喉癌的比较基因组杂交研究

遗传学报ＡｃｔａＧｅｎｅｔｉｃａＳｉｎｉｃａ，Ｊｕｎｅ２００４，３１（６）：５３９—５４４
ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＧｅｎｏｍｉｃＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆＬａｒｙｎｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ
ＩＳＳＮ０３７９—４１７２
ＳＨＡＮＧＣｈａ０１，ＦＵＷｅｉ。

Ｎｅｎ９１，ＸＵＺｈｅｎ—Ｍｉｎ９３，ＬＩＦｕ．Ｃａｉｌ，ＨＵＡＮＧＤａｉ．Ｆａｌ，２，ＳＵＮＫａｉ．Ｌａｉｌ－①（１．ＴｈｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１０００１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＴｈｅＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈｅｎｙａｎｇＭｉｌｉｔａｒｙＲｅｇｉｏｎ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１５，Ｃｈｉｎａ；
３，ＴｈｅＥ．Ⅳ．ｒＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，４６３ＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｈｅｎｙａｎｇＡｉｒＦｏｒｃｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００４２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｉｎｄｏｕｔｔｈｅｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｏｆｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｗｅａｎａｌｙｚｅｄ１８ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒ—ｃｉｎｏｍａｗｉｔｈｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｅａｃｈｏｎｅｈａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅｏｆｖａｒｉａｎｃｅｓ，ｉｎｃｌｕｄｅｄｇａｉｎｓａｎｄｌｏｓｓｅｓｏｆｐａｒｔｉａｌａｎｄｗｈｏｌｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ．Ｅａｃｈｅａｓｅｈａｓ１２．９ａｂｎｏｒｍａｌｒｅｇｉｏｎｓａｖｅｒａｇｅｌｙ；ｌｏｓｓｅｓａｒｅｍｏｒｅｔｈａｎｇａｉｎｓ，ｅｑｕａｌｔｏ７．２ａｎｄ５．７ｐｅｒｃａｓｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍａｉｎｒｅｇｉｏｎｓａｒｅｇａｉｎｓｉｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ３ｑ（７８％），５ｐ（６１％），１１ｑ（５６％），１ｑ（５０％），８ｐ（４４％），８ｑ（３９％）ａｎｄ１５ｑ（３９％），ａｎｄｌｏｓｓｅｓｏｆ３ｐ（７０％），５ｑ（７８％），９ｐ（６７％），１３ｑ（５０％），１Ｐ（４４％）ａｎｄ１４ｑ（３９％）．Ｔｈｅｒｅａｒｅｍａｎｙｓｐｅｃｉｆｉｃｇａｉｎｓａｎｄｌｏｓｓｅｓｉｎｓｅｖｅｒａｌｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒｋａｒｙｏｔｙｐｅｉｎ１ｐ１３・２１（８／１８），３ｐ２１—２３（１４／１８），５ｐ２１—２２（１４／１８），９ｐ１２一ｐｔｅｒ（１０／１８）ａｎｄ１３ｑ２１—３１（８／１８），ｗｈｉｌｅｔｈｅｄｅ—ｃｒｅａｓｅｉｎ１ｑｌＩ一２１（１１／１８），３ｑ１５－２１（１２／１８），８ｐ２２－２４（６／１８），１１ｑ１２—１３（８／１８），１５ｑ２１－２３（７／１８）和１８ｐ１１（８／１８）ａｒｅｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｖａｒｉｅｔｉｅｓ．Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｔｈｅｒｅａｒｅｏｎｃｏｇｅｎｅ、ｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅａｎｄｏｔｈｅｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ｏｎｃｏｇｅｎｅ；ｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅ
喉癌的比较基因组杂交研究
尚超１，富伟能１，徐振明３，李福才１，黄带发１’２，
（１．中国医科大学医学遗传学教研室，沈阳１１０００１；２．沈阳军区总医院，沈阳１１００１５；３．沈阳市空军４６３医院耳鼻喉科，孙开来１，①沈阳１１００４２）
摘要：寻找与喉癌发生进展的相关基因，应用比较基因组杂交技术分析了１８例喉癌患者。

结果显示，每例喉癌细胞染色体均有不同程度的变化，包括染色体全部或部分的扩增或丢失。

平均每例有１２．９处异常区域，丢失多于扩增，分别为每例７．２处和５．７处。

主要为３ｑ（７８％）、５ｐ（６ｌ％）、１ｌｑ（５６％）、１ｑ（５０％）、８ｐ（４４％）、８ｑ（３９％）和１５ｑ（３９％）的扩增；３ｐ（７０％）、５ｑ（７８％）、９ｐ（６７％）、１３ｑ（５０％）、１Ｐ（４４％）和１４ｑ（３９％）的丢失。

有多条染色体区带上出现特异的扩增或丢失，特别是１ｐ１３－２１（８／１８）、３ｐ２１—２３（１４／１８）、５ｐ２１－２２（１４／１８）、９ｐ１２－ｐｔｅｒ（１０／１８）和１３ｑ２１．３１（８／１８）的拷贝数增加明显，而１ｑ１１—２１（１１／１８）、３ｑ１５—２１（１２／１８）、８ｐ２２－２４（６／１８）、１１ｑ１２．１３（８／１８）、１５ｑ２１．２３（７／１８）和１８ｐ１１（８／１８）区域的丢失为喉癌的特征性变化，说明这些区域中存在与喉癌发生发展密切相关的癌基因、抑癌基因或其他相关基因。

关键词：喉癌；比较基因组杂交；癌基因；抑癌基因
中图分类号：Ｒ７３９．６文献标识码：Ａ文章编号：０３７９４１７２（２００４）０６－０５３９－０６
收稿日期：２００３—１２—１６；修回日期：２００４—０３—２６
基金项目：国家自然科学基金（编号：３９７７０７９４）项目资助［Ｓｕｐｐ。

