究 进展与发展前景[ J] . 中国食物与营养 , 2007, ( 1) : 22-24.
因此, 其最佳用量为 2mL 。
2. 2. 3 显色反应温度的确定: 使反应体系分别在
不同温度下显色, 按 2. 2. 1 项测定其吸光度。结果表
明: 温度高时效果更好, 100℃时吸光度达到最大值, 故
选为最佳反应温度。
2. 2. 4 显色时间的确定: 使反应体系按 2. 2. 1 项
在沸水浴中加热不同时间, 测定其吸光度。
由结果可看出前 6m in 内, 溶液吸光度不断增大,
在 7m in 时达最高值, 随后缓慢降低, 故确定为 7m in。
表 1 显色方式对吸光值的影响
DNS 试剂 吸光度 温度( ℃) 吸光度 ( mL )
加热时 吸光度
间( min)
1. 0
0. 598
60
0. 583
3
0. 647
1. 5
0. 678
陕西中医 2009 年第 30 卷第 11 期
1 535
2. 2. 3 将正交试验结果分析: 结果见表 3。
表 3 干浸膏得率及川续断皂苷Ⅵ提取量方差分析
类别
方差 来源
干浸膏 A
离差平 方和 24. 39
自由度 2
均方 12. 19
F 值 显著性 1. 26 P > 0. 05
得率 B 19. 26
C 184. 85 2 92. 42 11. 25 P > 0. 05
D 37. 62 2 18. 81 2. 29 P > 0. 05
F0. 1( 2. 2) = 9. 00 F0. 05( 2. 2) = 19. 00 F 0. 01( 2. 2) = 99. 00
1
43. 12
21. 11
2
42. 85
21. 38
3
43. 63
21. 23
由上表可见, 以干浸膏得率和川续断皂苷Ⅵ提取 量为指标, 数据较稳定, 且干膏率和含量较高。故确定 A 3B2C3 为最佳工艺, 即药材加水煎煮 3 次, 每次加水 12 倍量, 煎煮 1. 5h。
3 讨 论 本实验研究杜仲、川续断等药材的 水提工艺, 因其主要有效成分为川续断皂苷Ⅵ, 故本实 验以干膏率及川续断皂苷Ⅵ为考察指标, 通过正交试 验结合方差分析结果表明, 水提影响干膏得率的主要 因素是煎煮次数, 加水量和煎煮时间影响较小。水提影 响川续断皂苷Ⅵ得率的主因素也是煎煮次数。最佳提 取工艺为加水 12 倍量, 煎煮 3 次, 每次 1. 5h, 所得浸膏 得率和川续断皂苷Ⅵ含量均较高。
70
0. 608
5
0. 672
2. 0
0. 685
80
0. 651
7
0. 678
2. 5
0. 684
90
0. 679
10
0. 675
3. 0
0. 685
100
0. 682
15
0. 676
2. 2. 5 样液稀释倍数的确定: 按 2. 2. 1 项分别测 定稀释 5 倍、4 倍、3 倍及原样液的吸光度。结果表明: 样液经稀释, 还原糖含量过小, 无明显显色反应, 故以 原样液 1m L 进行测定。 2. 3 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0、 0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、1. 2mL , 分置于 25mL 具塞试 管中, 加水补至 2mL , 各加入 DNS 试液 2mL , 摇匀, 沸 水浴 7min, 流水迅速冷却, 加水至刻度。以空白调零, 在 540nm 处测定吸收度, 以浓度为横坐标, 吸收度为 纵坐标, 绘制标准曲线, 得回归方程为 Y= 0. 688X-0. 0165, r = 0. 9994。发现 0～1. 2mg / mL 范围内线性关 系良好。
酸钠 0. 05% , 氢氧化钠 1% , 酒石酸钾钠 20% , 配好后
于棕色瓶储存 1 周后稳定。
2. 1. 2 对照品溶液的制备: 精密称取 105℃干燥
至 恒 重的葡 萄糖 100mg 于 100mL 容 量瓶 中( 1mg /
mL ) , 加水定容至刻度, 备用。
2. 1. 3 菊芋提取液的制备 : 精密称取药 材粉末
陕西中医 2009 年第 30 卷第 11 期
创时使用的工作波长, 并已在一些国标中采用[ 4] 。本试 验中, 在该波长下可得到最佳线性关系的工作曲线, 且 测量数据的稳定性也较高, 为菊芋的进一步研究利用 提供了基础资料。
