医学微生物学消毒灭菌、细菌的培养及分布
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的方法。
常用术语
无菌（asepsis）：不存在任何活菌。 无菌操作：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。 清洁：能减少微生物附着在无机物体表面的数量的方法。 净化: 能显著减少或破坏一定空间中微生物数量和生物
活性的方法。
来自百度文库
消毒灭菌方法
物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法
湿热灭菌效果好于干热灭菌，原因如下：
①湿热情况下菌体蛋白容易凝固变性;
②湿热穿透力比干热大； ③湿热的蒸汽具有潜热，水由气态变为液态时放出潜热，可迅 速提高被灭菌物体的温度。
辐射杀菌法
•紫外线 （240~300 nm，265-266 nm） 原理：作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个T共价结合 形成二聚体，干扰DNA的复制和转录，导致细菌的变异和 死亡。
影响消毒灭菌效果的因素
消毒剂的性质、浓度与作用时间 70%乙醇 微生物的种类、物理状态与数量 温度 随温度升高而加快 酸碱度 最适 有机物 有机物可消耗消毒剂，降低消毒剂浓度
细菌的分布
实验背景及要点
自然界中微生物的分布相当广泛 实验要点
掌握无菌操作 认识微生物的分布 理解消毒灭菌的作用
微生物并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。
灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微生物的
方法（杀灭包括芽胞、病毒和真菌在内的所有病原微生物， 非病原微生物）。
抑菌（bacteriostasis）：抑制人体内部或外部细菌
生长繁殖的方法。
防腐（antisepsis）：体外防止或抑制细菌生长繁殖
实验内容
细菌在环境中的分布情况
空气中细菌的检查
实验室空气 超净台空气
水中细菌的检查
自来水 池水
土壤中细菌的检查
细菌在人体中的分布情况
手 咽喉
每组所需的实验材料
（4人/组）
空气中细菌的检查
实验室空气
普通平板1块
超净台空气
普通平板1块
水中细菌的检查
37℃孵箱中培养过夜后，观察结果并记录（有/无，生长情况）。
项目 琼脂平板 庖肉培养基
菌落数
菌落种类
手指细菌的检查
实验材料与方法： 普通平板1块
取一块平板，在底部划一直线，分成两部分，标记 “消毒前”和“消毒后”
消毒前部分：直接用手指涂摸2-3次
消毒后部分：换另一手指，碘酒擦拭，酒精脱碘， 然后再涂摸，操作完成后盖好盖。
生物学消毒灭菌法
热力灭菌法
干热灭菌法
焚烧
烧灼
干烤
红外线
湿热灭菌法
• 巴氏消毒法： 61.1~62.8℃ 30min 或 71.7 ℃ 15~30s
• 煮沸法
• 流动蒸汽消毒法 （常压蒸汽消毒法）
• 间歇蒸汽灭菌法
• 高压蒸气灭菌法：103.4KPa 121.3 ℃作用15-20min
可以杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物
酒精灯火焰灼烧自来水管口1min，然后打开水龙头放水 2min，用无菌试管以无菌操作取自来来水标本3ml左右。
用一只无菌滴管取自来水滴于普通平板上1-2滴，然后用接 种环以四区划线的方法划开。
再用一只无菌滴管取池水滴于普通平板上1-2滴，同上操作。 （建议采取接种环接种２－３环）
将上述平板置于37℃孵箱中，倒置培养18-24h后观察结果。
-196℃
化学消毒灭菌法
消毒剂：迅速杀灭病原微生物的化学药物。 防腐剂：抑制病原微生物生长繁殖的化学药物。
根据杀菌能力不同，分三大类 高效消毒剂：杀灭包括芽胞在内的所有微生物 含氯的消毒剂、过氧乙酸，环氧乙烷、甲醛 中效消毒剂：杀灭细菌繁殖体，但不能杀灭芽胞 碘酒和碘伏，乙醇 低效消毒剂：杀灭多数细菌繁殖体，不能杀灭芽胞杆菌 高锰酸钾，洗必泰
项目
菌落数
菌落种类
自来水
池水
土壤中细菌的检查
实验材料：
土壤（纸包）、无菌滴管１只，无菌生理盐水 庖肉培养基(1) ，普通平板(1)
