药理学实验方法学(讲稿)PPT课件
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标准品浓度 通俗地讲，回收率就是样本的测定值与其实际值（真值）的比较， 也就是测定值与其实际值的接近程度。 每个添加浓度做3～5个平行样，一般做3～5个浓度。
一般要求回收率范围应在70%～110%。
15
3. 精密度——方法的稳定性 表示用某种方法测定同一物质样品所得的测定值的彼此接近
程度，用 RSD 表示，即变异系数（CV）。
7
(2)原子吸收光谱分析原理
原子吸收光谱分析的波长区域在紫外区。其原理
是将光源辐射出的待测元素的特征光谱，通过样品的蒸气时， 就会被待测元素的基态原子吸收，由发射光波被减弱的程度， 进而求得样品中待测元素的含量，它符合郎珀-比尔定律：
A=－lg I/I０= －lg T = kCL 式中I为透射光强度，I0为发射光强度，T为透射比，L为 光通过原子化器的光程。由于L是不变值，所以A=KC。
陕西省“金农”工 程
药理学实验方法学
2009.12
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前言
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2
参考资料：
(1)中药药理实验方法学 (2)药理学实验方法 (3)定量药理学 (4)中国药典 (5)中国兽药典 (6)兽药质量标准 (7)中国兽药信息网 (8)兽药试验技术规范汇编(农业部兽药评审委员会办公室) (9)生物统计学
18
第二章 毒理学试验
19
（一）急性毒性试验——LD50的测定
概念：急性毒性(acute toxicity)是指动物一次或24 h内多次接触 外源性学物质，在短期内发生的毒性效应。
6
核外电子从基态跃迁至第一激发态所吸收的谱线 称为共振线吸收，简称共振线。而电子从第一激发态 返回至基态所发射的谱线称为第一共振发射线。由于 基态与第一激发态之间的能级最小，电子跃迁机率最 大，故共振线最易产生。对多数元素来讲，它是所有 谱线中最灵敏的，在原子吸收光谱分析中，通常以共 振线为吸收线。
故在定量分析时，将标准品配成不同浓度进行 测定，找出它的线性范围，制作标准曲线。
13
测定时： (1)查找法：在制作标准曲线上直接查照。该方法比较直
观，但 比较粗糙。 (2)回归方程，用方程进行计算。 C=a＋bA 式中，C为浓度，a为截距，b斜率， A为吸光度。
14
2.回收率——方法的准确度
考察样品基质对测定的干扰情况。 1.0g~0.8g 80% 0.8g~1.0g 125% 方法：添量法 以血清样本为例： 回收率＝(血清＋标准品)测定值－血清测定值）×100%
9
这个过程也符合郎珀-比尔(Lambert-Beer)定律： A = KCL
浓度越大，吸收强度多，透过的光也就越少，光电池受光就 弱，产生的电流也就越弱，吸光度就越大。
72系列：可见光 75系列：紫外光 根据药物的性质，它在什么波长下有最大吸收，就选什么仪器。
10
3.色谱分析法
色谱分析法是用于分离、分析多组分混合物质的一种极为有效的物 理及物理化学分析方法。它是利用混合物中各组分在两相间分配系数的差异进 行分离的。当混合物在两相间作相对移动时，各组分在两相间进行多次分配， 从而达到分离。
3
第一章 药物含量测定
4
(一) 测定方法的建立
根据不同的药物，建立不同的测定方法。
1.原子吸收法
(1)原子吸收法光谱的产生 任何元素的原子都由原子核和核外电子组成，核外电子有不同的能
级，因此，一个原子核可以有不同的能级。能量最低的能级态，称为基 态能级(E0=0)，其余的能级称为激发态能级，而能量最低的激发态称为 第一激发态。
RSDSD10% 0 X
将标准品配成不同的系列浓度，不同时间测定，结果之间有差 异，从而求出日内和日间精密度。
16
重复性——短期内相同的实验条件下(实验室、操作者、 仪器型号和试剂批号)对同一样品测定结果间的精密度。
重复性可分为批内精密度(within-run precision)和批 间精密度
(between-run precision)：日内精密度和日间精密度。 重现性——重现性指不同实验条件下(不同实验室、不
正常情况下，原子处于基态，核外电子在各自能量最低的轨道上运动。
5
当原子吸收一定的能量时，该原子就会吸收一定 特征波长的光，外层电子由基态跃迁到相应的激发 态，产生原子吸收光谱。但激发态的电子是不稳定 的，大约经过10～8 s以后，激发态的电子将返回基 发态或其他较低能级，并将电子跃迁时所吸收的能 量以光的形式释放出去，而产生原子发射光谱。
