蕨菜中黄酮类化合物的提取与测定
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第2 1卷 第 4 期
2 01 1经
信阳农业高等专科学校学报
J u n lo n a gAgiutr olg o r a f Xiy n r l a C l e c ul e
V0 . . 1 21 No 4 De . 01 c2 1
1 2月
蕨 菜 中黄 酮 类化 合 物 的提 取 与 测 定
赵丽平 , 李 向
( 阳农业高等专科学校 生物技术系 , 信 河南 信阳 440 ) 600
摘 要 : 用乙醇提取蕨菜中黄酮类化合物, 得到粗黄酮。利用分光光度法测定了蕨菜粗黄酮含量 , 用颜色反应
做定性分析并与标准 品芦丁作 比较实验。结果表 明 : 蕨菜干粉 中总黄酮含量为 72 % , .1 粗黄铜 中黄酮含 量为 1. 3
进行了研究 , 并进行了吸收光谱测定 , 聚酰胺薄膜层 酸 、 水 、 酸 、 氧 化 钠 、 % 氯 化 铝 、% 氯 化 铁 、 氨 盐 氢 1 1 0 5 析定性分析黄酮成分等, 为蕨菜保健功能的研究提供 1 %硝酸 铝 、% 硝酸 钠等均 为分 析纯 。
依据。
2 试 验 方 法
作者简介 : 赵丽平 (99)女 , , 许昌人 , 17一, 讲师 河南 硕士 , 主要从事化学方面教学与研 究
・
l9・ 1
第2 1卷 第 4期
信 阳农业 高等 专科 学校 学报
21年 1 0 1 2月
层石 油醚 , 下层 乙醇浸 提 液 定 容一 粗 黄 酮 液一 水 浴 , 因子的条件下的最佳提取剂是否吻合 , 因此选定提取 减压 浓缩一 13 0℃烘 干 粉碎 一粗 黄酮粉
6 % , 菜黄酮类 化合 物主要有黄酮和黄酮醇两类 。 6 蕨
关键词 : 蕨菜; 黄酮; 层析; 分光光度法; 颜色反应
中图分类号 :242 文献标识码 : R8. A
文章编号: 0 - 1 (0 10 -190 1 8 96 2 1 )40 1- 0 4 3
Exr cin a d d tr n t n o a o od r m trdu a ul u v r 1t suu ta t n ee miai ff v n isfo P eiim q in m a .ai c lm o o l i u
不同的温度 、 提取时间、 提取剂、 提取剂用量等条件下 3 进行 了平行试验 , h 测其总黄酮分别为 4 36 %、. .52 4
做单 因子平行试验。 根据平行试验的结果 , 采用正交 4 7 % 、. 4 8 、 . 6 5 。结 果 显 示提 取 时 间 2 5 6 4 53 % 4 38 % h 试验设计 , 应用 3 正交表 , 对提取剂 、 提取温度、 时 总含量 最大 。为 了确 定在 多 因子条 件 下 与 单因子 提 取 时间 、 提取 剂用 量 4因子 在 3个 水平 进 行优 选 , 见 的条 件下 的最佳提 取剂是 否 吻合 , 因此选定 提取 时 间 表 1结 果采用 直观分 析和 方差分 析 。 , 1 、h3 h2 、h作 为正交试 验 的 3个水 平 。
Ke r s P ei u q in r a. a uc u l vn i ;crma g p y l a i e v i e se t o oo t ; y wo d : t d m a al un vl 1t su m;f o o ri i e i l a d h o t r h ;ut vo t i b p c oh t r oa r l-s l r me y
b oo ai n a d c mp r e r s h i e r s l fr t tn a d s mpi g y c lr t n o a e t e u s w t t e u t o u i sa d r a l .Re u t s o h tt e t tlf v n i o h hh s n n s ls h w t a oa a o od h l
c n e t n t ed y w ih fP e ii m q i u v l 1t s uu i 7 21 , u ef v n i o g a o od i 3 6 o tn r eg t tr u a u l m a . ai c l m . % p r a o o d i r u h f v n i 1 . 6% , i h o d i " u s l n l s l o od fP e i u n a u l u V t c m r il a o od a o os f v n is o tr ir q i n m u .i s u u a e man y f v n i s a d f v n l. a d i r u l l n l
表 1 正 交试 验 的 因子 与 水 平
3 14 提 取 剂 用量 的 选择 ..