ｒｔｅｄｂｙＣｈｉｎｅｓｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄ８ｔｉ。

ｎ（Ｎｏ．３９７７０７９４）］
作者简介：尚超（１９７８一），男，辽宁沈阳人，硕士研究生，专业方向：肿瘤遗传学
①通讯作者。

Ｅ－ｍａｉｌ：ｋｌｓｕｎｔ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｔｏｍ；Ｔｅｌ：０２４．２３２６５８４２
遗传学报ＡｃｔａＧｅｎｅｔｉｃａＳｉｎｉｃａＶ０１．３１Ｎｏ．６２００４
喉癌是上呼吸道常见的恶性肿瘤，为人体第６位高发肿瘤，占全身肿瘤的１％～８．４％。

我国东北地区高发，且发病率呈逐年上升趋势，手术及术后放化疗虽有一定疗效，但术后复发率较高，且导致患者发声功能丧失，给患者造成极大痛苦¨。

与其他人类肿瘤相同，喉癌的发生和进展是一个包括多种遗传变化的多步骤过程，其中一条重要的途径就是癌基因的激活和抑癌基因的失活旧１。

目前，应用先进的分子细胞遗传学技术寻找肿瘤相关的癌基因和抑癌基因并研究这些基因在肿瘤形成过程中的变化，是当前恶性肿瘤研究的重要领域，对揭示肿瘤发生发展机制具有重要的意义。

比较基因组杂交（ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＧｅｎｏｍｉｃＨｙｂｒｉｄ．ｉｚａｔｉｏｎ，ＣＧＨ）技术是Ｋａｌｌｉｏｎｉｍｉ等¨。

于１９９２年在消减杂交和荧光原位杂交（ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕＨｙｂｒｉｄ．ｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）基础上建立起来的一种分子细胞遗传学技术，仅在一次实验中就可以在全部染色体区带上检测基因组间ＤＮＡ拷贝数变化并定位。

本研究采用ＣＧＨ技术，分析了１８例喉癌的ＤＮＡ样本，所获结果为克隆喉癌发生发展相关基因提供了重要依据。

１材料和方法
１．１材料
１８例喉癌组织标本来自空军４６３医院全军耳鼻喉中心，病例诊断证实为喉鳞状细胞癌（ＬａｒｙｎｇｅａｌＳｑｕａｍｏｕｓＣｅｌｌＣａｒｃｉｎｏｍａ，ＬＳＣＣ），取材前患者均未接受放疗和化疗。

患者的临床和病理资料见表１。

表１１８例喉癌样本的临床和病理资料
Ｔａｂｌｅ１Ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄａｔａｏｆ１８ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ
１女Ｗｏｍａｎ５５喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉｎ。

ｏｍａ
Ｔ２ＮｏＭｏ
２女Ｗｏｍａｎ５４喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ。

ｎｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉ‘ｎｏｍａＴ２Ｎｏ
Ｍｏ
３男Ｍａｎ６０喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ’ｎｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉ’ｎｏｍａＴ３Ｎｏ
Ｍｏ
４男Ｍａｎ５４喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃ‘ｉｎｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉ’ｎｏｍａ
Ｔ３ＮｏＭｏ
５女Ｗｏｍａｎ７８喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ。

ｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ‘ｎｏｍａＴ４ＮｏＭｏ
６男Ｍａｎ４９喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ’ｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ’ｎｏｍ８Ｔ４ＮｏＭｏ
７男Ｍａｎ４６喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ‘ｎｏｍａ鳞癌ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｒｃｌ。

ｎｏｍａ
Ｔ２ＮｏＭｎ
８男Ｍａｎ６９喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎ’ｏｍａ鳞癌Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｉ。

ｎｏｍａ
Ｔ２ＮｏＭｏ
９男Ｍａｎ４４喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ‘ｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｒｃＩ‘ｎｏｍａＴ４ＮｌＭｏ
１０女Ｗｏｍａｎ５２喉癌ＬａｒｙｎｇｅａｌＣａｒＣｉ。

ｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ‘ｎｏｍａＴ４ＮｌＭｏ
１１男Ｍａｎ７６喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ‘ｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ’ｎｏｍａＴ３ＮｏＭｏ
１２男Ｍａｎ５０喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｌ’ｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｌ℃ｌ‘ｎｏｍａＬＮｏＭｏ
１３男Ｍａｎ６６喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉ’ｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ。

ｎｏｍａＴ２ＮｏＭｏ
１４女Ｗｏｍａｎ４８喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｌ。

ｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ’ｎｏｍａＴ３ＮｏＭｏ
１５男Ｍａｎ６２喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｒｃｌ’ｎｏｍａＴ２ＮｏＭｏ
１６男Ｍａｎ６１喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕ８ｃａｒｃｉｎｏｍａＴＩＮｏＭｎ
１７男Ｍａｎ６５喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌
ＳｑｕａｍｏｕＢｃａｒｃｉｎｏｍａＴ４ＮＭｏ
１８男Ｍａｎ４４喉癌Ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ鳞癌
Ｓｑｕａｍｏｕｓｃａｒｃｌ‘ｎｏｍａＴ３ＮｏＭｌ
１．２方法
１．２．１染色体标本的制备
按常规方法制备染色体标本，自然干燥，保存。

