山茱萸多糖的提取及清除自由基作用
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江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 12 期
史 娟． 山茱萸多糖的提取及清除自由基作用［J］． 江苏农9 —
山茱萸多糖的提取及清除自由基作用
史娟
（ 陕西理工学院化学与环境科学学院，陕西汉中 723001）
摘要： 采用水体醇沉法提取山茱萸多糖，研究山茱萸粗多糖和去蛋白多糖对二苯代苦味酰肼基自由基（ DPPH·） 的清除作用。通过单因素及正交试验确定山茱萸中多糖的最佳提取条件为： 浸提 1 次，提取时间 90 min，乙醇浓度 75% ，料液比 1 g ∶ 18 mL。清除自由基试验结果表明，山茱萸多糖对 DPPH·的清除活性弱于对照品维生素 C，粗多糖 清除自由基活性高于去蛋白多糖。
收稿日期： 2012 － 04 － 26 基金项目： 陕西省社会发展科技攻关项目（ 编号： 2009K11 － 03 ） ； 四
川省广元市科技支撑项目（ 编号： 41431） 。 作者简介： 史 娟（ 1978—） ，女，陕西子长人，硕士，讲师，主要从事天
然产物化学研究。E － mail： hzhshijuan@ 126． com。
关键词： 山茱萸； 多糖； 提取； 抗氧化性 中图分类号： TS202． 3 文献标志码： A 文章编号： 1002 － 1302（ 2012） 12 － 0289 － 03
山茱萸（ Fructus Corni） 是我国的传统中药材［1］。多糖为 山茱萸的主要活性成分之一［2］，它与免疫功能调节、细胞与 细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症诊断与治疗等有着密切 关系，具有能 量 储 存、结 构 支 持、防 御 功 能 和 抗 原 等 功 能［3］ 。 山茱萸多糖是山茱萸生物学活性物质的重要成分，具有抗氧 化性和清除自由基［4］、免疫兴奋［5 － 6］、抑菌等作用［7］。目前山 茱萸多糖的提取工艺已逐步成熟［8 － 。 10］ 本试验以陕西省汉 中市佛坪县产山茱萸为原料，研究溶剂浓度、提取次数、时间、 料液比等因素对多糖提取的影响，并对所提取山茱萸多糖抗 氧化性能进行评价，旨在为山茱萸多糖的药用功能研究及开
以葡萄糖做标准品，吸取一定体积粗多糖提取液，按标准 曲线的制作方法在 490 nm 处测定吸光度，采用苯酚 － 硫酸法 测 定 山 茱 萸 中 多 糖 含 量，根 据 标 准 曲 线 回 归 方 程 进 行 相 关 计算。 1． 4 山茱萸多糖提取条件的单因素试验 1． 4． 1 不同料液比对山茱萸多糖提取率的影响 称取山茱 萸粉末 5 g，在提取时间为 60 min，乙醇浓度为 75% 条件下， 设定料液比 （ g ∶ mL） 分 别 为 1 ∶ 12、1 ∶ 14、1 ∶ 16、1 ∶ 18、 1 ∶ 20 各提取 4 次，测定 D490 nm ，并计算多糖提取率。 1． 4． 2 不同提取次数对山茱萸多糖提取率的影响 称取山 茱萸粉末 5 g，在提取时间为 60 min、乙醇浓度为 75% 、料液 比为 1 g ∶ 18 mL 的条件下，设定提取次数分别为 1 ～ 5，测定 D490 nm ，并计算多糖提取率。 1． 3． 2． 3 不同提取时间对山茱萸多糖提取率的影响 称取 山茱萸粉末 5 g，在乙醇浓度为 75% 、料液比 1 g ∶ 18 mL、提取 4 次的条件下，设定提取时间分别为 30、60、90、120、150 min， 测定 D490 nm ，并计算多糖提取率。 1． 4． 4 不同乙醇浓度对山茱萸多糖提取率的影响 称取山 茱萸粉末 5 g，在提取时间为 60 min、料液比 1 g ∶ 18 mL、提取 次数 为 4 次 的 条 件 下，设 定 乙 醇 浓 度 分 别 为 60% 、65% 、 70% 、75% 、80% ，测定 D490 nm ，并计算多糖提取率。 1． 5 山茱萸多糖提取条件的正交试验
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江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 12 期
