水体卫生细菌学检验.

四、空气中微生物的检测方法
• 常用的检验方法是沉降平板法，即测定在一定时间内 从空气中降落到单位面积地面上的微生物个数。操作 过程如下： • 将融化的营养琼脂培养基倒入d90mm无菌培养皿中制成 平板。均匀布设在待测处地板上（一般最少设5个待测 点），打开皿盖5～10min，让空气中的微生物降落在 平板表面，盖好皿盖，然后倒置放入培养箱中，在 37℃条件下培养48h后计菌落数。
164
295 271 4650 11 305 无法计数
20
46 60 513 5 12 无法计数
—
1.6 2.2 — — —
16400
1.6×104
37750
27100 513000 270 30500
3.8×104
2.7×104 5.1×105 2.7×102 3.1×104 10-3无法计数
计数原则：选平均菌落数在30~300之间者进行计算
第六章 环境中微生物的检测
第一节
水体中的微生物
一、水体是微生物的天然生境
无论是海水还是淡水水体中，都有着微生物生长所必需
的营养，有着土壤所具备的条件。
二、水体中微生物的数量和分布
1. 污染淡水
处于城镇等人口聚集地区的湖泊、河流等淡水。 108~109个/mL水 主要是一些能分解各种有机物的腐生菌，如芽孢杆菌、 生孢梭菌、变形杆菌、大肠杆菌、粪链球菌等。有的甚至还
勿使吸管尖端伸入稀释液内，并且稀释液应充分振摇。
2、稀释样品的取样和倾注平皿 1.取样 25g或25ml 检样
1：10稀释液
225mL无菌水
1mL 每个稀释度 做两个平皿 1mL 1mL 1mL
1mL
1mL
1ml无菌水
9mL稀释液 1：100
1mL
9mL稀释液 1：1000
1mL
倾注平皿
将凉至 46℃营养琼脂培养基注入平皿 约15ml，并转动平皿，混合均匀。
证实试验
挑取平板上的可 疑菌落，进行革 兰氏染色观察。 同时接种乳糖发 酵管36±1℃培养 24±2h，观察产 气情况。
根据证实为 大肠杆菌阳 性的管数， 查MPN表， 报告每 100ml（g） 大肠菌群的 MPN值。
较清洁样品的三步法图示
10mL
100mL 100mL 10mL 10mL 10mL 10mL 水样 10mL 10mL 10mL 10mL 10mL
3. 影响微生物在淡水水体中分布的因素 水体类型、污染程度、有机物的含量、溶解氧量、水温、 pH及水深等。 4. 海水 除了一些从河水、雨水及污水等带来的临时种类外，绝 大多数是耐盐、嗜冷、耐高渗透压和耐高静水压力的种类。 海水中常见的微生物有假单胞菌属、弧菌属、黄色杆菌属、 无色杆菌属及芽孢杆菌属等。 一般在港口，每毫升海水含菌量为1×105个，在外海每 毫升含菌为10~250个。
证实产气 （阳性） 结果与否
乳糖蛋白胨培养液
大肠菌群测定
产酸判断：紫色培养液变成黄色 产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试管有气泡沿管壁
上浮，应考虑可能有气体产生，需进一步试验。
挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落；
红色、粉红色菌落。 抑制剂：胆盐、煌绿、十二烷基硫酸钠。
2、计算方法 MPN＝
9ml稀释液 1：100
9ml稀释液 1：1000
9ml稀释液 1：10000
操作要求： “无菌操作”贯彻始终。
环境要求：琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。 代表性：取固体样品时需多采几个部位，且经过均质或研磨；
液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
减少误差：每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管，将吸管内液体沿管壁流入，
三、水的细菌学检测
（一） 细菌总数测定
菌落总数——需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板 上生长的细菌菌落总数. 作用：判定水体被细菌污染的程度
基本操作一般包括：
样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
1、样品的处理和稀释
充分振摇或研磨
25g或25ml 检样
1：10稀释液。 225mL稀释液 含有玻璃珠的灭 菌玻璃瓶或乳钵 1ml 1ml 1ml
如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现
象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。
报告原则
例 次
不同稀释度的平均菌落数 10-1 10-2 10-3 两个稀释度 菌落数(个 菌落数之比 /mL) 报告方式(个 /mL)
1
2 3 4 5 6 7
1365
2760 2890 无法计数 27 无法计数 无法计数
总量。空气中尘埃含量越高，微生物的种类数量越多。
表4-2 不同条件下1m3空气的含菌量 条 畜舍 宿舍 城市街道 市区公园 海洋上空 北极（北纬80o） 件 数 20000 5000 200 1~2 0 量
1~2×106
三、空气微生物的卫生标准 室内空气污染的指标：＞500～1000个/m3。 清洁程度 最清洁空气 清洁空气 普通空气 细菌总 数 清洁程度 3 （个/m ） 1～2 <30 31～125 临界环境 轻度污染 严重污染 细 菌 总 数 （个/m3） ～150 <300 >301
50mL三倍浓缩乳 糖蛋白胨培养液 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL 5mL
三步法图示
37℃ 培养48h 37℃培养24h 取产酸产气的发酵管 中培养液在伊红美兰 平板上进行划线 取有核心和带金 属光泽的深紫色 菌落进行革兰氏 染色
镜检（革兰氏阴性菌）
37℃ 培养24h
含有伤寒、痢疾、霍乱、肝炎等人类病原菌。