１．２．２ＤＮＡ探针的制备
按常规酚／氯仿法提取肿瘤组织ＤＮＡ，ＤＮＡ探针用切Ｅｌ平移法标记。

肿瘤组织用ＳｐｅｃｔｒｕｍＧｒｅｅｎ
ｄＵＴＰ（ＶＹＳＩＳ）标记，正常人ＤＮＡ用ＳｐｅｅｔｒｕｍＲｅｄ一２０。

ＣｄＵＴＰ标记。

通过调整反应时间和酶的用量，使探针片段长度集中于６００～２０００ｂｐ，以产生均匀一致、
强烈的杂交信号。

标记后的探针过柱纯化。

５４ｌ
１．２．３比较基因组杂交
１．２．３．１杂交混合液的制备
分别取２００ｎｇ不同标记的探针以及１０斗ｇ人Ｃｏｔ．１ＤＮＡ，混合后经乙醇二次沉淀，气干。

加入２ｐＬ去离子水，基本溶解后再加入８斗Ｌ杂交缓冲液［体系终浓度为５０％去离子甲酰胺、１０％（Ｗ／Ｖ）硫酸葡聚糖、２×ＳＳＣ，ｐＨ７．０］，７３℃变性５ｍｉｎ，３７℃孵育３０ｍｉｎ。

１．２．３．２染色体标本的处理
６０℃烤片２ｈ，于０．１Ｉ．ｔｇ／ＩｘＬＲＮａｓｅ中３７℃孵育１ｈ，２×ＳＳＣ摇洗，７０％、８５％、１００％乙醇梯度脱水，气干；于７３℃变性缓冲液［７０％去离子甲酰胺、２ｘＳＳＣ，ｐＨ７．０］中作用５ｍｉｎ，脱水同前，气干；在０．１Ｉｘｇ／ｌ山［。

蛋白酶Ｋ（溶于２０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ、２ｍｍｏｌ／ＬＣａＣＩ：，ｐＨ７．４）中３７℃孵育７ｍｉｎ，脱水同前，气干。

Ｉ．２．３．３杂交
将杂交混合液加于载玻片上的正常染色体区域，盖好盖玻片，置于湿盒中，３７。

Ｃ孵育４８～７２ｈ。

１．２．３．４洗脱、复染、封片
取下盖玻片，于７４℃的０．４ｘＳＳＣ／０．３％ＮＰ－４０中洗２ｒａｉｎ，２×ＳＳＣ／Ｏ．１％ＮＰ－４０中洗３０Ｓ。

避光气干。

用ＤＡＰＩ复染。

加含有抗荧光淬灭剂的５０％甘油封片。

１．２．４数字图像摄取和分析
应用装有冷ＣＣＤ照相机的荧光显微镜摄取图像，经ＱＣＧＨ（Ｌｅｉｃａ公司）软件分析得到每例喉癌的分析图。

红绿荧光比值相等处定为ｌ，阈值分别定为１．２（绿）和０．８（红），超过阈值处分别定义为扩增和丢失。

（有时端粒或着丝粒会干扰结果，出现超出闽值的现象，这时需要将它们从阳性结果中剔除。

）每例标本分析至少５个高质量的核型，并将结果综合得出该标本整套染色体拷贝数扩增和丢失的全貌。

２结果
根据所扩增的荧光染色体图像和软件分析所扩增的分析图见图１和图２。

用ＣＧＨ方法对１８例喉癌标本进行了分子细胞遗传学分析，结果显示每例喉癌细胞染色体均有不同程度的变化，包括染色体全部或部分的扩增或丢失，结果详见表２和图３。

平均每例有１２．９处异常区域，丢失多于扩增，分别为每例７．２处和５．７处。

其中扩增最多的是３ｑ，占７８％，此外扩增超过３０％的染色体有５ｐ（６１％）、１１ｑ（５６％）、１ｑ（５０％）、１８ｐ（４４％）、８ｑ（３９％）和１５ｑ（３９％）。

