免疫检测常用方法与运用秦伟

ELISA—双抗原夹心法
用特异性抗原进行包被和制备酶结合 物，以检测相应的抗体。
抗HBs的检测 抗HCV的检测 抗HIV的检测
ELISA—双抗原夹心法
ELISA—竞争法
标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与 固相抗原结合。如受检标本中无抗体，则 酶标抗体能顺利地与固相抗原结合。加入 酶标抗原后就显色深。如受检标本中含有 抗体，则与酶标抗体以同样的机会与固相 抗原结合，竞争性地占去了酶标抗体与固 相抗原结合的机会，使酶标抗原与固相载 体的结合量减少。加入酶标抗原后就显色 浅或不显色。
（4）加入针对特异性抗原的酶标抗体，形成固相二抗 — IgM抗体—抗原 —酶标抗体复合物。
（5）加底物显色，如有颜色显示，则表示血清标本中的 特异性 IgM 抗体存在，是为阳性反应。
ELISA—捕获法
以优生四项IgM抗体检测为例
ELISA—捕获法
甲肝IgM抗体测定
ELISA总结
酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性， 几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以 检测。它的最小可测值达 ng 甚至 pg 水平。 酶免疫测定标记试剂比较稳定，且无放射 性危害。因此，酶免疫测定的应用日新月 异，酶免疫测定的新方法、新技术不断发 展。
免疫检测常用方法及应用
免疫学检测方法是应用免疫学理论设 计的一系列测定抗原、抗体、补体、 细胞因子等免疫相关物质及微量物质 如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药 物浓度、微量元素、毒品等试验方法。
这些方法所具有的特异性好、敏感性 高、简单、快速和稳定的特点为临床 上确定诊断、分析病情、调整治疗方 案和判断预后等提供有效的实验依据， 使它们在临床的应用进一步普及和推 广。
固相膜免疫测定
利用微孔膜（主要是醋酸纤维素膜）作为固相进 行免疫检测的方法
根据标记物的不同分为两类： 酶标固相膜免疫测定：
酶免疫斑点法 酶免疫印迹法 金标法： 胶体金斑点渗滤试验 胶体金免疫层析试验
正向间接凝集反应 —TRUST试验
正向间接凝集反应 —明胶颗粒凝集试验
所用载体为人工合成的惰性明胶颗粒 梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA） 肺炎支原体抗体检测（MP-Ab）
正向间接凝集反应 —TPPA试验
正向间接凝集反应 —TPPA试验
正向间接凝集反应 —MP-Ab试验
正向间接凝集反应 —MP-Ab试验
酶联免疫吸附剂试验
酶联免疫吸附试验
双抗体夹心法 双抗原夹心法 间接法 竞争法 捕获法测 IgM 抗体
ELISA—双抗体夹心法
用特异性抗体进行包被和制备酶标抗 体，以检测相应的抗原。
乙肝标志物中HBsAg、 HBeAg的检测 常采用本法
ELISA—双抗体夹心法
ELISA—双抗体夹心法
将溶血素O 吸附在羧化的聚苯乙烯胶乳颗 粒上检测抗”O”。
将变性IgG包被于羧化的聚苯乙烯胶乳颗粒 上检测RF。
正向间接凝集反应 —RPR/TRUST试验
血浆反应素试验(RPR) 所用载体颗粒为活性炭颗粒
甲苯胺红不加热血清反应素试验 （TRUST） 所用载体颗粒为甲苯胺红颗粒
正向间接凝集反应 —RPR试验
抗人球蛋白抗体参与的间接血凝试验， 用于检测抗红细胞不完全抗体
分类： 直接Coombs试验 间接Coombs试验
直接Coombs试验
间接Coombs试验
凝集反应总结
一、直接凝集反应 血型鉴定 二、间接凝集反应
胶乳凝集试验 ASO/RF 1正向间接凝集反应 RPP/TRUST
明胶颗粒凝集 TPPA/MP 2反向间接凝集反应 三、抗人球蛋白试验 直接/间接Coombs试验
直接凝集反应
颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的抗 体在有适量电解质存在下，形成肉眼 可见的凝集小块。
常见的应用是血型的鉴定
血型鉴定示意图
间接凝集反应
将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大 小颗粒性载体的表面，然后与相应抗体 （或抗原）作用，在适宜的电解质存在的 条件下，出现特异性凝集的现象称间接凝 集反应（indirectagglutination）或被动 凝集反应（assiveagglutination）。
ELISA—竞争法
ELISA—竞争法
最常见的应用： 乙肝HBeAb、 HBcAb检测
ELISA—捕获法
（1）将抗人 IgM 抗体（抗人 IgM µ 链抗体）连接在固 相载体上，形成固相抗人 IgM。
（2）加入标本， IgM 抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其 他抗体。
（3）加入特异性抗原试剂，它只与固相上的特异性 IgM 结合，洗涤。
凝集反应(agglutination)
颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应的抗 体，或可溶性抗原(亦可用抗体)吸附于 与免疫无关的载体形成致敏颗粒与相 应的抗体(或抗原)，在有适量电解质存 在下，形成肉眼可见的凝集小块。
凝集反应的分类
直接凝集反应 间接凝集反应 抗人球蛋白试验（Coombs试验）
酶联免疫吸附试验 （ELISA）
① 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面， 并保持其免疫活性。
② 使抗原或抗体与酶连接成酶标抗原或ห้องสมุดไป่ตู้ 体，且既保留其免疫活性又保留酶的活性。
③ 标本中的抗原或抗体、酶标抗原或抗体 按一定的次序与固相载体表面的抗体或抗 原反应，并通过底物与酶的反应来反映标 本中的抗原或抗体的量。
正向间接凝集反应 —MP-Ab试验
正向间接凝集反应 —MP-Ab试验
检测肺炎支原体的总抗体（IgM, IgA IgG)
以滴度的方式报告检测结果（<1:80 1:80、1：160、1:320 ……)
反向间接凝集反应
用已知特异性抗体致敏载体以检测标 本中的相应抗原。
抗人球蛋白试验 （Coombs试验）
间接凝集反应
常用的载体微球有人O型血红细胞、绵羊或 家兔红细胞、聚苯乙烯乳胶、活性炭/甲苯 胺红、明胶颗粒等
间接凝集反应
正向间接凝集反应 反向间接凝集反应
正向间接凝集反应
用抗原致敏载体以检测标本中的相应 抗体
正向间接凝集反应 —胶乳凝集试验
所用载体颗粒为羧化的聚苯乙烯胶乳，是 一种直径约为0.8μm大小的圆形颗粒，带 有负电荷，可物理性吸附蛋白分子。