8
2.比色分析法
用比较溶液的颜色深度来确定被测定物质含量的方法， 称为比色分析法。
光通过有色溶液时，由于溶液中有色物质吸收了一 部分光能，透过光的强度就要减弱。溶液的浓度越高，液 层越厚，对光的吸收就越多，透过的光也就越弱。
如果把浓度为C的有色溶液置入厚度为L的容器中， 一定波长的光通过时，由于溶液吸收了一部分光，透过光 的强度就会减弱。
11
色谱分析法有两种： (1)按固定相形态分：柱色谱法、薄层色谱法、
纸色谱法。 (2)按流动相形态分：气相色谱法、液相色谱
法。 具体方法可参阅“仪器分析”的有关教材。
12
（二）方法的方法的准确性和稳定性
1.标准曲线的建立 在比色法Biblioteka Baidu，吸光度与溶液浓度之间有线性关
系，不是说在任何浓度下都呈线性，它只有在一定浓 度范围内有线性关系。
同操作者、不同仪器型号和试剂批号)使用某种分析方法对 同一样品各个独立测定值间的精密度(实验室协同研究)。
17
对精密度的要求：与样品含量有关 日内精密度：
10g/mL：1 h、5 h、10 h、24的平均值、RSD。 12g/mL：1 h、5 h、10 h、24的平均值、 RSD 。 14g/ mL：1 h、5h、10h、24的平均值、 RSD 。 16g/mL：1h、5h、10h、24h的平均值、 RSD 。 日间精密度： 2g/mL：1d、3d、5d、7d的平均值、 RSD 。 14g mL：1d、3d、5d、7d的平均值、 RSD 。 16g/mL：1d、3d、5d、7d的平均值、 RSD 。 一般应控制在15%以内为宜，最高不超过20%。
一般要求回收率范围应在70%～110%。
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3. 精密度——方法的稳定性 表示用某种方法测定同一物质样品所得的测定值的彼此接近
程度，用 RSD 表示，即变异系数（CV）。
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(2)原子吸收光谱分析原理
原子吸收光谱分析的波长区域在紫外区。其原理
是将光源辐射出的待测元素的特征光谱，通过样品的蒸气时， 就会被待测元素的基态原子吸收，由发射光波被减弱的程度， 进而求得样品中待测元素的含量，它符合郎珀-比尔定律：
A=－lg I/I０= －lg T = kCL 式中I为透射光强度，I0为发射光强度，T为透射比，L为 光通过原子化器的光程。由于L是不变值，所以A=KC。
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第二章 毒理学试验
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（一）急性毒性试验——LD50的测定
概念：急性毒性(acute toxicity)是指动物一次或24 h内多次接触 外源性学物质，在短期内发生的毒性效应。
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核外电子从基态跃迁至第一激发态所吸收的谱线 称为共振线吸收，简称共振线。而电子从第一激发态 返回至基态所发射的谱线称为第一共振发射线。由于 基态与第一激发态之间的能级最小，电子跃迁机率最 大，故共振线最易产生。对多数元素来讲，它是所有 谱线中最灵敏的，在原子吸收光谱分析中，通常以共 振线为吸收线。
故在定量分析时，将标准品配成不同浓度进行 测定，找出它的线性范围，制作标准曲线。
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测定时： (1)查找法：在制作标准曲线上直接查照。该方法比较直
观，但 比较粗糙。 (2)回归方程，用方程进行计算。 C=a＋bA 式中，C为浓度，a为截距，b斜率， A为吸光度。
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2.回收率——方法的准确度
考察样品基质对测定的干扰情况。 1.0g~0.8g 80% 0.8g~1.0g 125% 方法：添量法 以血清样本为例： 回收率＝(血清＋标准品)测定值－血清测定值）×100%
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这个过程也符合郎珀-比尔(Lambert-Beer)定律： A = KCL
