东北野生蓝莓花色苷组分分析及其抗氧化性比较

东北野生蓝莓花色苷组分分析及其抗氧化性比较

郭晓倩1，房子舒2，刘凤娇1，廖小军1，胡小松1，张燕1，陈芳1

（1.中国农业大学食品科学与营养工程学院，国家果蔬加工工程技术研究中心，农业部重点开放实验室，北京100083）（2.中粮营养健康研究院有限公司，北京 102209）

摘要：本文以东北地区的野生蓝莓为原料，比较了三种不同产地野生蓝莓间的基本组分和抗氧化活性。利用高效液相色谱-二极

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抑制胆固醇的吸收，同时有消除眼睛疲劳、改善视力的作用，还具备提高记忆力、抗变异、抗癌、抗过敏、保护胃粘膜等多种功能[3,4]，是一种有极高营养价值的功能性物质。

但迄今为止，有关不同产地野生蓝莓之间花青素类物质含量，以及抗氧化能力差异的报道较为少见。本文对比研究了我国东北地区三个产地三种野生蓝莓的各项理化指标、多酚含量和总花色苷含量，运用高效液相色谱-二极管阵列检测器-质谱（HPLC-DAD-MS）法对三种蓝莓的花色苷组成进行分析，并通过蓝莓果浆对DPPH·清除率、·O2-的清除率以及铁还原能力（FRAP）的测定，对不同地区野生蓝莓间的抗氧化活性进行了比较，旨在比较东北地区不同产地野生蓝莓之间的物种差异性，提高东北地区蓝莓资源的开发利用率，以及为高花青素含量蓝莓品种的挑选及加工方式的选择提供理论依据。

1 仪器与试剂

1.1 实验试剂

邻苯三酚、愈创木酚、没食子酸、Folin-Ciocalteu 试剂等均为分析纯药品，购于北京蓝弋化学试剂公司。V C标品、DPPH、TPTZ等购于sigma公司。色谱级甲醇、乙腈、甲酸购于韩国首尔SK化学药品有限公司。

1.2 实验仪器

868型pH计，美国奥立龙公司；W A Y-2S型阿贝折光仪，上海精密科学仪器有限公司；Waters-2695型高效液相色谱仪，美国Waters公司；Waters2996二极管阵列检测器，美国Waters公司；Quattro Micro三重四级杆串联质谱仪，英国Micromass公司；ASB V enusil C18柱，美国艾杰尔公司；UV-762紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司。

2 材料与方法

2.1 材料及预处理

采用的三种野生蓝莓分别是辽宁丹东地区野生蓝莓、黑龙江大兴安岭地区野生蓝莓和吉林长白山地区野生蓝莓。鲜果采摘后置于-20 ℃冰箱冻藏保存。实验时，将蓝莓冻果从-20 ℃冰箱取出，置于4 ℃冰箱内解冻后打浆备用。

2.2 方法

2.2.1 pH的测定

采用pH计在常温下测定蓝莓浆的pH值，待读数稳定后记下读数。

2.2.2 可溶性固形物（TSS）含量的测定

采用阿贝折光仪，以去离子水作为空白，选取温度校正模式，测定结果的单位为°Brix。

2.2.3 可滴定酸(TA)含量的测定

采用电位滴定法，用自动滴定仪测定蓝莓果实的可滴定酸含量，模式选择pH 8.1。取10 g蓝莓浆，用0.1 mol/L的NaOH进行滴定，记录滴定液体积，以柠檬酸每毫摩尔0.070 g计算。

2.2.4 总酚含量的测定

采用Folin酚法测定总酚的含量，并略作修改[5]。取10 g蓝莓浆，加入60 mL 80%甲醇，混匀，超声提取30 min，在12000 g、4 ℃下离心10 min，收集上清液，并在沉淀中再次加入20 mL 80%甲醇，重复上述操作。将两次收集的上清液定容到100 mL容量瓶，4 ℃下备用。Folin-ciocalteu试剂用超纯水按1:9（V:V）稀释10倍，取0.4 mL提取液与2 mL稀释的Folin- ciocalteu试剂混合，加入1.8 mL 7.5%的Na2CO3溶液，常温下避光保持1 h，测定765 nm处的吸光值。没食子酸标准曲线y=0.0076x+0.1444 (R2 =0.9999)，总酚含量按照以下公式计算：吸光度值A=0.0076×总酚含量+0.1444。

2.2.5 总花色苷含量的测定

测定方法采用pH示差法，并略作修改[6]。样品处理方式同2.2.4。取两个10 mL容量瓶各加入1 mL 花色苷提取液，分别用pH 1.0缓冲液[0.2 mol/L KCl：0.2 mol/L HCl=25：67（V/V）]和pH 4.5缓冲液[1 mol/L NaAc: 1 mol/L HCl:H2O=100:60:90（V/V/V）]定容，在冰箱中静置1小时，分别在510 nm和700 nm下测吸光值。总花色苷含量（Total anthocyanins，TAcy）按下式计算（结果以矢车菊色素-3-葡萄糖苷计）：T Acy（mg/100 g FW）=A×449.2×10/26900

注：A = A pH1.0 -A p H4.5；26900为矢车菊色素3-葡萄糖苷的摩尔消光系数；449.2是矢车菊色素3-葡萄糖苷的摩尔分子质量。

2.2.6 花色苷的鉴定

（1）样品前处理

取10 g蓝莓浆，加入20 mL 0.1% HCL的色谱纯无水甲醇溶液，4 ℃下静置提取2 h，在12000 r/min、4 ℃下离心10 min，四层纱布过滤得花色苷提取液，收集上清液，并在沉淀中再次重复上述操作。将两次收集的上清液定容到100 mL容量瓶。取适量提取液过0.45 μm的有机系微孔滤膜，然后再过0.22 μm微孔滤膜，取1 mL置于样品瓶中待HPLC-DAD-MS检

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测。

（2）色谱条件

应用Waters-DAD系统，色谱柱为V enusil ASB-C18（250 ×4.6 mm, 5 µm），柱温35 ℃，进样量20 µL，流速0.4 mL/min，在520 nm下测定。流动相A为含5%甲酸的水溶液，流动相B为乙腈。采用梯度洗脱，洗脱程序为：流动相B的初始比例为15%，随后在35 min内由15%线性增大到30%，然后回到原

IC

A0

A s

的

直接测定593 nm处的吸光值。工作液由10 mmol/L TPTZ溶液、20 mmol/L FeCl3溶液和0.3 mol/L醋酸缓冲液（pH =3.6）以体积比1:1:10配置而成。样品的铁还原能力用Vc的当量（ug）来表示，单位为ug Vc/g 果浆。

Vc标准曲线如图1：y=0.0002x+0.1475 （R2= 0.9966）。3.2 总酚含量及总花色苷含量

酚类化合物是广泛存在于水果、蔬菜和谷类食物中的植物次生代谢产物，有多种生物活性，尤其在预防心脑血管、癌症以及衰老方面发挥着十分重要的作用[10]。因此，测定果实中的总酚含量有助于对其品质进行评价。结果如图2所示，不同蓝莓间总酚差异显著，从低到高依次为辽宁野生＜黑龙江野生＜吉林野

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