3. 3 一个稳定的反应体系, 其反应体积、反应时间 和反应温度都是重要因素。本实验通过对这些因素的 优化, 确定了 DN S 法最佳条件为: 波长 540nm, V DNS / V 总为 1/ 3, 显色煮沸 7min, 整个测定过程应 控制在 1h 内, 且当吸光度在 0. 1-0. 8 之间时, 测糖适宜浓度 为 0. 2-1. 2m g/ m L , 从而使改良后的 DNS 法测定还原 糖更高效、稳定和准确。
讨 论 3. 1 DNS 法是一种快速简便测定还原 糖的方法, 在食品、生物医药等领域经常采用。该方法 是利用还原糖的羰基在弱碱性条件下, 将 3, 5-二硝基 水杨酸还原成棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸, 在一定 范围内还原糖量与棕红色物质的色值成正比, 据此可 测定样品中的还原糖含量。
3. 2 根据“吸 收最大, 干 扰最小”原则, 本文选 用 540nm 作为最佳工作波长, 此波长是 DNS 比 色法首
溶液 3 份, 分别加入高、中、低三种浓度不同的对照品
溶液, 按样品测定方法测定吸光度。结果平均回收率为
96. 78% , RSD= 1. 27% 。
表 3 回收率试验
样品中还原 投入量 测得量 回收率 平均回
R SD
糖含量( mg) ( mg)
( m g)
(%)
收率
0. 2406
0. 1 0. 3362 95. 6
参考文献
[ 1] 国 家药典委员 会, 中华 人民共和 国药典 2005 年版一 部[ M ] . 北京: 化学工业出版社, 2005: 231-232.
( 收稿 2009-05-16; 修回 2009-08-24)
DN S 法测定菊芋中还原糖含量的研究*
仝 瑛 倪士峰△ 刘建利 赵桂仿 蔺小平▲ 西北大学生命科学院( 西安 710069)
2. 4 精密 度试验 取同一样 品溶液连续测定 5 次, 其测定值 分别为 0. 150、0. 149、0. 149、0. 150、0. 151, RSD= 0. 56% , 表明仪器精密度良好。
2. 5 稳定性试验 同一新制备的供试品溶液显 色后, 每 10min 测定一次吸光度。结果表明样品在 1h 内稳定性良好( RSD= 1. 7% ) 。
0. 2406
0. 2 0. 4367 98. 05 96. 78% 1. 27%
0. 2406
0. 4 0. 6273 96. 7
2. 8 样品测定 取菊芋提取液 1mL , 按 2. 3 项下 步骤连续测定 3 批样品, 还原糖含量分别为 1. 97、1. 95、2. 02g/ 100g , RSD= 1. 82% 。
道微环境、促进矿物质钙、镁、锌、铜等的吸收、调节血 糖、降低血脂、预防肥胖症以及抗癌等生理作用, 对于 调节机体平衡、恢复胃肠功能、促进新陈代谢、预防疾 病有着良好的保健作用[ 2] 。
本研究发现: 菊芋中的还原糖对菊糖含量测定影 响较大。DN S 法[ 3] 操作简便快速、试剂消耗少、重现性 好、杂质干扰小、准确度也能达到分析要求, 故应用广 泛, 但关于此法测定条件的研究未见详细报道。为使 DNS 法更准确地反映菊芋中还原糖含量, 本文进一步
2. 2. 4 验证试验: 由于优选的工艺不包括在正交 表的 9 次试验中, 故对其进行了验证试验。用同一批药
材, 称取 1/ 10 处方量, 按 A 3B2C3 进行对比试验, 测定 水煎浸膏得率及川续断皂苷Ⅵ含量, 结果见表 4。
表 4 验证试验结果
试验组 干浸 膏得率/ % 川续断皂苷Ⅵ提取量 / mg
2
9. 63
C 401. 35 2 200. 67 20. 83 P < 0. 05
D 150. 14 2 75. 07 7. 79 P > 0. 05
川续断皂苷 A 29. 39 2 14. 69 1. 79 P > 0. 05
Ⅵ含量 B 16. 41 2
8. 20
表 2 稳定性试验
t / min 10
20
30
40
50
60
A 0. 150 0. 151 0. 152 0. 153 0. 155 0. 157
2. 6 重复性试验 取同一批供试品溶液 3 份, 按
2. 3 项下的方法测定。结果 RSD= 0. 78% 。表明本法有
较好的重复性。
2. 7 回收率试验 精密吸取已知浓度的供试品
3g , 置 圆 底 烧 瓶 中 加 蒸 馏 水 90mL , 90℃加 热 提 取
50m in, 趁热过滤, 并将滤液定容至 100m L , 备用。
2. 2 DNS 比色法试验条件的选择 2.L , 置于 25mL 具塞试
管中, 补水至 2mL , 加 DNS 液 1. 5mL , 摇 匀, 沸水 浴
