苦楝皮苦楝果中苦楝素含量的薄层_比色法测定研究

图 3 显色剂用量对反应的影响 供试品溶液的制备 准确量 (或称) 取苦楝皮 (果) 提取 液 2ml 、苦楝皮 (果) 药材 (烘干 ,粉碎) 2g ,前者加等理的硅藻 土混匀 ,80 ℃烘干 ,放入 100ml 索氏提取器中 ,加瓷环或沸石 2～3 块 ,加石油醚 80ml ,在水浴中加热脱脂 3～4 小时 。经 滤纸试验证明脱脂完全后 ,取出滤纸筒 ,挥去石油醚 ,再用苯 80ml 回流提取 ,至苯液 (蒸干 ,残渣溶于丙酮) 与对二甲氨基 苯甲醛试液不起反应为止 ,蒸去苯 ,残留物用甲醇溶解完全 ,
〔1〕柯铭清. 中草药有效成分理化与药理特性 (修订本)〔M〕. 长沙 :湖 南科学技术出版社 ,1982 :455
〔2〕广西壮族自治区医药研究所〔J 〕. 中草药通讯 ,1971 , (2) :30 〔3〕王雪芬 ,等. 苦楝素的纸层分离定量研究〔J 〕. 广西卫生 , 1980 ,
(3) :18 〔4〕顾静文 ,刘立鼎 ,肖忆良 ,等. 苦楝果实植物杀虫剂的开发研究
Байду номын сангаас
中 医 药 学 刊 2003 年 1 月第 21 卷第 1 期
文章编号 :1009 - 5276 (2003) 01 - 0159 - 02 中图分类号 : R931. 6 文献标识码 :A 收稿日期 :2002 - 07 - 28
苦楝皮苦楝果中苦楝素含量的薄层 - 比色法测定研究
吴安安1 张 弦2 潘 扬2 王天山2
中药高位保留灌肠在重型肝炎的治疗中具有独特疗效 , 灌肠中药多选用清热利湿 、利胆退黄 、通腑泄浊 、醒脑开窍
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样品测定 精密吸取供试品溶液 100～300μl ,点于硅胶 G薄层板上 ,同时在板的两侧点上相同的对照品溶液作为阳 性对照 (指示区) ,以苯 - 醋酸乙酯 - 冰醋酸 (8 :8 :0. 5) 为展 开剂饱和 1 小时 ,然后上行展开 9cm ,取出 ,晾干 ,板两侧 (指 示区) 的点用 10 %硫酸加热显色 ,在紫外光灯下 (365nm) 应 显黄色荧光斑点 。根据色斑所在位置 ,决定定量部位的条斑 范围 。刮以所定范围的硅胶 ,装入小柱内 (1 ×10cm) ,以甲 醇洗脱至苦楝素反应为阴性 。洗脱液蒸干 ,残渣用甲醇转移 至 10ml 具塞刻度试管中 ,定容成 4ml ,按“标准曲线的绘制” 项下 ,精密加入对二甲氨基苯甲醛试液 4ml ,放置 30 分钟 , 以甲醇为参比液 ,于 510nm 处测定其吸收度 ,标准曲线法计 算样品中苦楝素的百分含量 ( g/ 100ml 或 g/ 100g) 。测定结 果见表 2 。
浓度 C( mg/ ml) 0. 03 0. 06 0. 09 0. 12 0. 15
R = 0. 9985 A = 0. 52C + 0. 0364 0. 03～0. 15
吸光度值 A 0. 052 0. 067 0. 085 0. 097 0. 115
回收率试验 结果表明 :平均回收率为 93. 22 % , RSD 为 1. 07 %。
中医静脉注射剂的发展使中医治疗急 、危 、重症迈上了
一个新台阶 。茵栀黄注射液具有可靠的清热 、利湿 、退黄作 用 ;清开灵注射液有清热化痰 、醒脑开窍 、护肝退黄作用 ;复 方丹参注射液具有改善肝脏微循环 、抗肝纤维化 、促进肝细 胞再生作用〔3〕。
辨证施治是中医学的基本特点 ,辨证与辨病相结合则可 进一步提高临床疗效 。茵虎汤是我们针对重型肝炎的治疗 而总结的经验方 ,具有扶正祛邪 ,化瘀解毒 ,利湿退黄 ,通腑 利胆作用 ,对重型肝炎的治疗具有显著疗效〔4〕。
试剂和 药 品 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯 , 苦 楝 素 ( toosen2 danin) 对照品 :色谱纯 ,广西壮族自治区中医药研究所提取 、 分离 。苦楝皮 (果) 提取液 、药材苦楝皮 (果) 由南京中医药大 学中医药研究院提供 。
仪 器 UV - 2100 紫外分光光度计 (日本岛津) 。 2 实验方法
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苦楝皮苦楝果中苦楝素含量的薄层 - 比色法测定研究
图 4 显色温度 ( ℃) 对反应的影响 转移至 5ml 量瓶 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 。若溶解液混浊 ,可过 滤后定容 。
(1. 安徽省黄山市药品检验所 ,242700 ,安徽黄山 ;2. 南京中医药大学江苏省中药质量控制工程技术研究中心 , 210029 ,江苏南京/ / 第一作者男 ,1972 年生 ,主管药师)