其中丢失最多的是５ｑ，占７８％，此外扩增超过３０％的染色体有３ｐ（７０％）、９ｐ（６７％）、１３ｑ（５０％）、１Ｐ（４４％）和１４ｑ（３９％）。

图２病例４的ＣＧＨ结果分析图
模式图右侧的绿色线条示染色体扩增区段，左侧的红色线条
示染色体丢失区段。

Ｆｉｇ．２Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ
ｐｒｏｆｉｌｅｏｆｃａｓｅ４
ＧｒｅｅｎｌｉｎｅｓＯｉｌｔｈｅ
ｒｉｇｈｔｓｉｄｅｏｆｋａｒｙｏｇｒａｍｓｈｏｗｇａｉｎｒｅｇｉｏｎｓ．
ｒｅｄｌｉｎｅｓ
ｏｎｔｈｅｌｅｆｔｓｉｄｅｏｆｋａｒｙｏｇｒａｍｓｈｏｗｌｏｓｓ
ｒｅｇｉｏｎｓ．
５４２
遗传学报ＡｃｔａＧｅｎｅｔｉｃａＳｉｎｉｃａ
Ｖ０１．３１Ｎｏ．６２００４
表２
１８例喉癌比较基因组杂交分析结果
Ｔａｂｌｅ
２
Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｌｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
ａｎａｌｙｓｉｓ
ｒｅｓｕｌｔｏｆ１８ｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ
例号
扩增区
丢失区
Ｃａｓｅ
Ｎｏ．
Ｇａｉｎ
Ｌｏｓｓ
１１ｑ，３ｑ，５ｐ，９ｑ２２－３３，ｌｌｑ，１２ｐ１２－１３，１５ｑ１５一ｑｔｅｒ，Ｉｇｐｉｐ，３ｐ，５ｑ，８ｐ１１－１２，９ｐ，１０ｑ２１－２３，１３Ｘｑ２１－２５
２２ｑ３２－ｑｔｅｒ，３ｑ，５ｐ，１ｉｑ２２－２４
３ｐ１３－２３，４ｐ＋４ｑｌｌ—１３，５ｑ，９ｐ，１ｌｐｌ４－ｐｔｅｒ，１４ｑ２１－３ｌ，２０３３ｑ１５－ｑｔｅｒ．５ｐ１３－１６．８ｐ＋８ｑ１１－１２，１５ｑ１５・ｑｔｅｒ
３ｐ，５Ｐ，１３ｑ１１－１２，２２ｑ１２一ｑｔｅｒ，Ｘ
４３ｑ．４ｐ１２－１３，５ｐ１２－１４，７ｐ，８ｑ２２－２４，１０ｑ２３－２５，１５ｑ，１８ｐ
１ｐｌｌ－３１，６ｑ１１－２２，８ｐ２ｌ—ｐｔｅｒ，９ｐ＋９ｑ１１－１３，１１Ｐ，１２ｐ＋１２ｑ１１—１４，１３，１４ｑ１２－ｑｔｅｒ，１８ｑ２２－ｑｔｅｒ，Ｙ
５
６７８９１０
１１１２１３１４
１６１７１８
１ｑ１１－２２．２ｑ３１－ｑｔｅｒ，７ｐ＋７ｑ１１，９ｑ１３，１１ｑ，１２ｑ２１一ｑｔｅｒ，１６ｐ１２－１３，１７ｑ１２・２２
１ｑ，６ｐ，８ｑ２２－２４
１ｑ１１－２１，３ｑ２１－ｑｔｅｒ，６ｐ１２，１０ｑ２４－２５，１１ｑ１２－１３，１５ｑ１４，２２ｑ１１１，３ｑ，４ｐ，８ｑ１３－ｑｔｅｒ，１１ｑ１２・１３，１２ｐ１３，１５ｑ２１－２３
１ｑ＋１ｐ３１一ｐｔｅｒ，２ｑ＋２ｐ１１－２５，３ｑ１５－２１，５ｐ，９ｑ１３－２２，１１ｑ，１８ｐ５ｐ，１７ｑ１２－２５
１ｑ＋１ｐ３２－３５，９ｑ１３－２２，１２ｑ２１－２２，１５ｑ１５－ｑｔｅｒ，１８ｐ２ｑ１１－２１，５ｐ，９ｑ１３－ｑｔｅｒ，１１ｑ２１，１５ｑ２１－２３，１７ｑ１２・１３１１ｑ，１６ｐ１３
１ｑ，２ｑ１３－２５，３ｑ１２－２６，５ｐ１２—１４，７ｑ１１，８ｑ１２一ｑｔｅｒ，１０ｑ２４－２５，１５ｑ１５－ｑｔｅｒ，１８ｐｌ１５Ｐ，８ｑ２１—２４，１１ｑ１２－１３
１ｑ，５ｐ１３－１４，１２ｑ１３，１５ｑ１５－ｑｔｅｒ，１８ｐ１ｑ，３ｑ１５－２２，５ｐ，７ｑ，１１ｑ，ｌｇｐｌｌ
２ｐ１５－２３，４ｑ，５ｑ，９ｐ１２－ｐｔｅｒ，１８ｑ，２０ｑ１１－１２
１ｑ，３Ｐ，９ｐ，１０ｐ１１－１２，１５ｑ１１・１３，１８ｐ，Ｘｐｌ２－２２５ｑ１３－２２，９ｐ，１３ｑ１４－３２，１４，１８ｐ１１，Ｙ
３ｐ，５ｐ，９ｑ１３・２１，１３ｑ２１－３１，１７ｐ，２０ｑ１２－１３，Ｘ７ｑ３２，９ｐ１３－ｔｅｒ。

１４ｑ１２－１４，１６ｑ２２－ｑｔｅｒ，１，Ｘｑｌ２－２１
１ｐ１１－２１，３ｐ，４ｑ，５ｑ，６ｑ１５—２４，８ｑ２３，９ｐ＋９ｑ３３・ｑｔｅｒ，１３ｐ，１５ｑ１３・１４，２２，Ｘｑ２３・２４
２ｐ１５－１６，３ｐ，５ｑ２１—２３，１０ｐ１３一ｐｔｅｒ，１８ｑ１２－ｑｔｅｒ，２１１ｐ１２－３１，３ｐ２１—２３，５ｑ，９ｐ，１１ｐ１２－１４，１３，１４ｑ１３３ｐ，５ｑ，１８ｑ，Ｘ
１ｐ１３－２１，３ｐ，５ｑ２１—２３，６ｑ２１－２４，１１ｑ１３・ｑｔｅｒ，１３ｑ２１－３４，１４ｑ１２・２１．Ｙ
１ｐ１３－３１，３ｐ，４ｑ，５ｑ，６ｑ１１－２２，９ｐ，１４ｑ１２－２１，１５ｑ１１－１４，１８ｑ１１・１２，２０，２ｌｐｌｌ。

Ｘ
１ｐ１１－２１，３ｐ，４ｑ，５ｑ，２２
１ｐ１２－２１，２ｑ２５－３２，５ｑ，８ｑ１３・２３，９ｐ，１３，Ｘｐ２１—２２３ｐ，５ｑ，９ｐ，１１ｑ２３，１５ｑ１３－１４，Ｘｑ２１－２４
ｍ…鳓９ｒ蓟！…１８…１８ｌＩ｜《《ｌ。

．
循＿㈣艚㈣…‘
《Ｉ首６
删吼８
１９
２
莺：｜｛
７
ｑｆ幌
９
晤
２ｌ
４
５
营
１２
艚””“
１８
崎
Ｙ
图３
１８例喉癌的ＣＧＨ分析结果
模式图右侧线条示染色体扩增区段，左侧线条示染色体丢失区段。

