高等药物分析复习资料.doc

1、简述现代药物分析较传统药物分析的新特点。

静态分析→动态分析

体外分析→体内分析

品质分析→生物活性分析

单一技术→联用技术

小样本分析→高通量分析

人工分析→计算机辅助分析

特点：（1）新的药物分析理论、方法、技术迅速发展，具有高通量、高灵敏、高选择性优点；（2）分析仪器自动化、数字化、仿生化和计算机化并向智能化、信息化方向发展；（3）药物分析测定对象、内容亦有很大的扩展。如对药物的晶型和构型研究、药物中存在的有关物质（含降解产物）结构研究、手性药物的分离、药物代谢研究、基因工程药物分析、复杂物质分离分析（含中药成分分析）等。

2、简述现代药物分析的新进展主要有哪些方面。

①分析领域的发展：药物质量控制、手性药物分析、临床药学、中药与天然药物分析、药物代谢分析、法医毒物分析、兴奋剂检测、药物制剂分析、创新药物研究、药品上市后的评价。

②分析技术的发展：核磁共振波谱、荧光分析法、薄层色谱法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法，毛细管电泳，多维色谱及联用技术。色谱-光谱联用技术使高分离性能的液相色谱技术与能够获得丰富化学结构信息的光谱技术相结合，是现代药学研究领域中最强有力的分析工具之一。

3、常用的手性固定相有哪些？并简述其各自的原理。

①环糊精衍生物手性固定相：拆分机制一般认为是由于环糊精特殊的桶状结构，可与对映体形成非对映的包合物而达到拆分目的。

②冠醚类手性固定相：用手性冠醚作固定相分离手性化合物的主要依据是溶质分子与手性冠醚环腔形成主客体络合物的稳定常数不同. 冠醚的手性“臂障"越大,其手性识别能力越高.

③多糖类手性固定相：它们本身表现出一定的手性识别能力，但其直接做固定相选择性低，然而其衍生物作为CSP 具有较高的手性识别能力,能拆分大量的对映体。

④Pirkle型手性固定相(刷型固定相)：该类固定相通过含末端梭基或异氰酸酷基手性前体与氨基键合硅胶进行缩合反应，分别形成含酞胺或服型结构CSP，广泛用于氨基酸、乙内酞脉、内酞脉、胺类、醇类及硫醇类药物对映体拆分。

⑤配体交换型(L EC)手性固定相：是利用配体交换的分离机制而制成的固定相，即一个金属离子可结合一个配体分子和一个对映体溶质分子，形成可逆的非对映体复合物，以达到分离对映体的目的，这类手性固定相的液相色谱多用于氨基酸或者肽类的拆分，这类色谱多用含水流动相，其中加入适量螯合的金属离子.

⑥大环抗生素类手性固定相：是将包含多个手性中心的大环抗生素固定到硅胶上形成的一类用于对映体拆分的新型手性固定相。

⑦分子印迹手性固定相：它是将功能单体,在模板分子(目标分子,又称印迹分子)的存在下,交联聚合,然后洗脱除去模板分子,这样制得的聚合物,在空间结构和功能基排布上与目标

分子具有互补结构的空穴,因此在分子识别中有着特殊的选择性和良好的应用前景.

⑧蛋白质类手性固定相：其具有大量不同的可与样品分子结合的部位,此外样品组分的保留和选择性易受流动相的pH、离子强度、有机溶剂等影响,因此蛋白质CSP的手性选择性较其他CSP 要高,是高效液相色谱分离中最具吸引力的手性固定相之一

⑨手性聚合物固定相：该类固定相使用最多的有两种:一种是通过在手性条件下不对称聚合制备的，如用手性催化剂;另一种是用手性单体的方法制备的。用这两种技术可制备有手性识别功能的聚合物，如聚甲基丙烯的三苯甲酷，聚酞胺等，这类手性聚合物可涂渍或键合到硅胶上制成CSP。

4、手性高效液相色谱法的分类有哪些？并简述其各自的原理。

(1)间接法：对映体的混合物与手性试剂结合，形成一对非对映异构体，然后以常规固定相或手性方法分离，这种方法也称为柱前衍生化法或手性衍生化试剂法(CDR)。此法主要适用于不宜直接拆分的样品，无须使用价格昂贵的手性柱。但此法对衍生化试剂纯度要求较高，所使用的衍生化试剂必须具有足够的光学纯度和稳定性，在衍生化反应和色谱条件下稳定;且衍生化条件复杂，费时费力，所得单一对映体有时不易与衍生化试剂分离。但该法仍不失为一种普遍、高效的对映体拆分方法。

(2)直接法：不做柱前衍生化处理，直接以手性固定相或手性流动相拆分的方法，称为直接法。又分为手性固定相法(CSP)和手性流动相添加剂法(CMPA)。手性固定相(CSP)法是以手性固定相直接与对映体外消旋物相作用，因生成的短暂的复合物稳定性不同，从而引起二者柱内保留时间不同而进行分离的方法。目前，以商品出售的手性固定相有上百种之多，具有简便、快速、立体选择性强、适用范围广等优点。手性流动相添加剂法(CMPA)又称手性添加剂法，这种拆分法是在流动相中加入手性试剂，利用手性试剂与各对映体结合的稳定常数不同，以及药物与结合物在固定相上分配系数的不同来进行分离。此法不需昂贵的手性柱，亦无须进行柱前衍生，手性添加剂可视要求而更换，使用比较方便。

5、毛细管电泳的种类有哪些？毛细管电泳分离的驱动力是什么？毛细管电泳比高效液相色谱高效的原因是什么？

种类：毛细管电泳根据分离模式的不同，可以分为毛细管区带电泳(CZE)、胶束电动毛细管色谱(MECC或MEKC)、毛细管凝胶电泳(CaPillary Gel Electrophoresis，CGE)、毛细管电色谱(CaPillary eleetrochromatogaphy，CEC)、毛细管等电聚焦(CaPillary isoeleetric focusing，CIEF)、毛细管等速电泳(CaPillary Isotachophoresis，CITP)等。

毛细管区带电泳(CZE)是毛细管电泳的最基本的工作方式。它的分离机制是基于各被测物质在溶液中的淌度差异，影响组分淌度的因素有组分的荷质比、结构和体积。CZE是最简单也是应用最广的一种模式，可用于氨基酸、肤、蛋白质、简单离子和对映体等分析。

胶束电动毛细管色谱(MEKC)是采用表面活性剂在运行缓冲液内形成动态胶束，利用样品各组分在水相、胶束相两相间分配行为上的差异进行分离，是色谱技术和电泳技术的结合。

毛细管凝胶电泳(CGE)是将凝胶充入毛细管中作支持物，不同体积的溶质分子在起分子筛作用的凝胶中得以分离。凝胶粘性大、抗对流、能减少溶质扩散，柱效极高，但是CGE 制备困难，易产生空泡。后来发展了无胶筛分，用粘度低的线性聚合物溶液代替高粘度的聚丙烯酞胺，同样起到了分子筛的作用，而且比凝胶柱便宜、寿命长，但是柱效稍低。CGE 现己广泛用于DNA片段的分析。

毛细管等电聚焦(CIEF)用两性电解质在毛细管内建立pH梯度，使各种不同等电点的蛋白质在电场的作用下迁移到等电点的位置，形成一非常窄的聚焦区带。可用于测定蛋白质的