2. 清洁淡水 （1）溪流及贫营养湖 10~100个/mL水 以自养型种类为主。常见细菌有绿硫细菌、紫色细菌、蓝 细菌、柄细菌、赭色纤发菌、球衣菌和萤光假单胞菌等。此 外，还有许多藻类（如绿藻、硅藻等）、原生动物（如钟虫 及其他固着型纤毛虫、变形虫、鞭毛虫等）和后生动物（如 枝角类、桡足类等）。 （2）地下水、自流井、山泉及温泉 有机物和微生物都很少 石油岩石地下水含分解烃的细菌，含铁泉水有铁细菌，含 硫温泉有硫磺细菌。
各种用途的水质标准
标准名称及标准编号 生活饮用水卫生标准 GB5749-85 生活饮用水源水质标准 CJ3020-93 地表水环境质量标准 GB3838-2002 地下水质量标准 GB/T14848-93 景观娱乐用水水质标准 GB12941-91 农业灌溉水质标准 GB5084-92 渔业水质标准 GB11607-89 海水水质标准 GB3097-1997 项目 细菌总数(个/mL) 总大肠菌群(个/L) ≤100 ≤3 一级≤1000 二级≤10000 Ⅰ≤200 Ⅱ≤2000 Ⅲ≤10000 Ⅳ≤20000 Ⅴ≤40000 Ⅰ～Ⅲ≤100 Ⅳ≤1000 Ⅴ﹥1000 标准值
1000×为阳性结果的发酵管（瓶）的数目 为阴性结果的水样体积（mL）×全部水样体积（mL）
MPN＝ =
1000 ×5
250（mL）×300（mL）
第二节
空气中的微生物
空气的生态条件——不适合微生物生长繁殖。（营 养不足、紫外线照射、水分少）。
一、空气微生物的来源 空气中的微生物主要来自土壤飞起来的灰尘、水 面吹起的水滴、生物体体表脱落的物质、人和动物的 排泄物等。
数报告之。
4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀
释倍数报告之。 5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以最接近300或30的平均菌
落数乘以稀释倍数报告之。 6.若所有的菌落数匀为“无法计数”时，应注明水样的最大稀释倍数。 7.在求同稀释度的平均数时，若其中1个平板上有较大片状菌落生长时，则不宜 采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落约 为平板的一半，而另一半平板上菌落分布很均匀，则可按半平板上的菌落计数， 然后乘以2作为整个平板的菌落数。
1000×为阳性结果的发酵管（瓶）的数目 为阴性结果的水样体积（mL）×全部水样体积（mL）
练
习：
如对一自来水厂出水进行检验，初发酵一般在10支小发酵管和两 支大发酵瓶内进行，复发酵在 5 支小发酵管内进行。以 300mL 进 行初发酵实验，其中100mL的水样2份（分状于2个大发酵瓶中）， 10mL 水样 10 份，（分状于 10 支个小发酵管中）。实验结果： 100mL的2份水样为阴性结果，无大肠杆菌存在；10mL的水样中 有5份为阳性结果，存在大肠杆菌。则：
总大肠菌群(个/L)
粪大肠菌群(个/L) 细菌总数(个/mL)
总大肠菌群(个/L)
总大肠菌群(个/L) 粪大肠菌群(个/L) 粪大肠菌群(个/L) 总大肠菌群(个/L) 总大肠菌群(个/L)
Ⅰ～Ⅲ≤3
A类≤10000 A类≤2000 ≤10000
Ⅳ≤100
Ⅴ﹥100
≤5000 ≤500（贝类养殖水质） ≤10000 ≤700（贝类养殖水质）
1000 50 N C At
• 式中：C——空气细菌数；（个/m3） N——菌落数（个）； A——平皿底面积（㎝2）； t――暴露时间（min）。 • 目前，我国还没有统一的空气卫生标准，一般以 室内1m3空气中细菌总数在500～1000以上作为污 染指标。
4、菌落总数报告方式
菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1~100时，按实 有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数 按四舍五入计算。为了缩短数字后面的零位，可用10的指数来表示。 固体检样以克（g)为单位报告，液体检样以毫升（mL）为单 位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告。
二、空气中微生物的数量和分布 空气中的微生物大部分是腐生的种类，但是不同的空气 环境中微生物的种类不同。有些种类是普遍存在的，如某些 霉菌、酵母菌、真菌孢子。细菌主要是来自于土壤的腐生性
种类，常见的为各种球菌、芽孢杆菌、产色素细菌等。
空气中微生物的分布随环境条件及微生物的抵抗力不同 而呈现不同的分布规律。空气中微生物的数目决定于尘埃的
1.仅1个稀释度的平均菌落数在此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数报 告之。 2.若有2个稀释度的平均菌落数在30~300之间时，则按两者的菌落总数之比来决 定，若比值小于2应报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小的菌落总数。 3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，以稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍
3、培养及计数
培养条件：倒置于36±1℃温箱内培养48±2h
计数时间：到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放 置于0－4℃，但不得超过24h。
计平皿中菌落数：肉眼观察，必要时用放大镜检查。记下各平板的菌落总数，求出同稀 释度的各平板平均菌落数。
规律：不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落 数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈 多。
( 二)
大肠菌群测定 ——国家标准采用三步法
大肠菌群 ——需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革 兰氏阴性无芽胞杆菌。 1、检验查表方法 乳糖发酵试验
样品稀释后，选 择三个稀释度， 每个稀释度接种 三管乳糖胆盐发 酵管。36±1℃培 养48±2h，来自百度文库察 是否产气。
分离培养
将产气发酵管培 养物转种于伊红 美蓝琼脂平板上， 36±1℃培养1824h，观察菌落形 态。