Ｆｉｇ．３
ＣＧＨ
ａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｏｆ１８
ｌａｒｙｎｇｅａｌ
ｃａｒｃｉｎｏｍａ
Ｖｅｒｔｉｃａｌ
ｌｉｎｅｓ
ｏｎ
ｔｈｅｆｉｇｈｔｓｉｄｅｏｆｋａｒｙｏｇｒａｍｓｈｏｗｇａｉｎｒｅｇｉｏｎｓ，ｖｅｒｔｉｃａｌｌｉｎｅｓ
ｏｎ
ｔｈｅｌｅｆｔｓｉｄｅ
ｏｆｋａｒｙｏｇｒａｍｓｈｏｗｌｏｓｓｒｅｇｉｏｎｓ．
３
讨论
在１８例喉癌的ＣＧＨ分析中，有多条染色体区
带上出现特异的扩增或丢失，特别是１ｐ１３－２１（８／
１８）、３ｐ２１—２３（１４／１８）、５ｐ２１—２２（１４／１８）、９ｐ１２一ｐｔｅｒ
（１０／１８）和１３ｑ２１—３１（８／１８），这几个区域在喉癌基因组ＤＮＡ中扩增明显，而１ｑ１１－２１（１１／１８）、３ｑ１５．２１
（１２／１８）、８ｐ２２—２４（６／１８）、１１ｑ１２—１３（８／１８）、１５ｑ２１．
２３（７／１８）和１８ｐ１１（８／１８）区域的丢失在喉癌基因组ＤＮＡ中出现较为频繁，可能为喉癌的特征性变化，说明这些区域中存在与喉癌发生发展密切相关的癌基因或抑癌基因。

本研究发现在上述扩增或丢失区域中存在大量与喉癌发生发展密切相关的癌基因、抑癌基因或其他相关基因。

新近克隆的抑癌基因剧Ⅳｒ位于３ｐ１４．２”。

，该基因在消化道和呼吸道肿瘤中均发现有异常ｐ’６１。

我室富伟能＂３应用ＲＴ—ＰＣＲ、测序及微卫星分析方法分析８０例喉癌标本和两个喉癌细胞
系，发现朋刀基因在两个细胞系和７０％的喉癌标
本中出现异常转录本，并同时存在该基因的杂合性丢失和微卫星不稳定，证明Ｆ日，ｒ基因参与喉癌的发生、演进，为重要的候选抑癌基因之一。

ｃ．ｍｙｃ基
旧旧烈
ＳＨＡＮＧＣｈａｏｅｔａ１．：ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＧｅｎｏｍｉｃＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＬａｒｙｎｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ５４３
因定位于８ｑ２３．２４，郭睿等旧１利用组织芯片技术，采取链霉亲合素一生物素化过氧化酶复合物（ＳＡＢＣ）法对５７４例喉癌组织及３９例正常喉组织中ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的表达进行测定。

其中ｃ・ｍｙｃ在喉癌复发组的表达明显增强，与未复发组的表达差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）。

定位于１１ｑ１３的ｃｙｃｌｉｎＤ１基因与喉癌的相关性亦在孙余才ｐ１应用免疫组化方法对４１例喉癌组织的研究中得到确证。

这些结果与以往的相关研究相似，如１ｑ、３ｑ、５ｐ和１１ｑ的扩增，３ｐ、５ｑ、９ｐ和１３ｑ的丢失¨０’“。

本研究还发现大量的喉癌染色体异常涉及整条染色体臂的扩增和丢失，如３ｐ（１１／１８）、３ｑ（９／１８）、５ｑ（１２／１８）、５ｐ（１２／１８）、５ｐ（７／１８）、９ｐ（９／１８）、１１ｑ（５／１８）、１８ｐ（６／１８）等；推测在喉癌的发生中存在高频率的着丝粒断裂，形成等臂染色体（ｉｓｏｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ），并在随后的有丝分裂中不均衡地分配给子代细胞，才造成如此众多的等臂扩增和丢失。

这与ＨｅｒｍｓｅｎＭ等¨叫应用ＣＧＨ分析４２例晚期喉咽癌的结果相符。

ＪｉｎＹ等¨２‘发现在头颈部鳞状细胞癌中８号染色体着丝粒的断裂频率较高，导致等臂染色体ｉ（８ｑ）的形成和子代细胞整臂扩增或丢失。

我室李福才等¨纠应用常规和高分辨Ｇ显带方法对喉鳞状细胞癌Ｈｅｐ－２细胞系进行核型分析，发现涉及易位、缺失和等臂染色体的结构缺失。

整臂染色体的丢失和等臂染色体的形成在其他肿瘤中（如肝癌和乳腺癌等）也得到证实¨４““，说明喉癌的发生演进过程与其他肿瘤可能有共同的规律，可以在今后的研究中相互借鉴，相互促进。

在候选的异常染色体区域中，定位着一些重要的肿瘤相关基因，它们与喉癌的相关研究尚未见报道。

结合这些基因在其他肿瘤中的研究成果，验证其在喉癌发生发展中的作用是一条便捷有效的途径。

ＤＮＡ错配修复基因（ｈＭＬＨｌ）定位于３ｐ２１．２３，其丢失所致的功能丧失可导致ＤＮＡ链特异性错配修复功能的缺陷，造成频发的复制错误，进而在肿瘤形成中发挥作用。

这一观点在遗传性非息肉性大肠癌（ＨＮＰＣＣ）中得到证实，其中ｈＭＬＨｌ的突变占３３％¨“。

ＳａｋａｋｕｒａＣ等¨驯应用ＣＧＨ对５８例原发性胃癌进行分析，亦显示３ｐ２１—２３区段有２２％的丢失率。

人类端粒酶ＲＮＡ基因（ｈＴＲ）定位在３ｑ２６．３，在９７％的肿瘤中出现拷贝数增加¨引。

ＮｏｗａｋＪ等¨叫应用ＲＴ—ＰＣＲ方法发现ｈＴＲ在胃癌及结肠癌中有明显上调，在肿瘤细胞的永生化和克隆演进中发挥作用，可作为较好的肿瘤标志物应用于肿瘤的临床诊断和基因治疗。