120 min，多次重复，合并提取液，减压浓缩，所得滤液减压浓 缩后，加无水乙醇至醇浓度达 70% ，静置 24 h，4 000 r / min 15 min 沉淀物离心，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤沉 淀后，40 ℃ 真空干燥得粗多糖。 1． 2． 2 去蛋白多糖的制备 称取山茱萸粗多糖 2． 0 g，用适 量蒸馏水溶解，多次 Sevag 法脱蛋白。脱蛋白后的多糖醇沉， 搅拌后静置 24 h，抽滤，洗涤，干燥得去蛋白山茱萸多糖。 1． 3 山茱萸中多糖含量的测定方法
发利用提供技术支持。
1 材料与方法
1． 1 材料、仪器与试剂 1． 1． 1 材料 山茱萸干燥果实采自陕西省汉中市佛坪县。 1． 1． 2 仪器 722E 型可见分光光度计（ 上海光谱仪器有限 公司） ，101 型电热鼓风干燥箱 （ 北京科 伟 永 兴 仪 器 有 限 公 司） ，L204 － IC 电子分析天平（ 梅特勒 － 托利多仪器上海有限 公司） ，HH 系列恒温水浴锅（ 河北省黄骅市渤海电器厂） ，台 式离心机（ 太仓市医疗器械厂） 。 1． 1． 3 试剂 葡萄糖标准品（ 色谱纯） ，无水乙醇、95% 乙 醇、三氯甲烷、正丁醇、苯酚、丙酮、浓硫酸等分析纯。 1． 2 方法 1． 2． 1 粗多糖的提取 将山茱萸果实烘干、粉碎、过筛。准 确称取 30． 0 g，加 95% 乙醇回流 2 h，以除去单糖、低聚糖及 醇溶性质，趁热抽滤，滤渣烘干后加入 6 倍体积蒸馏水，煮沸
精确称取 105 ℃ 烘干至恒重的葡萄糖 25 mg，蒸馏水溶 解后定容至 100 mL 作为标准溶液。分别吸取标准液 0、0． 2、 0． 4、0． 6、0． 8、1． 0、1． 2、1． 4、1． 6、1． 8、2. 0 mL 置于 10 mL 比 色管中，蒸 馏 水 补 至 2． 0 mL，分 别 加 入 5% 重 蒸 苯 酚 溶 液 1． 0 mL，浓硫酸溶液 5． 0 mL，振荡均匀后于室温放置 10 min， 在 490 nm 处测定吸光度。以葡萄糖浓度 C（ μg / mL） 为横坐 标，吸光度（ D） 为纵坐标绘制标准曲线，并求得回归方程为： D = 0． 092 5C + 0． 174 3，r2 = 0． 998 3。
史 娟． 山茱萸多糖的提取及清除自由基作用［J］． 江苏农9 —
山茱萸多糖的提取及清除自由基作用
史娟
（ 陕西理工学院化学与环境科学学院，陕西汉中 723001）
摘要： 采用水体醇沉法提取山茱萸多糖，研究山茱萸粗多糖和去蛋白多糖对二苯代苦味酰肼基自由基（ DPPH·） 的清除作用。通过单因素及正交试验确定山茱萸中多糖的最佳提取条件为： 浸提 1 次，提取时间 90 min，乙醇浓度 75% ，料液比 1 g ∶ 18 mL。清除自由基试验结果表明，山茱萸多糖对 DPPH·的清除活性弱于对照品维生素 C，粗多糖 清除自由基活性高于去蛋白多糖。
收稿日期： 2012 － 04 － 26 基金项目： 陕西省社会发展科技攻关项目（ 编号： 2009K11 － 03 ） ； 四
川省广元市科技支撑项目（ 编号： 41431） 。 作者简介： 史 娟（ 1978—） ，女，陕西子长人，硕士，讲师，主要从事天
然产物化学研究。E － mail： hzhshijuan@ 126． com。
关键词： 山茱萸； 多糖； 提取； 抗氧化性 中图分类号： TS202． 3 文献标志码： A 文章编号： 1002 － 1302（ 2012） 12 － 0289 － 03
山茱萸（ Fructus Corni） 是我国的传统中药材［1］。多糖为 山茱萸的主要活性成分之一［2］，它与免疫功能调节、细胞与 细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症诊断与治疗等有着密切 关系，具有能 量 储 存、结 构 支 持、防 御 功 能 和 抗 原 等 功 能［3］ 。 山茱萸多糖是山茱萸生物学活性物质的重要成分，具有抗氧 化性和清除自由基［4］、免疫兴奋［5 － 6］、抑菌等作用［7］。目前山 茱萸多糖的提取工艺已逐步成熟［8 － 。 10］ 本试验以陕西省汉 中市佛坪县产山茱萸为原料，研究溶剂浓度、提取次数、时间、 料液比等因素对多糖提取的影响，并对所提取山茱萸多糖抗 氧化性能进行评价，旨在为山茱萸多糖的药用功能研究及开
