国家自然科学基金申请方法与技巧讲座

D、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。 对拟采用的技术方法进行介绍和分析。 成熟的方法重点介绍可以应用于本研究的理论依 成熟的方法重点介绍可以应用于本研究的理论依 据和实验依据。 据和实验依据。 新方法在详细介绍其原理的基础上， 新方法在详细介绍其原理的基础上，阐明可以应 用于本研究的理论依据和实验依据。 用于本研究的理论依据和实验依据。 需特别注意的问题：必须对所运用的技术方法的 需特别注意的问题： 原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十 原理、 分清楚，绝不能是一种简单的移植。 分清楚，绝不能是一种简单的移植。 例如：抗体 + 功能基团，理论上可以实现融合， 功能基团，理论上可以实现融合， 例如： 但存在“活性、表达载体选择、纯化等问题。 但存在“活性、表达载体选择、纯化等问题。 E、提出本项目的研究设想。 提出本项目的研究设想。
基金申请技巧讲座
第四军医大学科研部 苏景宽
第一部分
如何撰写申请书
400字 一、摘 要（限400字）
包括：研究方法、内容、目标、科学意义。 包括：研究方法、内容、目标、科学意义。 如：采用……方法，进行……研究， 采用……方法，进行……研究， ……方法 ……研究 阐明……机制或揭示……规律， 阐明……机制或揭示……规律， ……机制或揭示……规律 为……奠定基础／提供……思路。 ……奠定基础／提供……思路。 奠定基础 ……思路
因为晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、 因为晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、 晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性 数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细 数量相对稳定的细胞，它们分裂、 胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、 产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、 对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如 对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。 此，晶状体上皮细胞还是晶状体中受外来刺激影响较早 晶状体上皮细胞还是晶状体中受外来刺激影响较早 还是晶状体中受外来刺激影响 的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞 的部位， 还发生退行性变、细胞膜通透性增加、 还发生退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改 退行性变 变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单纯老化 细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，
防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来， 防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来， 国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。就致 国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。 病的环境因素讲，氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围 病的环境因素讲，氧化因子、紫外线辐射、 环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变 环境中离子浓度改变及一些生长因子、 均与老年性白内障的发生有关。就研究的部位分，晶状 均与老年性白内障的发生有关。就研究的部位分， 体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内 障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的晶状体上 障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的晶状体上 在白内障的形成中的变化更引人关注。 皮细胞在白内障的形成中的变化更引人关注 皮细胞在白内障的形成中的变化更引人关注。
研究领域：白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、 研究领域：白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、 治疗措施等研究 研究方向：白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病 研究方向：白内障发病机制的研究，包括环境因素、 靶点、细胞水平、分子水平研究等 靶点、细胞水平、 科学问题：白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病 科学问题：白内障发病过程中的相关基因研究， 基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等 基因筛选、功能研究、调控机制、
细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白 细胞的变化入手探讨白内障的成因， 内障发病机理的主要环节。而晶状体上皮细胞变化的基 内障发病机理的主要环节。 因调控机制是问题的关键所在， 因调控机制是问题的关键所在，也是有待我们深入研究 是问题的关键所在 的问题。 的问题。
白内障的形成与晶状体的老化密不可分， 白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是晶状 晶状体的老化密不可分 体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用 体老化的极端表现。 的结果，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累， 的结果，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累， 也有程序性的、非随机性的组织特异性多种基因表达的 也有程序性的、非随机性的组织特异性多种基因表达的 改变。目前， 改变。目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下 三方面： 三方面：
[3的晶状体之间存在差异[3-5] 。
体外实验也证实多种因素(H2O2、UV体外实验也证实多种因素(H2O2、UV-B、晶状体 多种因素(H2O2 蛋白的自身抗体)诱发的白内障模型中晶状体上皮的损 蛋白的自身抗体)诱发的白内障模型中晶状体上皮的损
[6伤是晶状体混浊的主要环节[6-8]。因此，从晶状体上皮 因此，