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陕西中医 2009 年第 30 卷第 11 期
优化了相关测定条件, 并做了相应的方法学研究, 以期 得到最佳测定条件。
1 实验材 料 1. 1 仪器与试 药 U V-265F W 可见紫外分光光度计; 电热恒温水浴锅; L A-164 型电 子天平; 葡萄糖( 标准品) 。其它所用试剂均为分析纯。
主题词 菊科/ 化学 还原糖/ 化学 @ DNS 法
菊芋, 俗称洋姜, 属药食同源植物; 其中富含的菊 糖, 是由 D-果糖经 -2, 1-糖苷键聚合且末端连有一个 葡萄糖的链状多糖。近年来, 国内外证实它是一种优良 的水溶性膳食纤维和双岐杆菌增值因子, 具有改善肠
* 陕西省科技厅基金项目( FH07343) 西北大学研究生创新基金项目( 08YSY ) △通讯作者 ▲ 陕西省中医药研究院( 西安 710003)
5min, 流水迅速冷却, 加水至刻度。空白调零。在 400～
700nm 扫描, 最后确定以干扰较少、测定稳定 且灵敏
度较高的 540nm 作为测定波长。
2. 2. 2 显色剂用量的确定: 使反应体系与不同浓
度的 DNS 试剂显色, 按 2. 2. 1 项测定。结果表明: 当
显色剂用量增加至 2mL 之后, 吸光度基本保持不变。
摘 要 目的: 建立菊芋中还原糖含量的测定方法。方法: 采用 3, 5-二硝基水杨酸法( DNS 法) , 在 540nm 处测菊芋还原糖含量。结果: 回归方程为 Y= 0. 688X-0. 0165, r= 0. 9994, 线性范 围为 0～1. 2mg / mL , 平均回收率为 96. 78% , RSD= 1. 27% 。结论: 方法简便、精密度高、 重现性好, 为菊芋菊糖的进一步研究奠定良好基础。
1. 2 原料及预处理 购自西安农贸市场, 经鉴定 为菊科菊芋( H elianthus t uberosus L . ) 的干燥根。将 新鲜菊芋根洗净、晾干、切片、60℃下烘干、粉碎、过 20 目筛得干粉备用。
2 方法与结果 2. 1 试液配制 2. 1. 1 DNS 试
剂的配制: 3, 5-二硝基水杨酸 1% , 苯酚 0. 2% , 亚硫
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参考文献
[ 1] 谭晓琼, 董 全, 丁红梅. 功能 保健食 品菊糖的 研究 进展与发展前景[ J] . 中国食物与营养 , 2007, ( 1) : 22-24.
因此, 其最佳用量为 2mL 。
2. 2. 3 显色反应温度的确定: 使反应体系分别在
不同温度下显色, 按 2. 2. 1 项测定其吸光度。结果表
明: 温度高时效果更好, 100℃时吸光度达到最大值, 故
选为最佳反应温度。
2. 2. 4 显色时间的确定: 使反应体系按 2. 2. 1 项
在沸水浴中加热不同时间, 测定其吸光度。
由结果可看出前 6m in 内, 溶液吸光度不断增大,
在 7m in 时达最高值, 随后缓慢降低, 故确定为 7m in。
表 1 显色方式对吸光值的影响
DNS 试剂 吸光度 温度( ℃) 吸光度 ( mL )
加热时 吸光度
间( min)
1. 0
0. 598
60
0. 583
3
0. 647
1. 5
0. 678
陕西中医 2009 年第 30 卷第 11 期
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2. 2. 3 将正交试验结果分析: 结果见表 3。
表 3 干浸膏得率及川续断皂苷Ⅵ提取量方差分析
类别
方差 来源
干浸膏 A
离差平 方和 24. 39
自由度 2
均方 12. 19
F 值 显著性 1. 26 P > 0. 05
得率 B 19. 26
C 184. 85 2 92. 42 11. 25 P > 0. 05
D 37. 62 2 18. 81 2. 29 P > 0. 05
F0. 1( 2. 2) = 9. 00 F0. 05( 2. 2) = 19. 00 F 0. 01( 2. 2) = 99. 00
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21. 38
3
43. 63
21. 23
由上表可见, 以干浸膏得率和川续断皂苷Ⅵ提取 量为指标, 数据较稳定, 且干膏率和含量较高。故确定 A 3B2C3 为最佳工艺, 即药材加水煎煮 3 次, 每次加水 12 倍量, 煎煮 1. 5h。
