喉癌的比较基因组杂交研究

遗传学报ＡｃｔａＧｅｎｅｔｉｃａＳｉｎｉｃａ，Ｊｕｎｅ２００４，３１（６）：５３９—５４４

ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＧｅｎｏｍｉｃＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ

ｏｆＬａｒｙｎｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ

ＩＳＳＮ０３７９—４１７２

ＳＨＡＮＧＣｈａ０１，ＦＵＷｅｉ。Ｎｅｎ９１，ＸＵＺｈｅｎ—Ｍｉｎ９３，ＬＩＦｕ．Ｃａｉｌ，ＨＵＡＮＧＤａｉ．Ｆａｌ，２，ＳＵＮＫａｉ．Ｌａｉｌ－①（１．ＴｈｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０００１，Ｃｈｉｎａ；

２．ＴｈｅＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈｅｎｙａｎｇＭｉｌｉｔａｒｙＲｅｇｉｏｎ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１５，Ｃｈｉｎａ；

３，ＴｈｅＥ．Ⅳ．ｒＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，４６３ＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈｅｎｙａｎｇＡｉｒＦｏｒｃｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００４２，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｉｎｄｏｕｔｔｈｅｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｏｆｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｗｅａｎａｌｙｚｅｄ１８ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒ—ｃｉｎｏｍａｗｉｔｈｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｅａｃｈｏｎｅｈａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｏｆｖａｒｉａｎｃｅｓ，ｉｎｃｌｕｄｅｄｇａｉｎｓａｎｄｌｏｓｓｅｓｏｆｐａｒｔｉａｌａｎｄｗｈｏｌｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ．Ｅａｃｈｅａｓｅｈａｓ１２．９ａｂｎｏｒｍａｌｒｅｇｉｏｎｓａｖｅｒａｇｅｌｙ；ｌｏｓｓｅｓａｒｅｍｏｒｅｔｈａｎｇａｉｎｓ，ｅｑｕａｌｔｏ７．２ａｎｄ５．７ｐｅｒｃａｓｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍａｉｎｒｅｇｉｏｎｓａｒｅｇａｉｎｓｉｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ３ｑ（７８％），５ｐ（６１％），１１ｑ（５６％），１ｑ（５０％），８ｐ（４４％），８ｑ（３９％）ａｎｄ１５ｑ（３９％），ａｎｄｌｏｓｓｅｓｏｆ３ｐ（７０％），５ｑ（７８％），９ｐ（６７％），１３ｑ（５０％），１Ｐ（４４％）ａｎｄ１４ｑ（３９％）．Ｔｈｅｒｅａｒｅｍａｎｙｓｐｅｃｉｆｉｃｇａｉｎｓａｎｄｌｏｓｓｅｓｉｎｓｅｖｅｒａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒｋａｒｙｏｔｙｐｅｉｎ１ｐ１３・２１（８／１８），３ｐ２１—２３（１４／１８），５ｐ２１—２２（１４／１８），９ｐ１２一ｐｔｅｒ（１０／１８）ａｎｄ１３ｑ２１—３１（８／１８），ｗｈｉｌｅｔｈｅｄｅ—ｃｒｅａｓｅｉｎ１ｑｌＩ一２１（１１／１８），３ｑ１５－２１（１２／１８），８ｐ２２－２４（６／１８），１１ｑ１２—１３（８／１８），１５ｑ２１－２３（７／１８）和１８ｐ１１（８／１８）ａｒｅｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｖａｒｉｅｔｉｅｓ．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｔｈｅｒｅａｒｅｏｎｃｏｇｅｎｅ、ｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅａｎｄｏｔｈｅｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ｏｎｃｏｇｅｎｅ；ｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅ

