半数致死量测定

测定半数致死量：

实验器材：鼠笼，天平，砝码，1ml注射器，伤寒杆菌（细菌浓度1%、1.18%、1.14%、1.68%、2%；苦味酸。

实验方法：

第一步：试验动物选择原则：

1.种属：昆明鼠

2.年龄、体重

3.性别：雌鼠对药物的敏感性稍大于雄鼠。雌雄各半。实验前禁食12小时。

第二步：探索剂量范围。已知MLD为100mg/kg，LD100为200mg/kg

第三步：均衡随机分组。每小组取50只小鼠，称重，标号，随机分为5组，为了避免各组的实验误差，应先将雌雄鼠分开，然后分别随机分到各组，保证每组动物中雌雄小鼠数量相同，体重相近。

第四步：各组剂量计算。用寇氏法计算LD50，各剂量组要求按等比级数排列。经过预实验，得知最大剂量也就是死亡率为100%的剂量为200mg/kg，最小剂量也就是死亡率为0%得剂量为100mg/kg，然后按照下列公式求出各组剂量间的比值，计算出各组剂量。

第五步：给药观察和记录。在各实验组剂量确定以后，即可给药，给药后观察动物的一般情况，并记录动物死亡时的症状和死亡时间，按新药报批要求，一般需观察7天，因为学生实验时间有限，所以我们今天只观察2个小时。2小时后，统计各组死亡率（用小数表示）。

第六步计算方法。经上述实验得出各组死亡率之后，按下列公式计算LD50及其标准误和可信限。

LD50=log-1[Xm–i(∑P–0.5)]

Xm ；I ；∑P；

LD50的可信限=LD50(P+0.95)

=LD50±2.68LD50(P=0.99)

由于整个半数致死量实验比较繁琐，所需时间比较长，所以今天同学们作实验只需从第三步做起，也就是在已知MLD和LD100的情况下，求LD50。做完实验后请同学们思考两道题。

在做实验之前，介绍一下小鼠的捉拿、标记及腹腔注射的方法。

小鼠牙长而尖锐，如果激怒它则容易被咬伤。所以捉拿时动作要轻缓，现用右手拎住小鼠尾巴放于粗糙面上，轻轻向后拉扯，再用左手的拇指及食指抓住其两耳之间及关颈部皮肤，然

后将小鼠腹部上翻，用左手无名指和小指夹住尾巴使其固定。

腹腔注射，左手将鼠固定，并使其头低尾高，右手持注射器将针头穿过腹壁肌肉注入腹腔，有落空感为准，注入药物之前先回抽一下，如感到有负压，没有血液则可给药。

标记用黄色苦味酸涂于毛上标号。将背部分前肢、腰部、后肢的左、中、右共九个区域，从左到右为1~9号，另将面部的左、中、右三个区域分别为10、20、30。

结果记录表

组别剂量(D)

(mg/kg) 动物数(n)

(只)

死亡数(F)

(只)

死亡率%(P)

(F/n)

1

2

3

4

5

6

计算LD50及95％可信限：

LD50=lg-1[X m-I(∑P-0.5)]

式中，X m=最大剂量的对数值；I=相邻两组比值的对数(lgr)；P=各组死亡率；∑P=各组死亡率总和。

LD50的95％平均可信限=LD50±4.5LD50.S X50

其中S X50为LD50的标准误

S X50=I. √∑P(1-P)/(n-1)

其中，n=各组动物数

(1)启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项，再进入半数致死量选项。

(2)一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数据。

(3)单击“计算”按钮计算LD50等参数。

【注意事项】

1.药物称量、配制及给药的准确程度是本实验成功与否的关键。

2.实验过程中给药剂量一定要准确。

3.注意观察中毒症状及其发生时间、死亡时间。

4. 禁食的目的：残留食物影响小鼠体重，影响给药剂量的准确性；残留食物影响胃肠道对药物的吸收作用（主要是经口给药）。