摘 要 :为控制产品质量 ,探讨甘楝皮 、苦楝果中苦楝素含量的薄层 - 比色法测定方法 。实验方法 :测定波长 的选择供试品及空白对照品 UV 图谱的比较 ,反应条件 ,显色剂的用量 、标准曲线的绘制等 。 关 键 词 :苦楝皮 ; 苦楝果 ; 苦楝素含量 ; 研究
〔J 〕. 江西科学 ,1995 ,13 (3) :142
(上接第 152 页) 中医认为其病机为湿热疫毒之邪阻滞中焦 、 熏蒸肝胆 ,致肝失疏泄 ,胆汁排泄失常 ,外溢肌肤 ,下注膀胱 则形成黄疸 ;若热毒炽盛 ,内陷心包则出现昏迷 ;若湿热疫毒 化火 ,灼伤血络 ,迫血妄行 ,则出血 ;晚期肝 、脾 、肾俱伤 ,肝失 疏泄 ,脾失健运 ,肾失开阖 ,气 、血 、水及湿热浊邪停聚腹中则 形成鼓胀 ;进而气机升降失常 ,上下不通而出现关格危象 。 由于重型肝炎病机复杂 ,进展迅速 ,临床上单靠某种药物或 疗法难以奏效 ,所以应中西医结合 、多途径给药 ,以顿挫病 势 ,阻止肝细胞进一步坏死 ,进而恢复肝脏功能 。
对照品溶液的制备 取苦楝素对照品适量 ,精密称定 , 加甲醇制成 1. 2mg/ ml 的溶液作为对照品溶液 。
标准曲线的绘制 吸取对照品溶液 0 、100 、200 、300 、 400 、500μl ,分别置 6 个 10ml 的具塞刻度试管中 ,各加甲醇 4. 0 、3. 9 、3. 8 、3. 7 、3. 6 、3. 5ml 后 ,精密加入对二甲氨基苯甲 醛试液 4ml ,放置 30 分钟 ,以 0μl 者为空白对照 ,于 510nm 处测定其吸收度 ,以浓度为横坐标 ,吸收度为纵坐标 ,绘得标 准曲线 (图 5) 。用最小二乘法计算 ,得回归方程为 A = 0. 52C + 0. 0364 ,相关系数为 R = 0. 9985 。表明苦楝素在 0. 03 ～0. 15mg/ ml 范围内具有良好的线性关系 ,结果见表 1 。
图 5 苦楝素对照品的标准曲线及回收率 精密度试验 取同一供试品 ,依法测定 6 次 ,平均含量 为 0. 075 % ,RSD 为 5. 01 %。
表 1 苦楝素对照品的线性关系
浓度 C(μl)
100 200 300 400 500 相关系数 ( R) 回归方程 线性范围 (mg/ ml)
图 1 苦楝素对照品的紫外 - 可见光吸收光谱图 结果表明 :在λ= 510. 0nm 有最大吸收峰 ,确定该波长 为测定波长 。 供试品及空白对照品 UV 图谱的比较 测定苦楝皮 (果) 提取液 、苦楝皮 (果) 药材的 UV 图谱 ,结果表明 :苦楝皮 (果) 提取液 、苦楝皮 (果) 药材的 UV 图谱与苦楝素对照品的 UV 图谱基本一致 ,在波长约 510nm 处有最大吸收 。 反应条件 显色时间及稳定性试验 :取供试品溶液 ,点 于硅胶 G 薄层板上 ,同前操作 ,展开 ,洗脱 ,显色 ,用甲醇作 参比液 ,分别于 0 、5 、10 、15 、20 、30 、40 分钟及 1 、1. 5 、2 、2. 5 、
测定波长的选择 首先测定苦楝素对照品溶液及参比 液甲醇的 UV 图谱 ,结果见图 1 。
3 、3. 5 、4 小时后测定其吸收度 ,在 20 分钟至 2 小时内结果 基本无变化 ,表明选择这段时间进行测定 ,样品显色的稳定 性较好 (图 2) 。
图 2 显色时间对反应的影响及其稳定性试验 显色剂的用量 取对照品溶液 ,分别用甲醇定容成 7 、6 、 5 、4. 5 、4 、3. 5 、3 、2 、1ml ,各加入 1 、2 、3 、3. 5 、4 、4. 5 、5 、6 、7ml 对 二甲氨基苯甲醛试液 ,均显色 30 分钟后 ,用甲醇作参比液 ,测 定其吸收度 ,在对照品溶液与试液比例在 9 :7～7 :9 之间结果 基本稳定 ,表明选择溶液与试液比例为 1 :1 较好 (图 3) 。
表 2 样品测定结果
样品 苦楝皮 3
第一次 0. 35
苦楝素含量 ( %) 第二次 0. 38
第三次 0. 36
苦楝果
0. 84
0. 85
0. 84
苦楝皮提取液 3 3
0. 39
0. 38
0. 38
苦楝果提取液
0. 47
0. 49
0. 48
注 : 3 单位为 g/ 100g ; 3 3 单位为 g/ 100ml 参考文献
苦楝皮 、苦楝果分别为楝树科植物苦楝 Melia azedarach L . 或川楝 Melia toosendan Sieb. et Zucc. 的树皮或根皮和果 实 ,其苦楝素含量 (toosendanin) 随采集地区 、时间等不同差 别很大 ,一般在 4～8 月份采集含量最高 。苦楝素为三萜类 化合物 ,易溶于吡啶 、丙酮 、乙醇 、甲醇等溶剂 ,微溶于氯仿 、 苯 ,几不溶于石油醚和水〔1〕。苦楝素 (川楝素) 分子能与对二 甲氨基苯甲醛试液起反应 ,显红至紫红色 ,在 510nm 处有最 大吸收峰 ,吸收度与苦楝素溶液的浓度成正比关系〔2 、3〕。近 年来苦 楝 皮 、苦 楝 果 在 植 物 杀 虫 剂 的 开 发 研 究 中 多 有 使 用〔4〕,为控制产品品质 ,笔者探讨苦楝皮 、苦楝果中苦楝素含 量的薄层 - 比色法测定方法 。 1 材料和仪器