雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定

雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定王志茹1,2，李军2，刘晓梅1，吴红联2，朱德生2

（1.吉林大学公共卫生学院，长春130021；2. 北京大学实验动物中心，北京100871）

【摘要】目的繁殖雄性生殖细胞特异性表达绿色荧光蛋白（GFP）小鼠，为进行小鼠生殖系统毒性研究提供有效的工具。方法将Ddx4-cre转基因雄鼠与Rosa26mT/mG转基因雌鼠交配，产生子代动物，利用分子生物学、组织病理学及活体成像等技术，分别从分子、细胞和组织水平对子代及其亲代小鼠进行表型鉴定。结果PCR结果表明在子代小鼠的睾丸组织中发生了Cre酶介导的特异性基因重组；活体成像可以看到在F1代小鼠的睾丸组织中具有GFP的表达；睾丸冰冻切片及精子荧光观察显示GFP主要表达于次级精母细胞、精子细胞和精子中。结论雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠繁殖成功。

【关键词】睾丸；特异性；基因重组；GFP

Production and phenotype identification of specific expressed green fluorescent protein in male mice germ cells

WANG Zhi-ru1,2，LI Jun2，LIU Xiao-mei1，WU Hong-lian2，ZHU De-sheng2

(1.School of public health，Jilin University，Changchun 130021，China；2. Peking

University Laboratory animal centre，Beijing 100871，China)

【Abstract】Objective The aim of this study is production of organ specific animal model for studying reproductive toxicity in mice. Methods F1 generation was gotten by mating the Ddx4-cre transgenic male mice with the Rosa26mT/mG transgenic female mice. F1 offspring and its parents phenotype was screened by molecular biological, histopathological and in vivo imaging technology. Results At molecular level, specific DNA fragment was only found in testis of F1 offspring ; At the organ level, the expression of green fluorescent protein could only be observed in testis of F1 offspring; Testicular frozen sections and sperm fluorescence observation showed that green fluorescent protein were mainly expressed in the germ cell lineage such as secondary spermatocyte and spermatocyte and spermatozoon. Conclusions The production of the mice with specific germ cell expressed green fluorescent protein by Cre/loxP recombination system were built successfully.

【Key words】Testis;Specificity; Gene recombination;Green fluorescent protein 生殖系统的改变是造成不孕不育的重要原因，如何简易快速的检

[作者简介]王志茹（1988-）女，在读硕士研究生，研究方向：纳米毒理学，Email：843872569@ [通讯作者]朱德生( 1960-) 男，高级工程师，研究方向：转基因动物，Email：deshengz@

测生殖系统的损伤是目前研究的一个热点。在绝大多数物种中，Ddx4基因特异性表达于生殖细胞中[1]，常被用作分子标记研究配子发生和原始生殖细胞的起源、迁移、分化等方面。雄性生殖细胞的DDX4 蛋白表达，从12.5dpc生殖嵴一直持续到减数分裂后的精子细胞[2]。本研究利用生殖系统特异性启动子Ddx4启动的Cre酶，通过Cre/loxP 位点特异性重组系统[3]产生雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠模型，为后续进行雄性小鼠生殖系统发育和毒性研究提供理想的动物模型。

1材料与方法

1.1实验动物

SPF级B6.FVB-Tg(Ddx4-cre)1Dcas/JnjuDdx4-cre小鼠（以下简称为Ddx4-cre小鼠）4只，雌雄各半，雄性为杂合子（T/W），雌性为纯合子（T/T）；SPF级B6.129(Cg)-Gt(ROSA)26Sor tm4(ACTB-tdTomato,-GFP)Luo 小鼠（以下简称Rosa26mT/mG小鼠）4只，雌雄各半，均为纯合子（mut/mut）。小鼠周龄4-8周，均购自南京大学南京生物医药研究院【SCXK（苏）2010-0001】。饲养于北京大学实验动物中心【使用许可证：SYXK（京）2011-0003】，饲养条件符合SPF级实验动物的饲养标准。

Ddx4-cre小鼠在Ddx4启动子调控下在生殖系统中特异性表达Cre酶的转基因小鼠[4]。Rosa26mT/mG小鼠是全身组织器官表达红色荧光蛋白的转基因小鼠，当其与Cre转基因小鼠交配产生的后代将发