11 麦芽糖检验操作规程

编号：ZL-SOP-QC-011-00
目的：建立麦芽糖检验操作规程
范围：本规程适用麦芽糖检验
责任人：质检科原辅料检定人员
内容：
1.器具：分析天平、PH计、电热恒温干燥箱、高效液相色谱仪、干燥器、高温电炉、电炉、旋光仪、水浴箱、蒸馏装置一套、水分仪、砂轮、75%酒精棉球、烧杯、试管架、封口膜、不锈钢药匙、刻度吸管、容量瓶、量筒、砷盐反应装置一套、纳氏比色管、滴管、坩埚、烧杯、塑料洗瓶
2.试剂：
氨试剂、磷酸盐标准缓冲液（PH4、PH6.86）、淀粉指示液、碘试液、碱性硫酸铜试液、10%氢氧化钠溶液、硝酸、稀硝酸、盐酸、硝酸银试液、5%硫酸铜溶液、标准氯化钠溶液、25%氯化钡溶液、标准硫酸钾溶液、硫酸钾、无水硫酸钠、30%硫酸铜溶液、40%氢氧化钠溶液、2%硼酸溶液、无水甲醇、费休试液、硫酸、标准铅溶液、醋酸盐缓冲液（PH3.5）、硫代乙酰胺试液、溴化汞试纸、醋酸铅棉花、稀硫酸、氨试液、碘化钾试液、
盐酸、锌粒、酸性氯化亚锡试液、溴试液、标准砷、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、无菌聚山梨酯80、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基。

本品为4-O-a-D-吡喃葡萄基-β-吡喃葡萄糖一水合物。

按无水物计算，含C12H22O11不得少于98%。

3.性状：本品为白色晶体或结晶性粉末，味甜。

本品在水中易溶，在乙醇中极微溶，在乙醚中几乎不溶。

4.比旋度：
4.1操作步骤
4.1.1取样品在80℃干燥4小时。

4.1.2精确称取10g干燥后的样品置100ml容量瓶中，加入氨试液0.2ml，加水将样品充分溶解后，加水稀释至100ml，摇匀。

4.1.3将旋光仪电源打开，预热半小时，用钠光谱的D线（589.3nm）测定旋光度，测定管的长度为1dm，测定温度为20℃。

4.1.4将测定管用样品溶液冲洗三次后，缓缓注满样品溶液，注意不要产生气泡。

4.1.5将测定管置旋光仪内，仪器显示的读数即为样品溶液旋光度。

4.2计算
100α
[α] t D=
lc
式中-------比旋度l---------测定管长度；dm
D-----------钠光谱的D线α--------测得的旋光度
t-------------测定时的温度，℃
c-------------每100ml溶液中含有被测物质的重量，g
4.3结果判定
比旋度为+126°至131°判为合格。

4.4注意事项
4.4.1每次测定前应以溶剂作空白校正，测定后，再校正1次，以确定测定时零点有无变动，如第二次校正时发现零点有变动，则应重新测定旋光度。

4.4.2配制溶液及测定时，均应调节温度至20℃±0.5℃
4.4.3旋光仪应定期校正。

5鉴别
5.1操作步骤
5.1.1称取样品0.5g，置烧杯中，加水5ml使其溶解。

5.1.2向烧杯中加入氨试液5ml。

5.1.3将烧杯置水浴中加热5分钟，观察溶液颜色变化并记录。

5.1.4溶液呈橙色，符合规定。

5.1.5将碱性硫酸铜试液置电炉上（取10%氢氧化钠溶液2ml，加入5%硫酸铜溶液4~5滴，混匀，临用新制）煮沸。

5.1.6取本品0.1g加水5ml溶解，取2~3滴，滴加到煮沸的碱性硫酸铜试液中，观察溶液变化并记录。

5.1.7溶液生成红色沉淀，符合规定。

5.1.8在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

5.2结果判定：
上述所有反应现象均发生，判为符合规定。

6.检查
6.1酸碱度：
6.1.1操作步骤
6.1.1.1称取样品1.0g，置烧杯中，加水10ml使溶解。

6.1.1.2按《通用pH测定标准操作规程》和《pH计使用标准操作规程》进行操作测定样品溶液pH值。

6.1.2结果判定
pH值4.5~6.5，则判为符合规定。

6.2氯化物
6.2.1操作步骤
6.2.1.1取本品0.4g，加水溶解使成25ml，
6.2.1.2滴加硝酸使成微酸性；
6.2.1.3置水浴中加热除尽二氧化碳，放冷；
6.2.1.4将烧杯中溶液倒入50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，溶液如不澄清，应滤过，再加水使成40ml，摇匀，即得供试品溶液。