此外，本研究还发现一些喉癌染色体的异常区域尚未有明确的肿瘤相关基因定位于其中，如１ｐ１３—２１、１ｑ１１—２１和５ｐ２１—２２等，这对今后研究是重要的。

思考肿瘤发生发展的可能途径，结合其他分子细胞遗传学技术，在这些候选区域中，寻找新的喉癌发生进展的相关基因。

上述基因是否参与了喉癌的发生和进展？或者在这些候选区域中是否还存在其他与喉癌发生进展有关的癌基因和抑癌基因？还有待于进一步研究。

本研究所选取的标本多为晚期患者，无法进行不同分期之间的对比，也就无法了解喉癌演进过程中染色体不平衡的变化。

但ＨｅｒｍｓｅｎＭ等＂１经统计学分析，喉癌标本的平均扩增、丢失数和染色体特异区段的异常等信息在喉癌不同分期和分化程度上无明显差异。

肿瘤的发生是复杂多阶段多因素过程，其中癌基因的激活和抑癌基因的失活占有重要地位，因此得到有关肿瘤遗传异质性的准确资料显得特别重要。

国外的ＣＧＨ相关报道大都针对头颈部肿瘤，针对喉癌的报道罕见。

本研究在国内首次应用ＣＧＨ等方法对１８例喉癌进行了分析，发现大量染色体失衡区域，我们推测这些区域内可能含有与喉癌发生发展相关癌基因、抑癌基因或其他相关基因，对这些区域进一步研究并于其中克隆这些相关基因十分重要，这将为喉癌的病因发病机理提供一定的实验依据，加速了喉癌相关研究的进展。

参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）：
ＦＥＩ
Ｓｈｅｎｇ－Ｚｈｏｎｇ．Ｅｐｉｄｅｍｉｃｆｅａｔｕｒｅｏｆｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｉｎ：Ｏｎｃｏｌｏｇｙｏｆｈｅａｄａｎｄｎｅｃｋ．１ｓｔｅｄｉｔｉｏｎ．Ｔｉａｎｊｉｎ：ＴｉａｎｊｉｎＳｃｉｅｎｃｅ
ａｎｄ
ＴｅｅｈｎｏｌｏｎｙＰｒｅｓｓ，１９９３，６５９—６６０．
费声重．喉癌流行特征．见：头颈部肿瘤学．第一版．天津：天
津科技出版社，１９９３，６５９—６６０．
ＧｕａｎＸＹ，ＸｕＪ，ＡｎｚｉｃｋＳ
Ｌ，ＺｈａｎｇＨ，ＴｒｅｎｔＪＭ．ＭｅｈｚｅｒＰＳ．Ｈｙｂｒｉｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎ
ｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｆｒｏｍｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｅｄＤＮＡ：ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｓｗｉｔｈｉｎａｎａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｇｉｏｎａｔ２０ｑｌ１．
ｑ１３．２ｉｎｂｒｅａｓｔＣａｌｌｃｅｒ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，１９９６，５６（１５）：３４４６。

３４５０．
ＫａｌｌｉｏｎｉｅｍｉＡ，ＫａｌｌｉｏｎｉｅｍｉＯＰ，Ｓｕｄａｒ
Ｄ，ＲｕｔｏｖｉｔｚＤ．ＧｒａｙＪＷ．
ＷａｌｄｍａｎＦ，Ｐｉｎｋｅｌ
Ｄ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｆｏｒｍｏ．１ｅｃｕｌａｒｅｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｏｌｉｄｔｕｍｏｒｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２，２５８
（５０８３）：８１８—８２１．
ＯｈｔａＭ，ＩｎｏｕｅＨ，ＣｏｔｔｉｃｅｌｌｉＭ
Ｇ，ＫａｓｔｕｒｙＫ，ＢａｆｆａＲ．ＰａｌａｚｚｏＪ．
５４４遗传学报ＡｃｔａＧｅｎｅｔｉｃｓＳｉｎｉｃａＶ０１．３１Ｎｏ．６２００４
［５］［６］［７］［８］［９］［１０］［１２］
ＳｉｐｒａｓｈｖｉｌｉＺ，ＭｏｒｉＭ．ＭｃＣｕｅＰ，ＤｒｕｅｋＴ．ＴｈｅＦＨｌＴｇｅｎｅ，ｓｐａｎ－
ｎｉｎｇ
ｔｈｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ３ｐ１４．２ｆｒａｇｉｌｅｓｉｔｅａｎｄｒｅｎａｌｃａｒｃｉｎｏｍａａｓ。

ｓｏｃｉａｔｅｄｔ（３：８）ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ，ｉｓａｂｎｏｒｍａｌｉｎｄｉｇｅｓｔｉｖｅｔｒａｃｔｃａｎｅ—
ｅｒ８．Ｃｅｌｌ。

１９９６，８４（４）：５８７—５９７．
ＭｅｎｉｎＣ，ＳａｎｔａｃａｔｔｅｒｉｎａＭ，ＺａｍｂｏｎＡ，ＭｏｎｔａｇｎａＭ，ＰａｒｅｎｔｉＡ，
Ｒｕｏｌ
Ａ，Ｄ’Ａｎｄｒｅａ
Ｅ．Ａｎｏｍａｌｏｕｓ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ
ａｎｄａｌｌｅｌｉｃｄｅｌｅｔｉｏｎｓ
ｏｆｔｈｅＦＨｌＴｇｅｎｅｉｎｈｕｍａｎｅｓｏｐｈａｇｅａｌｃａｎｃｅｒ．ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅｔＣｙ－
ｔｏｇｅｎｅｔ．２０００。