在 8 ℃ 用 7 % 乙醇 溶 O 0
液提 取相 同时 间 , 对提取 剂 11 、 :5 13 、 :5进 :5 12 、 :5 14 行 了 平 行 试 验 , 其 总 黄 酮 分 别 为 3 68 % 、 . 测 . 63 3
物与铝 盐 生 成 红 色 络合 物, 芦 丁为 标 准 品, 以 在 50 m处测 定 吸光度 。所 得数 据 经 回归处 理 可 得 标 1n 准 曲线 的 回归方程 : =1 .1 4.0 1 c为芦 丁浓 A 3 0 C 30 1 ( 度 mgm , 为 50 m 的 吸光 度 ) 相 关 系 数 r . / lA 1n , =0 97 。由回归方 程计 算 出黄酮含 量 。 96
75 % 、.67 、 .48 。为 了确 定 在 多 因子 条 2 1 3 52 % 3 53 %
2 3 蕨菜 黄酮提 取物 的颜 色反应 【 . 2 】
件下于单因子的条件下的最佳提取剂是否吻合 , 因此 选定 料液 比 11 、 :5 13 为正 交试 验 的 3个 水 :5 12 、:5作
2 2 提取 条件选 择 .
温度 6 ℃ 、0 、 c作为正交试验的 3 0 7℃ 8 【 O= 个水平。 3 13 提 取 时 间 的 选 择 料 液 比 1 3 、0 用 .. :5 8℃
称取 5 g蕨菜 粉末 若 干 份进 行 平 行试 验 , 别在 7 %乙醇溶液作为提取剂对提取 时间 1 、. h2 、 分 0 h 15 、h
2 1 蕨菜 提取 工艺流 程 .
1 材料与仪器
1 1 材料 .
干燥密封保存的蕨菜 ( 信阳贤山上采摘 ) 。
12 仪器 。
收稿 日期 :0 】1-2 2 1 一02
烘干_ 粉碎 称量_ + +乙醚脱脂 , 除色素 挥尽 乙醚 — % 已醇 回流 提取 浸 提 液无 色 , 1 0 约 0次 合并浸提液_浓缩定容 11 ÷ : 加石油醚脱脂 弃上
Ab t a t E t c ru hi v n i f m Pe du q in r v r1 isuu yu iga o o , n lz u h f v n i sr c : xr t o g ao o o tr im a ul u a.a u c lm b s l h l a a er g a o o a l dr i i a t n c y o l d
c ne t i h trd u a u l u V . 1 t s u u b p c o h tmer i to s n e k u i t e a a y i o tn s n te P ei i m q i n m , .a i c l m y s e t p oo t c me d ,a d t n ma e q a t i n lss i 9 F u r y h h l av
由极 差 数 据 K 可 外取定容后的芦丁 6 1 m 分别置于 6 只试管中, 相应依 以提取 温度 对 提取 率 的影 响 最 大 , 各 提 提 次加 人 浓 硫 酸 、 酸 一 镁 粉 、 L 1 FC, 氨 水 、 见 , 因子对 提 取 率 的影 响依 次 为 : 取 温 度 、 取 盐 A C e 1、 提取 时 间 、 提取 料液 比。直观分 析正 交试 验结果 , NO a H进行反 应 , 反应后 出现 明显 的颜 色 变化 。结 果 剂 、
病能 力与 自愈 能力 的作 用 , 有 抗 衰老 、 节 内分 泌 (05 微升 , 还 调 1- 0 上海联盛实验仪器厂 ) 。
和脂质代谢 、 促进肌 肉生长等功能…。此外 , 还有抗 13 试 剂 .
