方法学验证

目的
衡量方法的稳定 性
中间精密 度 重现性
考察随机变动因 素对精密度的影 响 建立法定标准时 的验证项目
二精密度
体内药物分析：日内精密度、日间精密度 日内：一次测定的精密度 日间：不同时间测定的精密度
三 专属性
定义：在其他成分(如杂质、降解产物、辅料、 内源性物质等）可能存在下，采用的方法能正确 测定出被测物的特性 目的：考察共存组分对被测定的组分是否有干扰
七 耐用性
• 是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响 的承受程度。典型的变动因素有：被溶液的稳定性、
样品提取次数、时间等。
• HPLC法变动因素有：流动相组成与pH，色谱柱，柱 温，流速等。 • GC法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进 样口和检测器温度等。
总结
用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性， 其余不要求。 用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的 方法： ① 用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标 均要求。 ② 限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外， 其余不要求。 ③ 原料、制剂及溶出度测定：不要求检测和定量 限，其余均要求。
三 专属性
（一）鉴别反应 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品
应呈现负反应。（TLC）
（二）含量测定和杂质测定 （1）在能获得杂质的情况下：可加到试样中，考察对结果的干扰。
（2）在杂质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方
法进行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方法。
一准确度
• 相对回收率：从生物样本基质中回收得到目标物质的响应值除以 加入到生物基质中已知量的标准品产生的响应值。（方法回收率） 范围：高、中浓度：85~115%低浓度；低浓度应在80~120% 意义：评价样品前处理对目标药物的损失而造成的系统误差。 提取回收率：药物加入空白基质并处理后与空白基质处理后加入药
物分别测定后，响应值的比值。
意义：考察经过样品处理后能用于分析的药物的比例 范围：50%-80%
二
精密度
• 定义：同一个均匀供试品，经多次取样测定所 得结果之间的接近程度。
• 衡量指标：偏差、标准偏差、相对标准偏差
• 内容：重复性、中间精密度、重现性
二
名称
重复性
精密度
方法
1制备三个不同浓度共 9 份样 品 2制备同一浓度 6 份样品的测 定结果 不同日期、不同分析人员、不 同 设备、同一实验室 不同时间、不同实验室、 不同人
HPLC法：制备一个标准系列，浓度点n =5 ～7; 以C对
h或A或与内标物的峰面积之比，建立回归方程r ＞ 0.9999。
六 范围
定义：是指达到一定密度、准确度和线性、测试方 法适用的高低限度或量的区间。
项目
原料药和制剂含量测定 均匀度检查 溶出量
范围
测试浓度的80%-～120%。 测试浓度的70%-～130% 限度的±20%
四 检测限、定量限
名称
检测限
意义
定义
方法
定量限
被测物能被检测出 1 直观法 的最低量 2 信噪比法 S/N=3 衡量方法的 灵敏度 物能被定量测定的 信噪比法
最低量
S/N=10
五 线性
定Baidu Nhomakorabea：是指在设定的范围内，测试结果与试样中被
测物浓度直接呈正比关系的程度。 UV法：首先制备一个标准系列，浓度点n =5; A = 0.3～.0.7建立回归方程C = aA + b ;r ＞ 0.9999。
方法学验证
概论
类目
目的
内容
证明采用的各种分析方法（建立质量标准时、处方、组分、工
艺变更时、改变原分析方法时）是否适合于相应检测要求。
1鉴别试验 2杂质定量检查或限度检查 3含量测定
项目
4其他成分 (如添加剂、残留物等）的测定 5溶出量 6稳定性研究
准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属
• 制剂 (考察辅料对回收率的影响)：采用在空白辅
料中加入原料或对照品的方法作回收率试验，然
后计算RSD。
• 体内：相对回收率、提取回收率
一 准确度
• 具体做法：测定高、中、低三个浓度
（n=3） 共9个数据来评价回收率的RSD ＜2%； • 用UV和HPLC时，一般回收率可达98%～ 102%；容量法可达99.7%～100.3%
内容
性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性、稳定性。
一 准确度
定义：测定的结果与真实值或参考值接近 的程度。 衡量指标：回收率（%） 用于定量测定的分析方法均需做准确度 原料药 制剂
一 准确度
• 原料药：(1)已知纯度对照品或样品进行测定； (2)已建准确度的另一方法测定的结果进 行比较。