实验方法：
取少量土壤接种于庖肉培养基中，80℃水浴20min（杀灭 无芽孢细菌）。
取少量土壤置于无菌生理盐水中，制成混悬液，然后用无 菌滴管吸取1-2滴于普通平板上，四区划线。
特点：
①穿透力比较差。普通玻璃、纸张、尘埃等均可阻挡紫外 线，因此它只适用于空气消毒或物体表面的消毒。
②紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。
•电离辐射 ：β和γ射线 •微波：1-1000 nm的电磁波
紫外线杀菌原理
滤过除菌法： 不能除去病毒和支原体 干燥与低温抑菌法
滤器
Dry ice, -80℃
化学消毒剂的杀菌机制： ①使菌体蛋白变性：如酚、醇、醛类、重金属盐类等。 ②损伤细菌细胞膜：如酚、脂溶剂、表面活性剂等， ③干扰细菌酶系统和代谢：如氧化剂、重金属盐类等。
适度适量使用，消毒时间不能过长！
生物学消毒灭菌法
抗生素 细菌素 噬菌体 中草药
临床治疗 为微生物代谢产物，破坏同源性细菌。 感染细菌、真菌、放线菌、螺旋体等微生物的病毒。
自来水
无菌试管，无菌滴管，普通平板各1个
池水
池水试管，无菌滴管，普通平板各1个
土壤中细菌的检查
普通平板1块，庖肉培养基1支
土壤纸包，无菌生理盐水，无菌滴管
手
普通平板1块
咽喉
血平板1块
空气中细菌的检查
实验材料及方法：
普通琼脂平板 2块/组 取一块平板，底部做好标记，于实验室空气中暴露
医学微生物学实验
Experiment of Medical Microbiology
天津医科大学基础医学院
医学微生物学教研室
实验一
抑制或杀灭微生物的理化因素、 细菌的分布
抑制或杀灭微生物的理化因素
主要内容
掌握常用术语 熟悉消毒灭菌的方法 掌握影响消毒灭菌效果的因素
常用术语
消毒（disinfection）：杀死物体上或者环境中病原
10min后，把皿盖盖好。 取另一块平板，底部做好标记，于已消毒的超净台中
（403房间）暴露10min，把皿盖盖好后取出。 平板于37℃倒置培养，18-24h观察结果，并记录。
项目 实验室空气 超净台空气
菌落数
菌落种类
水中细菌的检查
实验材料：
无菌试管，无菌滴管，普通平板 （2个/组）
实验方法：
常用术语
无菌（asepsis）：不存在任何活菌。 无菌操作：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。 清洁：能减少微生物附着在无机物体表面的数量的方法。 净化: 能显著减少或破坏一定空间中微生物数量和生物
活性的方法。
来自百度文库
消毒灭菌方法
物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法
湿热灭菌效果好于干热灭菌，原因如下：
①湿热情况下菌体蛋白容易凝固变性;
②湿热穿透力比干热大； ③湿热的蒸汽具有潜热，水由气态变为液态时放出潜热，可迅 速提高被灭菌物体的温度。
辐射杀菌法
•紫外线 （240~300 nm，265-266 nm） 原理：作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个T共价结合 形成二聚体，干扰DNA的复制和转录，导致细菌的变异和 死亡。
影响消毒灭菌效果的因素
消毒剂的性质、浓度与作用时间 70%乙醇 微生物的种类、物理状态与数量 温度 随温度升高而加快 酸碱度 最适 有机物 有机物可消耗消毒剂，降低消毒剂浓度
细菌的分布
实验背景及要点
自然界中微生物的分布相当广泛 实验要点
掌握无菌操作 认识微生物的分布 理解消毒灭菌的作用
微生物并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。
灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微生物的
方法（杀灭包括芽胞、病毒和真菌在内的所有病原微生物， 非病原微生物）。
抑菌（bacteriostasis）：抑制人体内部或外部细菌
生长繁殖的方法。
防腐（antisepsis）：体外防止或抑制细菌生长繁殖
实验内容
细菌在环境中的分布情况
空气中细菌的检查
实验室空气 超净台空气
水中细菌的检查
自来水 池水
土壤中细菌的检查