菌 、 制真 菌和 酪氨 酸 蛋 白激 酶 活性 、 抑 改善 皮 肤 增强 芦 丁 ( 化试剂 , 生 中国药 品生 物 制 品检 定所 ) 无 ; 美 容 的功能 。本 文对 蕨 菜 黄酮 的提 取及 其 含 量 测定 水 乙醇 、0 乙醇 、 油 醚 、 7% 石 甲醇 、 乙酸 、 粉 、 硫 冰 镁 浓
分别取最佳条件下 的粗黄酮液和 0 0 g . 1 芦丁用 平 。 . 7 O乙醇定 容至 1 0 l进行 下 面的定性 颜色反 应 。再 3 2 正交试 验结 果及直观 分析 0m , 由表 2 表 3可看 出 , 、 在正 交 试验 的 4个 因子 中 , 分别取 定容后 粗 黄酮液 1 1 别置 于 6只试 管 中 , m分 件 的选 择 . 3 1 1 最佳提 取剂 浓度 的选 择 .. 料液 比 1 2 、 :5 水
浴 8。 提取 时间 , 不 同乙醇浓 度提取 剂 3%、 OC 对 0 5 % 、0 、0 进 行 平 行 试 验 , 其 总 黄 酮 分 别 为 0 7% 9% 测
c l rt n ra t n o o ai e c i o o
U . 2紫外可见分光光度计 ( V7 5 上海精 密科学仪 蕨菜, 学名 Ped maui m vt1i cl 别 ti qi u . t s u ru l n a au u m, 名拳头菜 、 龙爪菜、 如意菜等 , 属于凤尾蕨科。因其生 器 有 限公 司 ) Z -A 型 手 提 式 紫 外 分 析 仪 (5 n ;F5 24 m, 长在 山林野地 , 少受污染 , 并富含对人体有益的营养 上 海 国麟 实 验设 备有 限公 司 ) HH 数 显 恒 温 水 浴 ; - 4 成分 , 而备受人们青睐。但是有关蕨菜含黄酮类物质 锅 ( 国华电器有 限公 司) F 4 0 ;W- A倾 斜式 高速万能 0 的研究却鲜见报道 。黄酮类物质具有提高人体 的抗 粉碎机 ( 北京 中兴伟业仪器有限公 司) 微量移液器 ;
ZHAO — n Lipi g,LIXi n ag
( eam n oBoenl y f i ag gclr oe ,i ag 600 C i ) Dpr etf ieho g o Xn n ruu l lg Xn n 40 ,h a t t o y A i ta C le y 4 n
见表 4 。 2 4 黄酮 含量 的测定 L . 3
确定最 佳工 艺条件 为 A BC D , , 。 即提 取 剂用 7 % 乙 0
醇溶液 , 液 比 13 ( m ) 提取 时 间 2 , 取 温度 料 :5 1 , h提
表 2 各 因子 极 差
0 用分光 光度法 测定 黄酮含 量 , 利用 黄酮类 化合 8 ℃ 及
2 01 1经
信阳农业高等专科学校学报
J u n lo n a gAgiutr olg o r a f Xiy n r l a C l e c ul e
V0 . . 1 21 No 4 De . 01 c2 1
1 2月
蕨 菜 中黄 酮 类化 合 物 的提 取 与 测 定
赵丽平 , 李 向
( 阳农业高等专科学校 生物技术系 , 信 河南 信阳 440 ) 600
摘 要 : 用乙醇提取蕨菜中黄酮类化合物, 得到粗黄酮。利用分光光度法测定了蕨菜粗黄酮含量 , 用颜色反应
做定性分析并与标准 品芦丁作 比较实验。结果表 明 : 蕨菜干粉 中总黄酮含量为 72 % , .1 粗黄铜 中黄酮含 量为 1. 3
进行了研究 , 并进行了吸收光谱测定 , 聚酰胺薄膜层 酸 、 水 、 酸 、 氧 化 钠 、 % 氯 化 铝 、% 氯 化 铁 、 氨 盐 氢 1 1 0 5 析定性分析黄酮成分等, 为蕨菜保健功能的研究提供 1 %硝酸 铝 、% 硝酸 钠等均 为分 析纯 。
依据。
2 试 验 方 法
作者简介 : 赵丽平 (99)女 , , 许昌人 , 17一, 讲师 河南 硕士 , 主要从事化学方面教学与研 究
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第2 1卷 第 4期
信 阳农业 高等 专科 学校 学报
21年 1 0 1 2月
层石 油醚 , 下层 乙醇浸 提 液 定 容一 粗 黄 酮 液一 水 浴 , 因子的条件下的最佳提取剂是否吻合 , 因此选定提取 减压 浓缩一 13 0℃烘 干 粉碎 一粗 黄酮粉
6 % , 菜黄酮类 化合 物主要有黄酮和黄酮醇两类 。 6 蕨
关键词 : 蕨菜; 黄酮; 层析; 分光光度法; 颜色反应
中图分类号 :242 文献标识码 : R8. A
