植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定

植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定

作者:《果蔬贮藏加工学实

来源:华南农大浏览数:2949 录入:2007-6-16 14:53:40 验指导》

植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定

一、原理

抗坏血酸氧化酶能利用空气中的氧氧化抗坏血酸成为脱氢抗坏血酸；多酚氧化酶可催化

空气中的氧氧化多酚，成为相应的醌，形成的醌能被抗坏血酸还原。

因此，在酶提取液中加入抗坏血酸，可测定抗坏血酸氧化酶的活性，加入抗坏血酸及焦

儿茶酚，可测定抗坏血酸及多酚氧化酶两者的活性，相减即可求出多酚氧化酶的活性。抗坏

血酸的消耗量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸。碘酸钾在酸性条件下与碘化钾反应放出碘，

放出的碘与抗坏血酸作用，将之氧化成脱氢抗坏血酸，多余的碘能使淀粉变为蓝色。

二、材料与设备

材料：马铃薯块茎

设备：水浴锅、台秤、离心机

试剂：pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液、0.1％抗坏血酸、0.02mol/L焦儿茶酚、10％三氯乙

酸、1％淀粉。

0.05mol/L碘液：碘化钾2.5g溶于200ml蒸馏水，加冰醋酸1ml，再加0.1mol/L碘酸钾

12.5ml，定容至250ml。

三、试验步骤

（一）酶液制备：

称取马铃薯块茎10.0g，用预冷pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液，研磨匀浆，定容至50ml，

在18-20℃水浴浸提30分钟，中间摇动数次，再于3000×g离心10分钟，取上清液，4℃保存备

用。

（二）酶活性测定：

１. 取6个三角瓶(50-100ml)，标上号码，分别加入下列试剂(ml)：

┌──┬────┬───────┬─────────┬──┬─────┐

│瓶号│ 蒸馏水│0.1％抗坏血酸│0.02mol/L焦儿茶酚│ 酶│煮5分钟酶│

├──┼────┼───────┼─────────┼──┼────

─┤

│ 1 │ 4 │ 2 │ │ 2 │ │

│ 1' │ 4 │ 2 │ │ 2 │ │

│ 2 │ 4 │ 2 │ │ │ 2 │

│ 3 │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ │

│ 3' │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ │

│ 4 │ 3 │ 2 │ 1 │ │ 2 │

└──┴────┴───────┴─────────┴──┴────

─┘

1、3瓶各作一次重复，

2、4瓶作空白

将6个三角瓶放入18-20℃水浴反应5分钟,立即分别加入10％三氯乙酸

1ml，摇匀，终止酶

反应。

２. 滴定

冷却后，分别加入3滴1％淀粉（马铃薯可不加，因其本身含的淀粉已足够），用碘液滴

定至蓝色。

３. 计算

A. 抗坏血酸氧化酶活性＝[2号瓶滴定毫升数－1号瓶滴定毫升数]×Ｋ

B. 多酚氧化酶活性＝[(4号瓶滴定毫升数－3号瓶滴定毫升数)×Ｋ]－A

酶提取液总量(ml)×0.44

Ｋ＝ ---------------------------------------------

测定时酶液用量(ml)×样品重(g)×测定时间(min)

0.44为每毫升0.005mol/L碘液氧化抗坏血酸的毫克数，两种酶的活性单

位均用每克干重

每分钟氧化抗坏血酸的毫克数来表示。