浓度越大，吸收强度多，透过的光也就越少，光电池受光就 弱，产生的电流也就越弱，吸光度就越大。
72系列：可见光 75系列：紫外光 根据药物的性质，它在什么波长下有最大吸收，就选什么仪器。
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3.色谱分析法
色谱分析法是用于分离、分析多组分混合物质的一种极为有效的物 理及物理化学分析方法。它是利用混合物中各组分在两相间分配系数的差异进 行分离的。当混合物在两相间作相对移动时，各组分在两相间进行多次分配， 从而达到分离。
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第一章 药物含量测定
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(一) 测定方法的建立
根据不同的药物，建立不同的测定方法。
1.原子吸收法
(1)原子吸收法光谱的产生 任何元素的原子都由原子核和核外电子组成，核外电子有不同的能
级，因此，一个原子核可以有不同的能级。能量最低的能级态，称为基 态能级(E0=0)，其余的能级称为激发态能级，而能量最低的激发态称为 第一激发态。
RSDSD10% 0 X
将标准品配成不同的系列浓度，不同时间测定，结果之间有差 异，从而求出日内和日间精密度。
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重复性——短期内相同的实验条件下(实验室、操作者、 仪器型号和试剂批号)对同一样品测定结果间的精密度。
重复性可分为批内精密度(within-run precision)和批 间精密度
(between-run precision)：日内精密度和日间精密度。 重现性——重现性指不同实验条件下(不同实验室、不
正常情况下，原子处于基态，核外电子在各自能量最低的轨道上运动。
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当原子吸收一定的能量时，该原子就会吸收一定 特征波长的光，外层电子由基态跃迁到相应的激发 态，产生原子吸收光谱。但激发态的电子是不稳定 的，大约经过10～8 s以后，激发态的电子将返回基 发态或其他较低能级，并将电子跃迁时所吸收的能 量以光的形式释放出去，而产生原子发射光谱。
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2.比色分析法
用比较溶液的颜色深度来确定被测定物质含量的方法， 称为比色分析法。
光通过有色溶液时，由于溶液中有色物质吸收了一 部分光能，透过光的强度就要减弱。溶液的浓度越高，液 层越厚，对光的吸收就越多，透过的光也就越弱。
如果把浓度为C的有色溶液置入厚度为L的容器中， 一定波长的光通过时，由于溶液吸收了一部分光，透过光 的强度就会减弱。
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色谱分析法有两种： (1)按固定相形态分：柱色谱法、薄层色谱法、
纸色谱法。 (2)按流动相形态分：气相色谱法、液相色谱
法。 具体方法可参阅“仪器分析”的有关教材。
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（二）方法的方法的准确性和稳定性
1.标准曲线的建立 在比色法Biblioteka Baidu，吸光度与溶液浓度之间有线性关
系，不是说在任何浓度下都呈线性，它只有在一定浓 度范围内有线性关系。
同操作者、不同仪器型号和试剂批号)使用某种分析方法对 同一样品各个独立测定值间的精密度(实验室协同研究)。
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对精密度的要求：与样品含量有关 日内精密度：
10g/mL：1 h、5 h、10 h、24的平均值、RSD。 12g/mL：1 h、5 h、10 h、24的平均值、 RSD 。 14g/ mL：1 h、5h、10h、24的平均值、 RSD 。 16g/mL：1h、5h、10h、24h的平均值、 RSD 。 日间精密度： 2g/mL：1d、3d、5d、7d的平均值、 RSD 。 14g mL：1d、3d、5d、7d的平均值、 RSD 。 16g/mL：1d、3d、5d、7d的平均值、 RSD 。 一般应控制在15%以内为宜，最高不超过20%。