实验 观察人血涂片

实验观察人血涂片

本实验在中学是为学习血涂片制作，了解红细胞与白细胞的形态特点。但常因怕取血、和推片不匀、染色出现色渣及白细胞观察不清等而不作此实验。为此教师必须解决涂片技术及观察指导等问题。

一、目的要求

（一）了解本实验的准备。

（二）掌握血涂片制作技术及注意事项。

（三）掌握红细胞与白细胞的特征。

二、材料用具

采血针（三棱针或大号缝衣针）、脱脂棉球、酒精棉球、载片、显微镜、滴管、伊红-甲基蓝染液、血细胞彩色挂图或剪贴图。

三、实验步骤

（一）按照生理卫生本实验指导制作涂片观察（染色后再观察）。

（二）讨论本实验关键及如何指导实验。

四、实验准备

（一）配制伊红-甲基蓝染液

实验前半年，取伊红-甲基蓝粉末0.1克（旧称瑞氏染剂），放在研缽内加适量甘油研磨。量取纯甲醇60毫升，少许倒入研缽内使染料溶解，已溶部分移入棕色瓶中，未溶部分再加少许甲醇研磨，直到全部溶解为止。把装染液的棕色瓶密封放阴暗处保存。如来不及配制，可就近向医院化验室索取。

（二）配制缓冲液

用缓冲液作血涂片稀释液效果更好。取磷酸二氢钾（KH2PO4）6.63克，磷酸氢二钠（Na2HPO4）2.56克，溶于蒸馏水或去离子水1，000毫升中其pH值是6.4的缓冲液。

（三）培训小组长

血涂片的关键在推片手法的掌握。必须先使小组长熟练掌握，可取兔血多推两片，并镜检厚薄是否合适。

（四）载片去污

所用的载片要放肥皂水中煮沸20分钟，洗涤干净后再放入肥皂水中浸泡一天，取出用自来水冲净，再用蒸馏水冲1～2次，放入95%酒精中浸泡后，用镊子取出以干净的绸或涤纶擦净，放入培养皿保存备用。

五、实验指导

参照生理卫生本实验指导，可分消毒、取血、推片、染色，观察等5个步骤进行。

（一）消毒

应先按摩取血部位，使血流通畅后，再用酒精消毒针和取血部位。

（二）取血

待酒精干后，刺破皮肤，待血自然流出，勿挤。取干净载片，让血滴在离载片一端中4～5毫米处，注意手指持握载片的边缘，勿触及其表面。不能使载片接触取血部位的皮肤。必须两人密切配合，抓紧时间，一人取血，另一人迅速推片。

（三）推片

这步最重要，但又不易推均匀。取一块边缘光滑的载片做推片。将其一端置于血滴前方，向后移动到接触血滴，血液便均匀分散在推片与载片的接触处。然后使推片与载片呈30°～40°角，向另一端平稳地推片，如图9-17所示。注意用力要均匀，角度始终不变，才能推成均匀的涂膜。用力太轻，涂膜过厚，无法观察，且不能推第二次。用力太重，又会损伤血细胞。涂片推好后，迅速在空气中摇动载片，使之自然干燥，不要用火加热。

（四）染色

用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将伊红-甲基蓝染液滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染半分钟。加等量蒸馏水或缓冲液与染液混合再染5分钟。最后用自来水把染液冲掉，用吸水纸吸干，待自然干燥后，即可。涂片如有色渣，可用三种方法清除：一是再加伊红-甲基蓝染液于涂片上，略加摆动，使色渣溶于甲醇中，待甲醇挥发，加蒸馏水或缓冲液。二是把血片放水槽中，保持水平，色渣即从玻片边缘溢出。三是把血片呈45°倾斜，吸95%酒精徐徐滴涂片面，至流下酒精变蓝后，清水冲净晾干。涂片如有香柏油，用擦

镜纸擦去仍可用酒精处理。

制血涂片应注意：

(1)所用的玻片必须十分干净，无油污。

(2)取血部位、刺针及载片上的酒精挥发完以后才能取出。

(3)判断染液是否起到了染色的作用，可在冲洗染色液前观察染液有无一层黄色的金属光泽，如果没有，则表示染色失败。

(4)如染色太浅，可按照原来步骤重染。

(5)如染料有很多颗粒沉于载片表面，可将载片滴有染料的一面向下，两端置于玻棒上架空，使染料靠表面张力附着于载片表面。

（五）观察

用低倍镜观察血涂片，可见红细胞染成粉红色，呈中间色浅、周围色深的圆盘状，没有细胞核。白细胞较少，难找到，多集中在涂片边缘或推片方向前缘。比红细胞大，染成蓝紫、红紫色。主要看白细胞中较多的嗜中性粒细胞与淋巴细胞的形态。

1.嗜中性粒细胞细胞质染成红紫色，核染成蓝紫色。核分为2～5叶。刚成熟的细胞仅有一叶呈“S”状的细胞核。

2.淋巴细胞直径大小不一，以小淋巴细胞为主，其大小与红细胞相似。细胞核呈圆形或卵圆形，一侧有凹痕，染色质致密块状，被染成深蓝紫色。核周围可见少数淡蓝色细胞质。

3.血小板为不规则小体，直径约2～3微米。血小板周围部分为浅蓝色，中央有细小的紫红色颗粒，且聚集成群。

教师应经常观察、熟练掌握各种血细胞形状，不能仅凭染色来区分。为更好观察白细胞，可在看了红细胞后，在涂片上加一滴醋酸使红细胞破坏，白细胞就清楚可见。