3 讨 论 本实验研究杜仲、川续断等药材的 水提工艺, 因其主要有效成分为川续断皂苷Ⅵ, 故本实 验以干膏率及川续断皂苷Ⅵ为考察指标, 通过正交试 验结合方差分析结果表明, 水提影响干膏得率的主要 因素是煎煮次数, 加水量和煎煮时间影响较小。水提影 响川续断皂苷Ⅵ得率的主因素也是煎煮次数。最佳提 取工艺为加水 12 倍量, 煎煮 3 次, 每次 1. 5h, 所得浸膏 得率和川续断皂苷Ⅵ含量均较高。
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2. 2. 5 样液稀释倍数的确定: 按 2. 2. 1 项分别测 定稀释 5 倍、4 倍、3 倍及原样液的吸光度。结果表明: 样液经稀释, 还原糖含量过小, 无明显显色反应, 故以 原样液 1m L 进行测定。 2. 3 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0、 0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、1. 2mL , 分置于 25mL 具塞试 管中, 加水补至 2mL , 各加入 DNS 试液 2mL , 摇匀, 沸 水浴 7min, 流水迅速冷却, 加水至刻度。以空白调零, 在 540nm 处测定吸收度, 以浓度为横坐标, 吸收度为 纵坐标, 绘制标准曲线, 得回归方程为 Y= 0. 688X-0. 0165, r = 0. 9994。发现 0～1. 2mg / mL 范围内线性关 系良好。
酸钠 0. 05% , 氢氧化钠 1% , 酒石酸钾钠 20% , 配好后
于棕色瓶储存 1 周后稳定。
2. 1. 2 对照品溶液的制备: 精密称取 105℃干燥
至 恒 重的葡 萄糖 100mg 于 100mL 容 量瓶 中( 1mg /
mL ) , 加水定容至刻度, 备用。
2. 1. 3 菊芋提取液的制备 : 精密称取药 材粉末
陕西中医 2009 年第 30 卷第 11 期
创时使用的工作波长, 并已在一些国标中采用[ 4] 。本试 验中, 在该波长下可得到最佳线性关系的工作曲线, 且 测量数据的稳定性也较高, 为菊芋的进一步研究利用 提供了基础资料。
3. 3 一个稳定的反应体系, 其反应体积、反应时间 和反应温度都是重要因素。本实验通过对这些因素的 优化, 确定了 DN S 法最佳条件为: 波长 540nm, V DNS / V 总为 1/ 3, 显色煮沸 7min, 整个测定过程应 控制在 1h 内, 且当吸光度在 0. 1-0. 8 之间时, 测糖适宜浓度 为 0. 2-1. 2m g/ m L , 从而使改良后的 DNS 法测定还原 糖更高效、稳定和准确。
讨 论 3. 1 DNS 法是一种快速简便测定还原 糖的方法, 在食品、生物医药等领域经常采用。该方法 是利用还原糖的羰基在弱碱性条件下, 将 3, 5-二硝基 水杨酸还原成棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸, 在一定 范围内还原糖量与棕红色物质的色值成正比, 据此可 测定样品中的还原糖含量。
3. 2 根据“吸 收最大, 干 扰最小”原则, 本文选 用 540nm 作为最佳工作波长, 此波长是 DNS 比 色法首
溶液 3 份, 分别加入高、中、低三种浓度不同的对照品
溶液, 按样品测定方法测定吸光度。结果平均回收率为
96. 78% , RSD= 1. 27% 。
表 3 回收率试验
样品中还原 投入量 测得量 回收率 平均回
R SD
糖含量( mg) ( mg)
( m g)
(%)
收率
0. 2406
0. 1 0. 3362 95. 6
参考文献
[ 1] 国 家药典委员 会, 中华 人民共和 国药典 2005 年版一 部[ M ] . 北京: 化学工业出版社, 2005: 231-232.
( 收稿 2009-05-16; 修回 2009-08-24)
DN S 法测定菊芋中还原糖含量的研究*
仝 瑛 倪士峰△ 刘建利 赵桂仿 蔺小平▲ 西北大学生命科学院( 西安 710069)
2. 4 精密 度试验 取同一样 品溶液连续测定 5 次, 其测定值 分别为 0. 150、0. 149、0. 149、0. 150、0. 151, RSD= 0. 56% , 表明仪器精密度良好。
2. 5 稳定性试验 同一新制备的供试品溶液显 色后, 每 10min 测定一次吸光度。结果表明样品在 1h 内稳定性良好( RSD= 1. 7% ) 。