二、立论依据
对基础研究，着重结合国际科学发展趋势， 对基础研究，着重结合国际科学发展趋势， 论述科学意义 论述科学意义 对应用基础研究，着重结合学科前沿， 对应用基础研究，着重结合学科前沿，围 绕国民经济和社会发展中的重要科技问题 论述应用前景 论述应用前景
在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、 在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、 具体科学问题的理解
老年性白内障是与年龄相关的疾病， 老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年龄的增 是与年龄相关的疾病 其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化， 加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化， 白内障的患病人数还将持续增加。目前， 白内障的患病人数还将持续增加。目前，它已是人类 第一位的致盲疾病。迄今为止, 治疗白内障唯一有效的 第一位的致盲疾病。迄今为止, 方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。 方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。 虽然手术后患者可以恢复良好的视力， 虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的 术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障 术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大， 所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重 的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的 的医疗负担。最近的调查表明， 发病时间延缓10 发病时间延缓10年，白内障手术的数量就会减少45%[1]。 10年 白内障手术的数量就会减少45% 所以，一些学者认为通过预防白内障发生或延缓其发展 预防白内障发生或延缓其发展 所以，一些学者认为通过预防白内障 的途径征服白内障已成为一项全球性的社会和社会经济 的途径征服白内障已成为一项全球性的社会和社会经济 问题[2]。
2、国内外现状分析（与综述的区别） 国内外现状分析（与综述的区别）
存在问题： 存在问题： A、低水平重复：不了解最新进展，对国内外现 低水平重复：不了解最新进展， 状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。 状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。 B、文献复习不全：检索文献方法不当、选择关键词 文献复习不全：检索文献方法不当、 不妥，甚至人为缩小检索范围。 不妥，甚至人为缩小检索范围。 C、总结表达不够：对国内外现状缺乏归纳分析， 总结表达不够：对国内外现状缺乏归纳分析， 只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。 只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。 D 、对方法原理理解不够：对研究方法不熟悉，简 对方法原理理解不够：对研究方法不熟悉， 单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。 单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。
一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的 研究。UV-B辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是 研究。UV主要的靶细胞，其Na-K-ATP酶的活性增加，蛋白质的合 主要的靶细胞， Na- ATP酶的活性增加， 酶的活性增加 成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有c-fos基因 成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有c fos基因 的表达增加；还有组蛋白H4 H4、 的低表达`和蛋白酶C 的表达增加；还有组蛋白H4、H3 的低表达`和蛋白酶C、 β-肌动蛋白、γ-肌动蛋白基因的高表达[9-12]。Carper [9肌动蛋白、 肌动蛋白基因的高表达[9 12]。 等[13]利用RT-PCR-DD(reverse transcription[13]利用RT-PCR利用RT transcriptionpolymerase chain reaction differential display)技术 display)技术 研究H2O2 研究H2O2诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显 H2O2诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显 示NADH脱氢酶4亚基、细胞色素b、谷氨酰胺转移酶基 NADH脱氢酶 亚基、细胞色素b 脱氢酶4 因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子2 因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子2 （alternative splicing factor）、β-三羟基异丁酰辅酶 factor）、 ）、β A水解酶基因表达的增加。 水解酶基因表达的增加。
撰写方法： 紧紧围绕本次申请项目的主题。 撰写方法：要紧紧围绕本次申请项目的主题。 本次申请项目的主题 A、从领域切入，简要论述国内外研究成果，并引 国内外研究成果 从领域切入，简要论述国内外研究成果， 出当前的热点研究方向。 出当前的热点研究方向。 B、从研究方向展开，较详细地分析国内外的研究 从研究方向展开，较详细地分析国内外的研究 进展，阐明在该方向上存在的问题。 进展，阐明在该方向上存在的问题。 C、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究结果、 围绕存在的问题，结合国内外以往的研究结果、 结果 当前的现状及今后的发展趋势 当前的现状及今后的发展趋势，详细论述和分 现状及今后的发展趋势， 析这些问题产生的原因，提出该方面的空白点、 这些问题产生的原因，提出该方面的空白点、 未知数、以及研究的难点、焦点， 未知数、以及研究的难点、焦点，从而为自己 申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。 申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。
研究意义
在研究领域层面 从研究领域切入 从研究方向展开 围绕某一具体科学问题 （本项目研究目标） 本项目研究目标） 进行归纳分析 提出研究 设想