大肠菌群检测(平板计数法)
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大肠菌群检验平板计数法
适用范围与培养基
平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更精确。 适合用于污染比较严重的样品，但对于污染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。 所用培养基：VRBA琼脂、BGLB培养基。
平板计数法流程图
GB 4789.3-2016（第二法）
检样25g发酵乳糖，但由于样品含有的其他糖类混入了培养基，使 得不能分解乳糖但能分解其他糖类的细菌也能够长出红色菌落，所以需要进行 证实实验。
结果报告
经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百分比乘以计数的平板菌落数，再乘 以稀释倍数，即为每g (mL)样品中大肠菌群数 。
例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取10个 接种BGLB肉汤，证实6个为阳性。则样品大肠菌群数为： 100×6/10×104/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL)
36℃±1 ℃ 18h ~24h
挑选10个菌落分别 接种到BGLB
VRBA琼脂
配方(g/L): 蛋白胨:7.0; 酵母粉:3.0;乳糖:10.0;3号胆盐:1.5;中性红:0.03;结晶紫:0.002;氯化 钠:5.0; 琼脂:15.0;pH 7.4±0.1,25℃ 其中蛋白胨提供氮源；酵母粉提供生长促进因子和Ｂ族维生素；乳糖提供碳源， 大肠菌群发酵乳糖，产生酸性物质；３号胆盐是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏 阳性菌；结晶紫也是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏阳性菌和一部分革兰氏阴性 菌；中性红是一种指示剂，在酸性条件显红色，碱性条件下显无色。氯化钠维持 细菌生长时的渗透压。琼脂是一种凝固剂。
10倍系列稀释
选择2~3个适宜稀释度的样液，接种VRBA平板
36℃±1℃
18~24h
计数典型和可疑菌落
注：VRBA(结晶紫中性红胆盐 琼脂)又称为：VRB或VRBL
BGLB肉汤证实试验
36℃±1℃
18~24h
报告结果
平板计数法操作
菌落数在15-150之 间的平板,计数典型
和可疑菌落
典型菌落为紫红色周围有 红色胆盐沉淀环，0.5mm
平板菌落数的选择
选择菌落数在15-150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
什么样的菌落必须要做证实试验
一是非典型菌落，如在颜色、直径与典型菌落不符合的菌落。 另一种情况是被检样品中含有乳糖以外的其他糖类，如牛奶、饮料等样品。本
适用范围与培养基
平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更精确。 适合用于污染比较严重的样品，但对于污染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。 所用培养基：VRBA琼脂、BGLB培养基。
平板计数法流程图
GB 4789.3-2016（第二法）
检样25g发酵乳糖，但由于样品含有的其他糖类混入了培养基，使 得不能分解乳糖但能分解其他糖类的细菌也能够长出红色菌落，所以需要进行 证实实验。
结果报告
经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百分比乘以计数的平板菌落数，再乘 以稀释倍数，即为每g (mL)样品中大肠菌群数 。
例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取10个 接种BGLB肉汤，证实6个为阳性。则样品大肠菌群数为： 100×6/10×104/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL)
36℃±1 ℃ 18h ~24h
挑选10个菌落分别 接种到BGLB
VRBA琼脂
配方(g/L): 蛋白胨:7.0; 酵母粉:3.0;乳糖:10.0;3号胆盐:1.5;中性红:0.03;结晶紫:0.002;氯化 钠:5.0; 琼脂:15.0;pH 7.4±0.1,25℃ 其中蛋白胨提供氮源；酵母粉提供生长促进因子和Ｂ族维生素；乳糖提供碳源， 大肠菌群发酵乳糖，产生酸性物质；３号胆盐是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏 阳性菌；结晶紫也是一种抑菌剂，主要是抑制革兰氏阳性菌和一部分革兰氏阴性 菌；中性红是一种指示剂，在酸性条件显红色，碱性条件下显无色。氯化钠维持 细菌生长时的渗透压。琼脂是一种凝固剂。
10倍系列稀释
选择2~3个适宜稀释度的样液，接种VRBA平板
36℃±1℃
18~24h
计数典型和可疑菌落
注：VRBA(结晶紫中性红胆盐 琼脂)又称为：VRB或VRBL
BGLB肉汤证实试验
36℃±1℃
18~24h
报告结果
平板计数法操作
菌落数在15-150之 间的平板,计数典型
和可疑菌落
典型菌落为紫红色周围有 红色胆盐沉淀环，0.5mm
平板菌落数的选择
选择菌落数在15-150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。 典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
什么样的菌落必须要做证实试验
一是非典型菌落，如在颜色、直径与典型菌落不符合的菌落。 另一种情况是被检样品中含有乳糖以外的其他糖类，如牛奶、饮料等样品。本