以葡萄糖做标准品，吸取一定体积粗多糖提取液，按标准 曲线的制作方法在 490 nm 处测定吸光度，采用苯酚 － 硫酸法 测 定 山 茱 萸 中 多 糖 含 量，根 据 标 准 曲 线 回 归 方 程 进 行 相 关 计算。 1． 4 山茱萸多糖提取条件的单因素试验 1． 4． 1 不同料液比对山茱萸多糖提取率的影响 称取山茱 萸粉末 5 g，在提取时间为 60 min，乙醇浓度为 75% 条件下， 设定料液比 （ g ∶ mL） 分 别 为 1 ∶ 12、1 ∶ 14、1 ∶ 16、1 ∶ 18、 1 ∶ 20 各提取 4 次，测定 D490 nm ，并计算多糖提取率。 1． 4． 2 不同提取次数对山茱萸多糖提取率的影响 称取山 茱萸粉末 5 g，在提取时间为 60 min、乙醇浓度为 75% 、料液 比为 1 g ∶ 18 mL 的条件下，设定提取次数分别为 1 ～ 5，测定 D490 nm ，并计算多糖提取率。 1． 3． 2． 3 不同提取时间对山茱萸多糖提取率的影响 称取 山茱萸粉末 5 g，在乙醇浓度为 75% 、料液比 1 g ∶ 18 mL、提取 4 次的条件下，设定提取时间分别为 30、60、90、120、150 min， 测定 D490 nm ，并计算多糖提取率。 1． 4． 4 不同乙醇浓度对山茱萸多糖提取率的影响 称取山 茱萸粉末 5 g，在提取时间为 60 min、料液比 1 g ∶ 18 mL、提取 次数 为 4 次 的 条 件 下，设 定 乙 醇 浓 度 分 别 为 60% 、65% 、 70% 、75% 、80% ，测定 D490 nm ，并计算多糖提取率。 1． 5 山茱萸多糖提取条件的正交试验
— 290 —
江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 12 期
120 min，多次重复，合并提取液，减压浓缩，所得滤液减压浓 缩后，加无水乙醇至醇浓度达 70% ，静置 24 h，4 000 r / min 15 min 沉淀物离心，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚反复洗涤沉 淀后，40 ℃ 真空干燥得粗多糖。 1． 2． 2 去蛋白多糖的制备 称取山茱萸粗多糖 2． 0 g，用适 量蒸馏水溶解，多次 Sevag 法脱蛋白。脱蛋白后的多糖醇沉， 搅拌后静置 24 h，抽滤，洗涤，干燥得去蛋白山茱萸多糖。 1． 3 山茱萸中多糖含量的测定方法
发利用提供技术支持。
1 材料与方法
1． 1 材料、仪器与试剂 1． 1． 1 材料 山茱萸干燥果实采自陕西省汉中市佛坪县。 1． 1． 2 仪器 722E 型可见分光光度计（ 上海光谱仪器有限 公司） ，101 型电热鼓风干燥箱 （ 北京科 伟 永 兴 仪 器 有 限 公 司） ，L204 － IC 电子分析天平（ 梅特勒 － 托利多仪器上海有限 公司） ，HH 系列恒温水浴锅（ 河北省黄骅市渤海电器厂） ，台 式离心机（ 太仓市医疗器械厂） 。 1． 1． 3 试剂 葡萄糖标准品（ 色谱纯） ，无水乙醇、95% 乙 醇、三氯甲烷、正丁醇、苯酚、丙酮、浓硫酸等分析纯。 1． 2 方法 1． 2． 1 粗多糖的提取 将山茱萸果实烘干、粉碎、过筛。准 确称取 30． 0 g，加 95% 乙醇回流 2 h，以除去单糖、低聚糖及 醇溶性质，趁热抽滤，滤渣烘干后加入 6 倍体积蒸馏水，煮沸
精确称取 105 ℃ 烘干至恒重的葡萄糖 25 mg，蒸馏水溶 解后定容至 100 mL 作为标准溶液。分别吸取标准液 0、0． 2、 0． 4、0． 6、0． 8、1． 0、1． 2、1． 4、1． 6、1． 8、2. 0 mL 置于 10 mL 比 色管中，蒸 馏 水 补 至 2． 0 mL，分 别 加 入 5% 重 蒸 苯 酚 溶 液 1． 0 mL，浓硫酸溶液 5． 0 mL，振荡均匀后于室温放置 10 min， 在 490 nm 处测定吸光度。以葡萄糖浓度 C（ μg / mL） 为横坐 标，吸光度（ D） 为纵坐标绘制标准曲线，并求得回归方程为： D = 0． 092 5C + 0． 174 3，r2 = 0． 998 3。