DNS法测定还原糖

DNS法测还原糖方法
一原理
DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，540nm处有吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。

二试剂及方法
2.1 试剂
1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液
2. 3,5－二硝基水杨酸
用400mL 蒸馏水溶解6.3g3，5—二硝基水杨酸，逐步加入21g 氢氧化钠，再加入182g 四水合酒石酸钾钠、5.0g 苯酚、5.0g 无水亚硫酸钠，温水浴(不超过48℃)，不断搅拌，直至溶液清澈透明。

用蒸馏水定容至1000mL，保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝，静置5～7 天后使用，贮存期为6 个月。

2.2 葡萄糖标曲的绘制
表1 葡萄糖标曲的绘制方法
试剂
试管
0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
3,5-二硝基水杨酸(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 糖含量（mg）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
混合均匀，沸水浴5min，冷却后加入4mL蒸馏水，混匀，在540nm下测OD值
2.3 发酵液样品测定
将发酵液稀释一定倍数后，取3只比色管标号1,2,3，加入稀释和的发酵液0.5 ml，加入DNS
试剂0.5 ml 混匀，沸水浴5min，冷却后加入4 ml蒸馏水混匀，测OD540
表 2 样品的测定方法
管号
0 1 2 还原糖待测样品 （mL ） 0.0 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 0.5 0.0 0.0 DNS 试剂 （ mL ） 0.5 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 4 4 4 A 540 nm
计算所得还原糖含量 （mg ）
三 结果计算 3.1 标曲
3.2样品的还原糖含量
稀释倍数）
加人样品的体积（）计算得到的还原糖量（）还原糖含量（⨯=ml 5.0mg /g L。