成像流式细胞仪检测细胞自噬水平研究

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摘要：目的采用新型成像流式细胞仪量化检测细胞自噬水平，完善自噬检测手段。方法用绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）－微管
相关蛋白轻链３（ＬＣ３）表达质粒转染Ｈｕｈ７细胞和Ｈ１２９９细胞，并进行２４ｈ饥饿处理，诱导自噬发生，分别用荧光显微镜拍照、蛋
国际检验医学杂志２０１６年ｌ１月第３７卷第２１期
ＩｎｔＪＬａｂＭｅｄ，Ｎｏｖ．２０１６，Ｖｏ１．３７，Ｎｏ．２１
・
论
著・
成像流式细胞仪检测细胞自噬水平研究
时景仁，郭向华，王珊珊，刘凯，乔录新，张玉林，陈德喜△ （首都医科大学附属北京佑安医院／北京市肝病研究所，北京１０００６９）
白免疫印迹法和成像流式细胞术３种方法检测细胞自噬水平。用ＩＤＥＡＳ软件对成像流式细胞术的细胞自噬结果进行量化分析。结果荧光显微镜显示，Ｈｕｈ７细胞比Ｈ１２９９细胞中的自噬斑点少；蛋白免疫印迹法显示，与Ｈ１２９９细胞比较，Ｈｕｈ７细胞ＬＣ３一 Ⅱ与ＬＣ３－Ｉ比例较低，但２种方法均不能获得通量统计数据。成像流式细胞仪结果显示细胞自噬图像，２种细胞的ＧＦ率基本一致（２５．２和２７．６）；比较两者发生高水平自噬（ＬＣ３斑点数目为６个以上）的细胞比例，Ｈｕｈ７细胞仅为９．０，显著少于Ｈ１２９９细胞（２６．２）。结论采用新型成像流式细胞仪检测细胞自噬，兼具量化分析和成像的优点，能弥补荧光显微镜和蛋白免疫印迹法的不足，是一种更优秀的自噬检测方法。关键词：自噬；成像流式细胞仪；微管相关蛋白轻链３ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３ — ４１３０．２０１６．２１．００１文献标识码：Ａ文章编号：１６７３－４１３０（２０１６）２１－２９４９ — ０４
ｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇａｎｄｉｍａｇｉｎｇｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｑｕａｎｔｉｆｉｅｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃｅｌｌｕｌａｒａｕｔｏｐｈａｇｙｄａｔａｆｒｏｍｔｈｅｉｍａｇｉｎｇｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒｗａｓｐｅｒ —
Ｄｉｓｓｃｕｔｉｏｎｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｂｙｉｍａｇｉｎｇｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒ
ＳＨＩＪｉｎｇｒｅｎ，ＧＵＯＸｉａｎｇｈｕａ，ＷＡＮＧＳｈａｎｓｈａｎ，Ｌ儿，Ｋ口，ＱＪＡ０Ｌｕｘｉｎ，ＺＨＡＮＧＹｕｌｉｎ，ＣＨＥＮＤｅｘｉ △
ｍｅｔｈｏｄｓｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙ．ＭｅｔｈｏｄｓＧＦＰ— ＬＣ３ｐｌａｓｍｉｄｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＨｕｈ７ｏｒＨ１２９９ｃｅｌｌｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｓｔａｒｖａｔｉｏｎｆｏｒ２４ｈｏｕｒｓｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｎｄｕｃｅａｕｔｏｐｈａｇｙ．Ａｕｔｏｐｈａｇｙｌｅｖｅｌｓｉｎｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｈｒｅｅｗａｙｓ：ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ｗｅｓｔ —
（ＢｅｉｊｉｎｇＹｏｕａｎＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｏｆＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／ＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅｐａｔｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００６９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｄｅｔｅｃｔａｕｔｏｐｈａｇｙｌｅｖｅｌｓｉｎｔｈｅｃｅｌｌｓｂｙａｎｏｖｅｌｉｍａｇｉｎｇｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｅｒ，ａｎｄｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