文章编号: 0 - 1 (0 10 -190 1 8 96 2 1 )40 1- 0 4 3
Exr cin a d d tr n t n o a o od r m trdu a ul u v r 1t suu ta t n ee miai ff v n isfo P eiim q in m a .ai c lm o o l i u
不同的温度 、 提取时间、 提取剂、 提取剂用量等条件下 3 进行 了平行试验 , h 测其总黄酮分别为 4 36 %、. .52 4
做单 因子平行试验。 根据平行试验的结果 , 采用正交 4 7 % 、. 4 8 、 . 6 5 。结 果 显 示提 取 时 间 2 5 6 4 53 % 4 38 % h 试验设计 , 应用 3 正交表 , 对提取剂 、 提取温度、 时 总含量 最大 。为 了确 定在 多 因子条 件 下 与 单因子 提 取 时间 、 提取 剂用 量 4因子 在 3个 水平 进 行优 选 , 见 的条 件下 的最佳提 取剂是 否 吻合 , 因此选定 提取 时 间 表 1结 果采用 直观分 析和 方差分 析 。 , 1 、h3 h2 、h作 为正交试 验 的 3个水 平 。
Ke r s P ei u q in r a. a uc u l vn i ;crma g p y l a i e v i e se t o oo t ; y wo d : t d m a al un vl 1t su m;f o o ri i e i l a d h o t r h ;ut vo t i b p c oh t r oa r l-s l r me y
b oo ai n a d c mp r e r s h i e r s l fr t tn a d s mpi g y c lr t n o a e t e u s w t t e u t o u i sa d r a l .Re u t s o h tt e t tlf v n i o h hh s n n s ls h w t a oa a o od h l
c n e t n t ed y w ih fP e ii m q i u v l 1t s uu i 7 21 , u ef v n i o g a o od i 3 6 o tn r eg t tr u a u l m a . ai c l m . % p r a o o d i r u h f v n i 1 . 6% , i h o d i " u s l n l s l o od fP e i u n a u l u V t c m r il a o od a o os f v n is o tr ir q i n m u .i s u u a e man y f v n i s a d f v n l. a d i r u l l n l
表 1 正 交试 验 的 因子 与 水 平
3 14 提 取 剂 用量 的 选择 ..
在 8 ℃ 用 7 % 乙醇 溶 O 0
液提 取相 同时 间 , 对提取 剂 11 、 :5 13 、 :5进 :5 12 、 :5 14 行 了 平 行 试 验 , 其 总 黄 酮 分 别 为 3 68 % 、 . 测 . 63 3
物与铝 盐 生 成 红 色 络合 物, 芦 丁为 标 准 品, 以 在 50 m处测 定 吸光度 。所 得数 据 经 回归处 理 可 得 标 1n 准 曲线 的 回归方程 : =1 .1 4.0 1 c为芦 丁浓 A 3 0 C 30 1 ( 度 mgm , 为 50 m 的 吸光 度 ) 相 关 系 数 r . / lA 1n , =0 97 。由回归方 程计 算 出黄酮含 量 。 96
75 % 、.67 、 .48 。为 了确 定 在 多 因子 条 2 1 3 52 % 3 53 %
2 3 蕨菜 黄酮提 取物 的颜 色反应 【 . 2 】
件下于单因子的条件下的最佳提取剂是否吻合 , 因此 选定 料液 比 11 、 :5 13 为正 交试 验 的 3个 水 :5 12 、:5作
2 2 提取 条件选 择 .
温度 6 ℃ 、0 、 c作为正交试验的 3 0 7℃ 8 【 O= 个水平。 3 13 提 取 时 间 的 选 择 料 液 比 1 3 、0 用 .. :5 8℃
称取 5 g蕨菜 粉末 若 干 份进 行 平 行试 验 , 别在 7 %乙醇溶液作为提取剂对提取 时间 1 、. h2 、 分 0 h 15 、h
2 1 蕨菜 提取 工艺流 程 .
1 材料与仪器
1 1 材料 .