喉癌的比较基因组杂交研究

尚超１，富伟能１，徐振明３，李福才１，黄带发１’２，

（１．中国医科大学医学遗传学教研室，沈阳１１０００１；２．沈阳军区总医院，沈阳１１００１５；３．沈阳市空军４６３医院耳鼻喉科，孙开来１，①沈阳１１００４２）

摘要：寻找与喉癌发生进展的相关基因，应用比较基因组杂交技术分析了１８例喉癌患者。结果显示，每例喉癌细胞染色体均有不同程度的变化，包括染色体全部或部分的扩增或丢失。平均每例有１２．９处异常区域，丢失多于扩增，分别为每例７．２处和５．７处。主要为３ｑ（７８％）、５ｐ（６ｌ％）、１ｌｑ（５６％）、１ｑ（５０％）、８ｐ（４４％）、８ｑ（３９％）和１５ｑ（３９％）的扩增；３ｐ（７０％）、５ｑ（７８％）、９ｐ（６７％）、１３ｑ（５０％）、１Ｐ（４４％）和１４ｑ（３９％）的丢失。有多条染色体区带上出现特异的扩增或丢失，特别是１ｐ１３－２１（８／１８）、３ｐ２１—２３（１４／１８）、５ｐ２１－２２（１４／１８）、９ｐ１２－ｐｔｅｒ（１０／１８）和１３ｑ２１．３１（８／１８）的拷贝数增加明显，而１ｑ１１—２１（１１／１８）、３ｑ１５—２１（１２／１８）、８ｐ２２－２４（６／１８）、１１ｑ１２．１３（８／１８）、１５ｑ２１．２３（７／１８）和１８ｐ１１（８／１８）区域的丢失为喉癌的特征性变化，说明这些区域中存在与喉癌发生发展密切相关的癌基因、抑癌基因或其他相关基因。

关键词：喉癌；比较基因组杂交；癌基因；抑癌基因

中图分类号：Ｒ７３９．６文献标识码：Ａ文章编号：０３７９４１７２（２００４）０６－０５３９－０６

收稿日期：２００３—１２—１６；修回日期：２００４—０３—２６

基金项目：国家自然科学基金（编号：３９７７０７９４）项目资助［Ｓｕｐｐ。ｒｔｅｄｂｙＣｈｉｎｅｓｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄ８ｔｉ。ｎ（Ｎｏ．３９７７０７９４）］

作者简介：尚超（１９７８一），男，辽宁沈阳人，硕士研究生，专业方向：肿瘤遗传学

①通讯作者。Ｅ－ｍａｉｌ：ｋｌｓｕｎｔ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｔｏｍ；Ｔｅｌ：０２４．２３２６５８４２

遗传学报ＡｃｔａＧｅｎｅｔｉｃａＳｉｎｉｃａＶ０１．３１Ｎｏ．６２００４

喉癌是上呼吸道常见的恶性肿瘤，为人体第６位高发肿瘤，占全身肿瘤的１％～８．４％。我国东北地区高发，且发病率呈逐年上升趋势，手术及术后放化疗虽有一定疗效，但术后复发率较高，且导致患者发声功能丧失，给患者造成极大痛苦¨。。与其他人类肿瘤相同，喉癌的发生和进展是一个包括多种遗传变化的多步骤过程，其中一条重要的途径就是癌基因的激活和抑癌基因的失活旧１。目前，应用先进的分子细胞遗传学技术寻找肿瘤相关的癌基因和抑癌基因并研究这些基因在肿瘤形成过程中的变化，是当前恶性肿瘤研究的重要领域，对揭示肿瘤发生发展机制具有重要的意义。

比较基因组杂交（ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＧｅｎｏｍｉｃＨｙｂｒｉｄ．ｉｚａｔｉｏｎ，ＣＧＨ）技术是Ｋａｌｌｉｏｎｉｍｉ等¨。于１９９２年在消减杂交和荧光原位杂交（ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕＨｙｂｒｉｄ．ｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）基础上建立起来的一种分子细胞遗传学技术，仅在一次实验中就可以在全部染色体区带上检测基因组间ＤＮＡ拷贝数变化并定位。本研究采用ＣＧＨ技术，分析了１８例喉癌的ＤＮＡ样本，所获结果为克隆喉癌发生发展相关基因提供了重要依据。