6.2.1.5吸取标准氯化钠溶液
7.2ml用同一方法制成对照溶液；
6.2.1.6依据《通用氯化物检测标准操作规程》检查；于供试品溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟。

6.2.1.7观察比较样品管与标准对照管颜色深浅，并记录观察结果。

6.2.2结果判定：样品管颜色不深于标准对照管（0.018％），判为合格。

6.3硫酸盐
6.3.1操作步骤
6.3.1.1取本品1.0g，加水溶解并使成40ml。

6.3.1.2滴加盐酸使成中性，溶液如不澄清，应滤过。

6.3.1.3将烧杯中溶液倒入50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml，摇匀，即得供试品溶液。

6.6.1.4吸取标准硫酸钾溶液2.4ml用同一方法制成对照溶液；
6.3.1.5依据《通用硫酸盐检测标准操作规程》检查；于供试品溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5ml，用水稀释使成50ml，充分摇匀，在暗处放置10分钟。

6.3.1.6观察比较样品管与标准对照管颜色深浅，并记录观察结果。

6.3.2结果判定：样品管颜色不深于对照管（0.024％），判为合格。

6.4糊精、淀粉及亚硫酸盐：
6.4.1.操作步骤
6.4.1.1称取样品1.0g，置烧杯中，加水10ml使其溶解。

6.4.1.2加入碘试液1滴，观察溶液颜色，并记录。

6.4.1.3再加入淀粉指示液1滴，观察液体颜色，并记录。

6.4.2结果判定
第一次观察，液体应呈黄色，第二次观察，液体应呈蓝色，两次观
察现象均发生判为合格，否则均判为不合格。

6.5有关物质
6.5.1操作步骤
6.5.1.1取本品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液；
6.5.1.2从供试品溶液中精密量取1ml，置100ml量瓶中加水稀释至刻度，摇匀，作为对照液。

6.5.1.3照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度使主成分峰高为满量程的15%~25%。

6.5.1.4精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍。

6.5.1.5供试品溶液色谱图中，除溶剂峰外，主成分峰之前的杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（1.5%）；
6.5.1.6主成分峰之后的杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%）
6.6含氮量
6.6.1操作步骤
6.6.1.1精密称取本品2.0g，置干燥的50ml凯氏烧瓶中加硫酸钾（或无水硫酸钠）0.3g与30%硫酸铜溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0ml；
6.6.1.3在凯氏烧瓶口放一小漏斗，并使凯氏烧瓶成45°斜置，用小火缓缓加热使溶液成澄明的绿色。

6.6.1.4除另有规定外，继续加热10分钟，放冷，加水2ml。

6.6.1.5取2%硼酸溶液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂5滴，将冷凝管尖端插入液面下。

6.6.1.6将凯氏烧瓶中内容物经由D漏斗转入C蒸馏瓶中，用水少量淋洗凯氏烧瓶及漏斗数次，再加入40%氢氧化钠溶液10ml，用少量水再洗漏斗数次。

6.6.1.7关G夹，加热A瓶进行蒸汽蒸馏，至硼酸液开始由酒红色变为蓝绿色时起，继续蒸馏约10分钟后，将冷凝管尖端提出液面，使蒸汽继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。

6.6.1.8馏出液用硫酸滴定液（0.005mol/L）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验（空白和供试品所得馏出液的容积应基本相同，约70~75ml）校正。

每1ml硫酸滴定液（0.005mol/L）相当于0.1401mg 的N。

按公式计算:
（V X-V0）×c×14.01×n×2
氮含量（mg/ml）= ×100%
V
式中V X为供试品消耗酸滴定液的体积，ml；
V0为空白消耗酸滴定液的体积，ml;
c为硫酸滴定液的浓度，mol/L；
n为供试品的稀释倍数；
V为供试品溶液的体积，ml；
14.01为氮的相对原子质量
6.6.1.9判断结果：
含氮量不得过0.01%，判为符合规定。

注：取用的供试品如在0.1g以上时，应适当增加硫酸的用量，使消解作用完全，并相应地增加40%氢氧化钠溶液的用量。

6.7.水分
6.7.1操作步骤
6.7.1.1精密称取本品适量，除另有规定外溶剂为无水甲醇，用水分测定仪直接测定。

6.7.1.2或精密称取供试品适量（约消耗费休试液1~5ml），置干燥的具塞玻璃瓶中，加溶剂适量，在不断振摇（或搅拌）下用费休试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，另做空白试验，按公式计算：
（A-B）F
供试品中水分含量（%）= ×100%
W
式中A为供试品所消耗费休试液的体积，ml;
B为空白所消耗费休试液的体积，ml;
F为每1ml费休试液相当于水的重量，mg；
W为供试品的重量，mg。