１１９：５６～６１．
ＡｎｄｒｉａｎｉＦ，Ｃｏｎｔｅ
Ｄ，ＭａｓｔｒａｎｇｅｌｏＴ，ＬｅｏｎＭ，ＲａｔｃｌｉｆｆｅＣ，ＲｏｚＬ，
ＰｅｌｏｓｉＧ，ＧｏｌｄｓｔｒａｗＰ，ＳｏｚｚｉＧ，ＰａｓｔｏｒｉｎｏＵ．Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇｌｕｎｇｃａｎｅ—
ｅｒｉｎｐｌａｓｍａｗｉｔｈｔｈｅｕｓｅｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｇｅｎｅｔｉｃｍａｒｋｅｒｓ．／ｎｔＪＣａｎｃ—
ｅｒ，２００４，１０８（１）：９１—９６．
ＦＵＷｅｉ—Ｎｅｎｇ，ＷＵＤｏｎｇ－Ｎｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＸｕｅ，ＪＩＮＣｈｕｎ—Ｙｕａｎ，
ＣＵＩＹｏｎｇ—Ｚｈｉ。

ＸＵＺｈｅｎ—Ｍｉｎｇ．ＳＵＮＫａｉ—Ｌａｉ．ＦＨＩＴｇｅｎｅｉｓａｂ—
ｎｏｒｍａｌｉｎ
ｌａｒｙｎｇｅａｌ
ｃａｒｃｉｎｏｍａ．ＣｈｉｎＪＯｎｅｏｌ，１９９９，２１（６）：
４３６—４３８．
富伟能，吴东宁，张学，金春元，崔勇志，徐振明，孙开来．
Ｆ肌ｒ基因与喉癌相关性的研究．中华肿瘤杂志，１９９９，２１
（６）：４３６—４３８．
ＧＵＯＲｅｉ，ＨＵＡＮＧＤｅ—Ｌｉａｎｇ，ＹＡＮＧＷｅｉ－Ｙａｎ，ＨＡＮＤｏｎｇ－Ｙｉ．
Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
ｏｆ
ｐ５３．ｃ—ｍｙｃ
ａｎｄｎｍ２３ｐｒｏｔｅｉｎ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｉｎｒｅｃｕｒ—
ｒｅｎｔｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ．ＬｉｎＣｈｕａｎｇＥｒＢｉｒａｎＨｏｕＫｅＺａＺｈｉ，
２００３，１７（３）：１６１～１６３．
郭睿，黄德亮，杨伟炎，韩东一．ｐ５３，ｃ・ｍｙｃ，ｎｍ２３癌基因蛋
白在喉复发癌的表达及其意义．临床耳鼻咽喉科杂志，２００３，
１７（３）：１６１—１６３．
ＳＵＮＹｕ－Ｃａｉ，ＨＵＧｕｏ－Ｈｕａ，ＺＨＵＪｉａｎｇ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ
ｃｙｃｌｉｎ
Ｄ１
ｉｎＬａｒｙｎｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ．ＴｈｅＰｒａｃｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｎｃｅｒ，２００３，
１８（１）：６２～６４．
孙余才，胡国华，朱江．ＣｙｃｌｉｎＤ１在喉癌组织中的表达研
究．实用癌症杂志，２００３，１８（１）：６２～６４．
ＨｅｒｍｓｅｎＭ，ＧｕｅｒｖｏｓＭＡ，ＭｅｉｊｅｒＧ，ＢａｓｋＪ，ｖａｎＤｉｅｓｔＰ，Ｍａｒｃｏｓ
Ｃ
Ａ，Ｓａｍｐｅｄｒｏ
Ａ．Ｎｅｗｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ
ｒｅｇｉｏｎｓｗｉｔｈｈｉｇｈ－ｌｅｖｅｌａｍ—
ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｉｎｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｓｏｆｔｈｅｌａｒｙｎｘａｎｄｐｈａｒ－
ｙｎｘ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ
ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００１，１９４：１７７—１８２．
ＫｕｊａｗｓｋｉＭ，ＡａｈｏＹ，Ｊａｓｋｕｌａ—ＳｚｔｕｌＲ，ＳｚｙｆｔｅｒＷ，ＳｚｍｅｊａＺ，Ｓｚｙ－
ｆｔｅｒＫ，ＫｎｕｕｔｉｌａＳ．ＤＮＡ
ｃｏｐｙ
ｎｕｍｂｅｒｌｏｓｓｅｓ
ａｒｅｍｏｒｅｆｒｅｑｕｅｎｔｉｎ
ｐｒｉｍａｒｙｌａｒｙｎｘｔｕｍｏｒｓｗｉｔｈｌｙｍｐｈｎｏｄｅｍｅｔａｓｔａｓｅｓｔｈａｎｉｎｔｕｍｏｒｓ
ｗｉｔｈｏｕｔｍｅｔａｓｔａｓｅｓ．ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅｔＣｙｔｏｇｅｒｕｅｔ，１９９９，１１４（１）：３１—
３４．
ＪｉｎＹ，ＪｉｎＣ，ＷｅｎｎｅｒｂｅｒｇＪ，ＨｏｇｌｕｎｄＭ，ＭｅｒｔｅｎｓＦ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃ
ａｎｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｈｒｏｍｏ．
ｓｏｍｅ８ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓｉｎｈｅａｄａｎｄｎｅｃｋｓｑｕａｍｏｕｓｃｅｌｌｃａｒｅｉｎｏ—
ｍａｓ．ＣａｎｃｅｒＣｅｎｅｔＣｙｔｏｇｅａｅｔ。