细菌在人体中的分布情况
手 咽喉
每组所需的实验材料
（4人/组）
空气中细菌的检查
实验室空气
普通平板1块
超净台空气
普通平板1块
水中细菌的检查
37℃孵箱中培养过夜后，观察结果并记录（有/无，生长情况）。
项目 琼脂平板 庖肉培养基
菌落数
菌落种类
手指细菌的检查
实验材料与方法： 普通平板1块
取一块平板，在底部划一直线，分成两部分，标记 “消毒前”和“消毒后”
消毒前部分：直接用手指涂摸2-3次
消毒后部分：换另一手指，碘酒擦拭，酒精脱碘， 然后再涂摸，操作完成后盖好盖。
生物学消毒灭菌法
热力灭菌法
干热灭菌法
焚烧
烧灼
干烤
红外线
湿热灭菌法
• 巴氏消毒法： 61.1~62.8℃ 30min 或 71.7 ℃ 15~30s
• 煮沸法
• 流动蒸汽消毒法 （常压蒸汽消毒法）
• 间歇蒸汽灭菌法
• 高压蒸气灭菌法：103.4KPa 121.3 ℃作用15-20min
可以杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物
酒精灯火焰灼烧自来水管口1min，然后打开水龙头放水 2min，用无菌试管以无菌操作取自来来水标本3ml左右。
用一只无菌滴管取自来水滴于普通平板上1-2滴，然后用接 种环以四区划线的方法划开。
再用一只无菌滴管取池水滴于普通平板上1-2滴，同上操作。 （建议采取接种环接种２－３环）
将上述平板置于37℃孵箱中，倒置培养18-24h后观察结果。
-196℃
化学消毒灭菌法
消毒剂：迅速杀灭病原微生物的化学药物。 防腐剂：抑制病原微生物生长繁殖的化学药物。
根据杀菌能力不同，分三大类 高效消毒剂：杀灭包括芽胞在内的所有微生物 含氯的消毒剂、过氧乙酸，环氧乙烷、甲醛 中效消毒剂：杀灭细菌繁殖体，但不能杀灭芽胞 碘酒和碘伏，乙醇 低效消毒剂：杀灭多数细菌繁殖体，不能杀灭芽胞杆菌 高锰酸钾，洗必泰
项目
菌落数
菌落种类
自来水
池水
土壤中细菌的检查
实验材料：
土壤（纸包）、无菌滴管１只，无菌生理盐水 庖肉培养基(1) ，普通平板(1)
实验方法：
取少量土壤接种于庖肉培养基中，80℃水浴20min（杀灭 无芽孢细菌）。
取少量土壤置于无菌生理盐水中，制成混悬液，然后用无 菌滴管吸取1-2滴于普通平板上，四区划线。
特点：
①穿透力比较差。普通玻璃、纸张、尘埃等均可阻挡紫外 线，因此它只适用于空气消毒或物体表面的消毒。
②紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。
•电离辐射 ：β和γ射线 •微波：1-1000 nm的电磁波
紫外线杀菌原理
滤过除菌法： 不能除去病毒和支原体 干燥与低温抑菌法
滤器
Dry ice, -80℃
化学消毒剂的杀菌机制： ①使菌体蛋白变性：如酚、醇、醛类、重金属盐类等。 ②损伤细菌细胞膜：如酚、脂溶剂、表面活性剂等， ③干扰细菌酶系统和代谢：如氧化剂、重金属盐类等。
适度适量使用，消毒时间不能过长！
生物学消毒灭菌法
抗生素 细菌素 噬菌体 中草药
临床治疗 为微生物代谢产物，破坏同源性细菌。 感染细菌、真菌、放线菌、螺旋体等微生物的病毒。
自来水
无菌试管，无菌滴管，普通平板各1个
池水
池水试管，无菌滴管，普通平板各1个
土壤中细菌的检查
普通平板1块，庖肉培养基1支
土壤纸包，无菌生理盐水，无菌滴管
手
普通平板1块
咽喉
血平板1块
空气中细菌的检查
实验材料及方法：
普通琼脂平板 2块/组 取一块平板，底部做好标记，于实验室空气中暴露
医学微生物学实验
Experiment of Medical Microbiology
天津医科大学基础医学院
医学微生物学教研室
实验一
抑制或杀灭微生物的理化因素、 细菌的分布
抑制或杀灭微生物的理化因素
主要内容
掌握常用术语 熟悉消毒灭菌的方法 掌握影响消毒灭菌效果的因素
常用术语
消毒（disinfection）：杀死物体上或者环境中病原
10min后，把皿盖盖好。 取另一块平板，底部做好标记，于已消毒的超净台中
（403房间）暴露10min，把皿盖盖好后取出。 平板于37℃倒置培养，18-24h观察结果，并记录。
项目 实验室空气 超净台空气
菌落数
菌落种类
水中细菌的检查
实验材料：
无菌试管，无菌滴管，普通平板 （2个/组）
实验方法：