6.7.1.3结果判定：
含水分应为4.5%~6.5%；如为无水物，含水分应不得过1.5%。

6.8干燥失重：
6.8.1操作步骤
6.8.1.1将坩埚炽灼至恒重，记录重量W0 ，放入干燥器内备用。

6.8.1.2取样品约1.0g，放入坩埚内，精密称定，记录重量W1。

6.8.1.3将坩埚置电热恒温干燥箱中，80℃干燥至恒重，记录重量W2。

6.8.2计算
W2 —W0
减失重量= × 100%
W1 —W0
6.8.3结果判定
减失重量≤0.5%判为合格。

6.9炽灼残渣：
6.9.1操作步骤
6.91.1将坩埚炽灼至恒重，放入干燥器内备用，记录重量W0 。

6.91.2取样品约1.0g，放入坩埚内，精密称定，记录重量W1。

6.9.1.3将坩埚放电炉上，缓缓加热，将样品炽灼至完全炭化，放冷至室温。

6.9.1.4滴加硫酸0.5-1ml，使坩埚内残渣湿润，将坩埚放电炉上，低温加热至硫酸蒸气除尽。

6.9.1.5将坩埚置高温电炉中700-800℃炽灼使残渣完全灰化。

6.9.1.6当坩埚炽灼至恒重后，精密称定，记录重量W2。

6.9.2计算
W2 —W0
炽灼残渣= × 100%
W1 —W0
6.9.3结果判定
炽灼残渣≤0.1%判为合格。

6.10重金属
6.10.1操作步骤
6.10.1.1称取样品5.0g，置纳氏比色管A中，加水10ml使溶解。

6.10.1.2用刻度吸管取标准铅溶液2.0ml，加入纳氏比色管B中。

6.10.1.3向A、B管中分别加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml后，并分别加水使成25ml。

6.10.1.4向A、B管中分别加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀。

6.10.1.5放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，比较溶液颜色深浅，并记录。

6.10.2结果判定
6.10.2.1 A管颜色较B管浅，判为合格。

6.10.2.2 A管颜色较B管深，判为不合格。

6.11砷
6.11.1操作步骤
6.11.1.1称取样品1.5g，置烧杯中，加水5ml溶解。

6.11.1.2向烧杯中加入稀硫酸5ml及溴试液1ml。

6.11.1.3将烧杯置水浴上加热5分钟后放电炉上将液体浓缩至约5ml。

6.11.1.4将液体冷却后加盐酸5ml与水23ml使溶解。

6.11.1.5按《通用砷盐检查标准操作规程》制做标准砷斑和样品砷斑。

6.11.2结果判定
6.11.2.1样品砷斑颜色较标准砷斑颜色浅，判为合格。

6.11.2.2样品砷斑颜色较标准砷斑颜色深，判为不合格。

6.12微生物限度：
6.12.1操作步骤
6.12.1.1检查供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定，按计数方法试验程序进行供试液制备。

取供试品10g，加pH
7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1:10的供试液。

6.12.1.2必要时加适量的无菌聚山梨酯80，平置水浴中适当加温使供试品分散均匀。

将样品液分别稀释成1:10、1:102、1:103等稀释级的供试液。

6.12.1.3平皿法根据菌数规则取相应稀释级的供试液1ml，置直径90mm 的无菌平皿中，注入15~20ml温度不超过45℃的融化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基,混匀，凝固，倒置培养。

每稀释级每种培养基至少制
备2个平板。

6.12.1.4阳性对照试验取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固哦，倒置培养。

每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。

6.12.1.5细菌需在30~35℃培养三天，霉菌、酵母菌需在23~28℃培养五天。

逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。

6.12.1.6计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌落数报告规则报告菌数。

若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

6.12.1.7菌数报告规则细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu、霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。

以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1ml或10cm2供试品中所含的菌数。

6.12.2结果判定
6.12.2.1 每1g供试品中细菌数≤1000个霉菌及酵母菌数≤100个外，还不得检出大肠埃希菌，判为符合规定。

6.13含量测定
6.13.1操作步骤
6.13.1.1照高效液相色谱法（附录V D）测定，取本品适量，精密称定。

6.13.1.2加水溶解并定量稀释制成每1ml约含麦芽糖10mg的溶液。

6.13.1.3精密量取20μl,注入液相色谱仪，记录色谱图；
6.13.1.4另取麦芽糖对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算：
A X
含量（cx）= c R
A R
式中符号：cx为供食品的浓度；
A X为供试品的峰面积或峰高；
A R为对照品的峰面积或峰高；
c R为对照品的浓度；
注：由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中成分或杂质含量时，以定量环或自动进样器进样为好。