２００１，１３０（２）：１１１—１１７．
［１３］ＬＩＦｕ－Ｃａｉ，ＦＵＷｅｉ－Ｎｅｎｇ，ＫＡＮＧＮｉｎｇ，ＳＵＮＫａｉ－Ｌａｉ．Ｒｏｕｔｉｎｅａｎｄ
Ｈｉｇｈ—ＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅｉｎａＣｅｌｌＬｉｎｅｏｆＬａｒｙｎ・
ｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ．Ｊ
ＣｈｉｎＭｅｄＵｎｉｖ，２０００，２９（３），１６７—１６９．
李福才，富伟能，康宁，孙开来．喉鳞状细胞癌Ｈｅｐ－２细胞
系常规及高分辨染色体分析．中国医科大学学报，２０００，２９
（３）：１６７—１６９．
［１４］ＹａｎｇＪ，ＱｉｎＬＸ，ＹｅＳＬ，ＬｉｕＹＫ，ＬｉＹ，ＧａｏＤＭ，ＣｈｅｎＪ，ＴａｎｇＺ
Ｙ．Ｔｈｅａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓｏｆｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ８ｉｎｔｗｏｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒ－
ｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｃｌｏｎｅｓｗｉｔｈｔｈｅｓａｍｅｇｅｎｅｔｉｃｂａｃｋｇｒｏｕｎｄａｎｄｄｉｆｆｅｒ－
ｅｎｔｍｅｔａｓｔａｔｉｃｐｏｔｅｎｔｉａｌ．ＪＣａｎｃｅｒＲｅｓＣｌｉｎＯｎｃｏｌ，２００３，１２９（５）：
３０３—３０８．
［１５］ＴｓａｒｏｕｈａＨ，ＰａｎｄｉｓＮ，ＢａｒｄｉＧ，ＴｅｉｘｅｉｒａＭＲ，ＡｎｄｅｒｓｅｎＪＡ，
Ｈｅｉｍ
Ｓ．Ｋａｒｙｏｔｙｐｉｃ
ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｉｎｂｒｅａｓｔｃａｒｃｉｎｏｍａｓｗｉｔｈｉ（１）
（ｑｌＯ）ａｎｄｄｅｒ（１；１６）（ｑｌＯ；ｐ１０）ａｓｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ
ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ．ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅｔＣｙｔｏｇｅｎｅｔ，１９９９，１１３（２）：１５６—１６１．
［１６］ＡａｈｏＹ，ＥｒｉｋｓｓｏｎＬ，ＳｅｒｏｇａｒｄＳ，Ｌａｒｓｓｏｎ０，ＫｎｕｕｔｉｌａＳ．Ｃｏｎｃｏｍｉ－
ｔａｎｔｌｏｓｓｏｆｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ３ａｎｄｗｈｏｌｅａｒｍｌｏｓｓｅｓａｎｄｇａｉｎｓｏｆ
ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅＩ，６，ｏｒ８ｉｎｍｅｔａｓｔａｓｉｚｉｎｇｐｒｉｍａｒｙｕｖｅａｌｍｅｌａｎｏｍａ．
ＩｎｖｅｓｔＯｐｈｔｈａｌｍｏｌ‰Ｓｃｉ，２００１，４２（２）：３１３—３１７．
［１７］ＬｉｕＢ，ＰａｒｓｏｎｓＲ，ＰａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓＮ，ＮｉｅｏｌａｉｄｅｓＮＣ，ＬｙｎｃｈＨＴ，
ＷａｔｓｏｎＰ，ＪａｓｓＪＲ，ＤｕｎｌｏｐＭ，ＷｙｌｌｉｅＡ，ＰｅｈｏｍａｋｉＰ，ｄｅｌａＣｈａ－
ｐｅｌｌｅＡ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ
ＳＲ，ＶｏｇｅｌｓｔｅｉｎＢ，ＫｉｎｚｌｅｒＫＷ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆ
ｍｉｓｍａｔｃｈｒｅｐａｉｒｇｅｎｅｓｉｎｈｅｒｅｄｉｔａｒｙｎｏｎ・ｐｏｌｙｐｏｓｉｓｃｏｌｏｒｅｅｔａｌ
ｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓ．ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，１９９６，２：１６９—１７３．
［１８］Ｓａｋａｋｕｒａｃ，ＭｏｒｉＴ，ＳａｋａｂｅＴ，ＡｒｉｙａｍａＹ，ＳｈｉｎｏｍｉｙａＴ，ＤａｔｅＫ，
ＨａｇｉｗａｒａＡ，ＹａｍａｇｕｃｈｉＴ，ＴａｋａｂａｓｈｉＴ，ＮａｋａｍｕｒａＹ，ＡｂｅＴ，Ｉｎ－
ａｚａｗａＪ．Ｇａｉｎｓ，ｌｏｓｓｅｓａｎｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｇｅｎｅｔｉｃｍａｔｅｒｉａｌｓｉｎ
ｐｒｉｍａｒｙｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄ—
ｉｚａｔｉｏｎ．ＧｅｎｅｓＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓＣａｎｃｅｒ，１９９９，２４（４）：２９９—３０５．
［１９］ＳｏｄｅｒＡＩ，ＨｏａｒｅＳＦ，ＭｕｉｒＳ，ＧｏｉｎｇＪＪ，ＰａｒｋｉｎｓｏｎＥＫ，ＫｅｉｔｈＷ
Ｎ．Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｄｏｓａｇｅａｎｄｉｎｓｉｔｕｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅ
ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅＲＮＡ
ｇｅｎｅ
ｉｎｈｕｍａｎ
ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９７，１４：
１０１３—１０２１．
［２０］ＮｏｗａｋＪ，ＪａｎｕｓｚｋｉｅｗｉｃｚＤ，ＬｅｗａｎｄｏｗｓｋｉＫ，Ｎｏｗｉｃｋａ．Ｋｕｊａｗｓｋａ
Ｋ，ＰｅｍａｋＭ，ＲｅｍｂｏｗｓｋａＪ，ＮｏｗａｋＴ，ＷｙｓｏｃｋｉＪ．Ａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｉｎ
ｎｏｒｍａｌａｎｄ
ｍａｌｉｇｎａｎｔ
ｃｅｌｌｓｉｎ
ｇａｓｔｒｉｃ
ａｎｄｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒ
ｐａｔｉｅｎｔｓ．ＥｕｒＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＨｅｐａｔｏｌ，
２００３，１５（１）：７５—８０．
（责任编辑：陈晓芳）。