１材料和方法

１．１材料

１８例喉癌组织标本来自空军４６３医院全军耳鼻喉中心，病例诊断证实为喉鳞状细胞癌（ＬａｒｙｎｇｅａｌＳｑｕａｍｏｕｓＣｅｌｌＣａｒｃｉｎｏｍａ，ＬＳＣＣ），取材前患者均未接受放疗和化疗。患者的临床和病理资料见表１。

表１１８例喉癌样本的临床和病理资料

Ｔａｂｌｅ１Ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄａｔａｏｆ１８ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ

１女Ｗｏｍａｎ５５喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉｎ。ｏｍａ

Ｔ２ＮｏＭｏ

２女Ｗｏｍａｎ５４喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ。ｎｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉ‘ｎｏｍａＴ２Ｎｏ

Ｍｏ

３男Ｍａｎ６０喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ’ｎｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉ’ｎｏｍａＴ３Ｎｏ

Ｍｏ

４男Ｍａｎ５４喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃ‘ｉｎｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉ’ｎｏｍａ

Ｔ３ＮｏＭｏ

５女Ｗｏｍａｎ７８喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ。ｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ‘ｎｏｍａＴ４ＮｏＭｏ

６男Ｍａｎ４９喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ’ｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ’ｎｏｍ８Ｔ４ＮｏＭｏ

７男Ｍａｎ４６喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ‘ｎｏｍａ鳞癌ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｒｃｌ。ｎｏｍａ

Ｔ２ＮｏＭｎ

８男Ｍａｎ６９喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎ’ｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉ。ｎｏｍａ

Ｔ２ＮｏＭｏ

９男Ｍａｎ４４喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ‘ｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｒｃＩ‘ｎｏｍａＴ４ＮｌＭｏ

１０女Ｗｏｍａｎ５２喉癌ＬａｒｙｎｇｅａｌＣａｒＣｉ。ｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ‘ｎｏｍａＴ４ＮｌＭｏ

１１男Ｍａｎ７６喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ‘ｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ’ｎｏｍａＴ３ＮｏＭｏ

１２男Ｍａｎ５０喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｌ’ｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｌ℃ｌ‘ｎｏｍａＬＮｏＭｏ

１３男Ｍａｎ６６喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ’ｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ。ｎｏｍａＴ２ＮｏＭｏ

１４女Ｗｏｍａｎ４８喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｌ。ｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ’ｎｏｍａＴ３ＮｏＭｏ

１５男Ｍａｎ６２喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｒｃｌ’ｎｏｍａＴ２ＮｏＭｏ

１６男Ｍａｎ６１喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｒｃｉｎｏｍａＴＩＮｏＭｎ

１７男Ｍａｎ６５喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌

ＳｑｕａｍｏｕＢｃａｒｃｉｎｏｍａＴ４ＮＭｏ

１８男Ｍａｎ４４喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌

Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ‘ｎｏｍａＴ３ＮｏＭｌ

１．２方法

１．２．１染色体标本的制备

按常规方法制备染色体标本，自然干燥，保存。

１．２．２ＤＮＡ探针的制备

按常规酚／氯仿法提取肿瘤组织ＤＮＡ，ＤＮＡ探针用切Ｅｌ平移法标记。肿瘤组织用ＳｐｅｃｔｒｕｍＧｒｅｅｎ

ｄＵＴＰ（ＶＹＳＩＳ）标记，正常人ＤＮＡ用ＳｐｅｅｔｒｕｍＲｅｄ一２０。ＣｄＵＴＰ标记。通过调整反应时间和酶的用量，使探针片段长度集中于６００～２０００ｂｐ，以产生均匀一致、

强烈的杂交信号。标记后的探针过柱纯化。