干燥密封保存的蕨菜 ( 信阳贤山上采摘 ) 。
12 仪器 。
收稿 日期 :0 】1-2 2 1 一02
烘干_ 粉碎 称量_ + +乙醚脱脂 , 除色素 挥尽 乙醚 — % 已醇 回流 提取 浸 提 液无 色 , 1 0 约 0次 合并浸提液_浓缩定容 11 ÷ : 加石油醚脱脂 弃上
Ab t a t E t c ru hi v n i f m Pe du q in r v r1 isuu yu iga o o , n lz u h f v n i sr c : xr t o g ao o o tr im a ul u a.a u c lm b s l h l a a er g a o o a l dr i i a t n c y o l d
c ne t i h trd u a u l u V . 1 t s u u b p c o h tmer i to s n e k u i t e a a y i o tn s n te P ei i m q i n m , .a i c l m y s e t p oo t c me d ,a d t n ma e q a t i n lss i 9 F u r y h h l av
由极 差 数 据 K 可 外取定容后的芦丁 6 1 m 分别置于 6 只试管中, 相应依 以提取 温度 对 提取 率 的影 响 最 大 , 各 提 提 次加 人 浓 硫 酸 、 酸 一 镁 粉 、 L 1 FC, 氨 水 、 见 , 因子对 提 取 率 的影 响依 次 为 : 取 温 度 、 取 盐 A C e 1、 提取 时 间 、 提取 料液 比。直观分 析正 交试 验结果 , NO a H进行反 应 , 反应后 出现 明显 的颜 色 变化 。结 果 剂 、
病能 力与 自愈 能力 的作 用 , 有 抗 衰老 、 节 内分 泌 (05 微升 , 还 调 1- 0 上海联盛实验仪器厂 ) 。
和脂质代谢 、 促进肌 肉生长等功能…。此外 , 还有抗 13 试 剂 .
菌 、 制真 菌和 酪氨 酸 蛋 白激 酶 活性 、 抑 改善 皮 肤 增强 芦 丁 ( 化试剂 , 生 中国药 品生 物 制 品检 定所 ) 无 ; 美 容 的功能 。本 文对 蕨 菜 黄酮 的提 取及 其 含 量 测定 水 乙醇 、0 乙醇 、 油 醚 、 7% 石 甲醇 、 乙酸 、 粉 、 硫 冰 镁 浓
分别取最佳条件下 的粗黄酮液和 0 0 g . 1 芦丁用 平 。 . 7 O乙醇定 容至 1 0 l进行 下 面的定性 颜色反 应 。再 3 2 正交试 验结 果及直观 分析 0m , 由表 2 表 3可看 出 , 、 在正 交 试验 的 4个 因子 中 , 分别取 定容后 粗 黄酮液 1 1 别置 于 6只试 管 中 , m分 件 的选 择 . 3 1 1 最佳提 取剂 浓度 的选 择 .. 料液 比 1 2 、 :5 水
浴 8。 提取 时间 , 不 同乙醇浓 度提取 剂 3%、 OC 对 0 5 % 、0 、0 进 行 平 行 试 验 , 其 总 黄 酮 分 别 为 0 7% 9% 测
c l rt n ra t n o o ai e c i o o
U . 2紫外可见分光光度计 ( V7 5 上海精 密科学仪 蕨菜, 学名 Ped maui m vt1i cl 别 ti qi u . t s u ru l n a au u m, 名拳头菜 、 龙爪菜、 如意菜等 , 属于凤尾蕨科。因其生 器 有 限公 司 ) Z -A 型 手 提 式 紫 外 分 析 仪 (5 n ;F5 24 m, 长在 山林野地 , 少受污染 , 并富含对人体有益的营养 上 海 国麟 实 验设 备有 限公 司 ) HH 数 显 恒 温 水 浴 ; - 4 成分 , 而备受人们青睐。但是有关蕨菜含黄酮类物质 锅 ( 国华电器有 限公 司) F 4 0 ;W- A倾 斜式 高速万能 0 的研究却鲜见报道 。黄酮类物质具有提高人体 的抗 粉碎机 ( 北京 中兴伟业仪器有限公 司) 微量移液器 ;
ZHAO — n Lipi g,LIXi n ag
( eam n oBoenl y f i ag gclr oe ,i ag 600 C i ) Dpr etf ieho g o Xn n ruu l lg Xn n 40 ,h a t t o y A i ta C le y 4 n
见表 4 。 2 4 黄酮 含量 的测定 L . 3
确定最 佳工 艺条件 为 A BC D , , 。 即提 取 剂用 7 % 乙 0
醇溶液 , 液 比 13 ( m ) 提取 时 间 2 , 取 温度 料 :5 1 , h提
表 2 各 因子 极 差
0 用分光 光度法 测定 黄酮含 量 , 利用 黄酮类 化合 8 ℃ 及