嗜血杆菌属鉴定
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Ⅲa
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Ⅳ
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Ⅳ
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Ⅴ
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Ⅴ
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Ⅵ
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Ⅵ
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Ⅶ
+
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Ⅶ
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Ⅷ
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Ⅷ
二、试验方法
1．卫星试验：挑取可疑菌落密涂划种于血平板上或M—H平板上，再将金黄色葡萄球菌点种或划种其上，35℃24h孵育。如葡萄球菌菌落邻近处被检菌的菌落较大，远离葡萄球菌菌落处的菌落小或不生长，即“卫星”试验阳性。在血平皿上划上葡萄球菌时，X，V因子都具备，在M-P,平板上接种葡萄球菌、只具备V因子。
表嗜血杆菌属中种的特征
嗜血杆菌
因子
β
溶血
发酵
触酶
CO2促进生长
ONPGb
X
V
葡萄糖
蔗糖
乳糖
甘露糖
木糖
流感嗜血杆菌a
+
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D
+
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溶血嗜血杆菌
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杜克雷嗜血杆菌
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副流感嗜血杆菌
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副溶血嗜血杆菌
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迟缓嗜血杆菌
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W
W
2．糖发酵试验
培养基：1％糖的酚红肉汤，并补充所需生长因子，方法参考奈瑟菌鉴定。
3．吲哚(快速法)试验：在pH 6.8的磷酸缓冲液(0.05mol)中，加0.1％的L-色氨酸。大量接种被检菌，孵育4h后，加Kovacs试剂。
4．尿素酶试验
培养基：
KH2PO40.1gK2HPO40.1％
NaCl0.5g0.2％酚红水溶液0.5ml
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D
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副嗜沫嗜血杆菌
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嗜沫嗜血杆菌
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东莞市新涌医院
检验科
嗜血杆菌属鉴定
作业指导书
文件编号：
第2页，共2页
版本：第一版，第0次修改
生效日期：2011年4月
(1)流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌的鉴定。
用金黄色葡萄球菌作“卫星”试验阳性。但应注意“副流感”只需V因子即生长。可同时用M—H平板作卫星试验，能在M—H平板呈卫星生长的菌可否定流感嗜血杆菌。二者也可用糖发酵试验加以鉴别。
氨
酸
脱
羧
酶
葡
萄
糖
蔗
糖
乳
糖
甘
露
糖
硝
酸
盐
还
原
触
酶
嗜沫嗜血杆菌
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副嗜沫嗜血杆菌
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伴放线杆菌
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D
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侵蚀艾肯菌
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人心脏杆菌
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-产靛基质金氏菌-源自-+-
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嗜血红素嗜血杆菌
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2．属内鉴别可利用分离培养时，对X、V因子的需要和溶血性可初步区别不同的嗜血杆菌种。
东莞市新涌医院
检验科
嗜血杆菌属鉴定
作业指导书
文件编号：
第1页，共2页
版本：第一版，第0次修改
生效日期：2011年4月
一、常规鉴定
1．与相关菌属、种的鉴别：嗜血杆菌属常与放线菌属、艾肯菌属、心杆菌属、金氏菌属相鉴别，见下表。
表嗜血杆菌属菌种与相关菌种鉴别试验
菌种
需
要
X
因
子
需
要
V
因
子
靛
基
质
鸟
氨
酸
脱
羧
酶
赖
(2)作为院内感染病源追踪的流行病学的需要，对流感、副流感嗜血杆菌须鉴定到型。可用吲哚、尿素、鸟氨酸3个试验将“流感嗜血杆菌”分为8个生物型(详见表)，或用血清学进行分型。
表流感嗜血杆菌及副流感嗜血杆菌生物型鉴别
靛基质
尿素
鸟氨酸脱羧
靛基质
尿素
鸟氨酸脱羧
流感嗜血杆菌
副流感嗜血杆菌
Ⅰ
+
+
+
Ⅰ
-
-
+
Ⅱ
+
+
蒸馏水100ml
pH 7.0高压后加20％的尿素溶液10.4ml。
方法：与其他菌相同。注意接种量要大，4小时观察结果。
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二、试验方法
1．卫星试验：挑取可疑菌落密涂划种于血平板上或M—H平板上，再将金黄色葡萄球菌点种或划种其上，35℃24h孵育。如葡萄球菌菌落邻近处被检菌的菌落较大，远离葡萄球菌菌落处的菌落小或不生长，即“卫星”试验阳性。在血平皿上划上葡萄球菌时，X，V因子都具备，在M-P,平板上接种葡萄球菌、只具备V因子。
表嗜血杆菌属中种的特征
嗜血杆菌
因子
β
溶血
发酵
触酶
CO2促进生长
ONPGb
X
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葡萄糖
蔗糖
乳糖
甘露糖
木糖
流感嗜血杆菌a
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溶血嗜血杆菌
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杜克雷嗜血杆菌
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副流感嗜血杆菌
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迟缓嗜血杆菌
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2．糖发酵试验
培养基：1％糖的酚红肉汤，并补充所需生长因子，方法参考奈瑟菌鉴定。
3．吲哚(快速法)试验：在pH 6.8的磷酸缓冲液(0.05mol)中，加0.1％的L-色氨酸。大量接种被检菌，孵育4h后，加Kovacs试剂。
4．尿素酶试验
培养基：
KH2PO40.1gK2HPO40.1％
NaCl0.5g0.2％酚红水溶液0.5ml
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东莞市新涌医院
检验科
嗜血杆菌属鉴定
作业指导书
文件编号：
第2页，共2页
版本：第一版，第0次修改
生效日期：2011年4月
(1)流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌的鉴定。
用金黄色葡萄球菌作“卫星”试验阳性。但应注意“副流感”只需V因子即生长。可同时用M—H平板作卫星试验，能在M—H平板呈卫星生长的菌可否定流感嗜血杆菌。二者也可用糖发酵试验加以鉴别。
氨
酸
脱
羧
酶
葡
萄
糖
蔗
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甘
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嗜沫嗜血杆菌
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副嗜沫嗜血杆菌
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伴放线杆菌
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嗜血红素嗜血杆菌
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2．属内鉴别可利用分离培养时，对X、V因子的需要和溶血性可初步区别不同的嗜血杆菌种。
东莞市新涌医院
检验科
嗜血杆菌属鉴定
作业指导书
文件编号：
第1页，共2页
版本：第一版，第0次修改
生效日期：2011年4月
一、常规鉴定
1．与相关菌属、种的鉴别：嗜血杆菌属常与放线菌属、艾肯菌属、心杆菌属、金氏菌属相鉴别，见下表。
表嗜血杆菌属菌种与相关菌种鉴别试验
菌种
需
要
X
因
子
需
要
V
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子
靛
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质
鸟
氨
酸
脱
羧
酶
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(2)作为院内感染病源追踪的流行病学的需要，对流感、副流感嗜血杆菌须鉴定到型。可用吲哚、尿素、鸟氨酸3个试验将“流感嗜血杆菌”分为8个生物型(详见表)，或用血清学进行分型。
表流感嗜血杆菌及副流感嗜血杆菌生物型鉴别
靛基质
尿素
鸟氨酸脱羧
靛基质
尿素
鸟氨酸脱羧
流感嗜血杆菌
副流感嗜血杆菌
Ⅰ
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Ⅰ
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Ⅱ
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蒸馏水100ml
pH 7.0高压后加20％的尿素溶液10.4ml。
方法：与其他菌相同。注意接种量要大，4小时观察结果。