免疫荧光与免疫组化技术
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技术
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
病理技术学的内容
• 细胞通讯与细胞信号传导的分子机制和技术 • 原子力显微镜理论和技术 • 应用动物实验、细胞培养单克隆抗体技术和转基因
及基因剔除技术 • 计算机图像分析，激光共聚焦显微镜以及远程病理
技术 • 显微切割技术 • 临床细胞学诊断技术及应用 • 信息病理学和数字切片技术 • 诊断机器人 • 关于病理技术的规范化、标准化、质量控制和实验
室认证、管理等
一、组织病理学技术 与细胞病理学技术
• 1、组织病理学技术： • 是病理学最重要、最基础、应用最广泛的
技术，是病理学最重要的组成部分之一， 是以研究组织或细胞形态改变为主的各种 技术原理、实验操作、结果判定、适用范 围和优缺点的学科。 • 主要包括常规石蜡制片技术、快速冰冻切 片技术和组织化学特殊染色技术等。
胞或组织切片中核酸进行复性、杂交并对 其实行检测的方法，称为核酸原位杂交。 • 广泛应用于医学生物学研究，如基因定位 、基因缺失、基因易位、特异基因、整合 检测等。
三、分子病理学技术
• 3、以地高辛或生物素标记的探针和酶的呈色反 应进行检测的显色原位杂交技术（CISH）
将基因探针用地高辛或生物素标记，利用过氧 化物酶或碱性磷酸酶的呈色反应在光学显微镜下 检测组织mRNA的表达水平。CISH技术可用于检 测基因扩增，染色体移位以及染色体计数。尤其 在肺癌HER-2基因扩增的检测中得到了广泛应用 ，而且对对其他肿瘤如卵巢癌和乳腺癌等肿瘤的 治疗和预后判断也有重要价值。
四、超微病理学技术
• 目前，电镜诊断技术已广泛应用于现代临 床病理诊断，特别是在传统的临床诊断手 段无法确诊的病例中发挥着重大作用。
• 应用于临床病理诊断中的主要是透射电镜 和扫描电镜，前者注重细胞核内的超微结 构，后者则用于观察组织和细胞的表面形 态。
五、生物芯片技术
• 生物芯片技术是通过缩微技术，根据分子 间特异性地相互作用的原理，将生命科学 领域中不连续的分析过程集成于硅芯片或 玻璃芯片表面的微型生物化学分析系统， 以实现对细胞、蛋白质、基因及其它生物 组分的准确、快速、大信息量的检测。
三、分子病理学技术
• 1、原位多聚酶链式反应技术(PCR) 将在冷冻或石蜡包埋组织切片、细胞涂片 中的核酸片段进行高效扩增，来检测细胞 内单一拷贝或低拷贝的待测核酸序列。主 要应用于病原体检测，内源基因检测，基 因突变、基因重排和染色体易位。
三、分子病理学技术
• 2、原位杂交技术 • 用特定标记的已知顺序核酸作为探针与细
• 按照芯片上固化的生物材料的不同，可以 将生物芯片划分为基因芯片、蛋白质芯片 、细胞芯片和组织芯片。序等。
五、生物芯片技术
• 目前应用比较广泛的是组织芯片技术和基 因芯片技术。
• 组织芯片技术主要用于肿瘤病因学、肿瘤 相关基因的验证、肿瘤分子分型及个性化 治疗、肿瘤早期诊断及预后评估等。
• 基因芯片技术可用于基因表达谱分析、基 因分型、基因突变和基因组的多态性的检 测、新基因的寻找、遗传作图、重测序等 。
三、分子病理学技术
• 4、以荧光素标记的探针进行检测的荧光原 位杂交技术（FISH） FISH是应用荧光素标记的探针与组织细 胞中待测核酸反应形成杂交体，用荧光显 微镜或激光共聚焦显微镜观察信号表达， 广泛应用于淋巴瘤、骨和软组织肿瘤、乳 腺癌、非小细胞肺癌等肿瘤病理诊断和对 临床治疗反应的评估。
六、显微切割术
• 显微切割术是在显微状态或显微镜直视下通过显 微操作系统从冷冻或石蜡包埋组织切片、细胞涂 片上的任一区域内切割下几百个、几十个同类细 胞，或单个细胞甚至目标染色体，再进行有关的 分子生物学方面的研究。
• 自20世纪80年代以来，杂交瘤和单克隆抗 体、分子克隆、核酸探针和分子杂交、基 因组学、转录组学、蛋白组学技术将分子 改变的信息与病理形态学密切结合，提供 不同病理状态下更详细的分子谱，在病理 形态基础上观察疾病过程中分子表达的变 化。由此逐步形成了病理分子学技术，并 广泛用于疾病诊断和分类、靶向药物的筛 选、病原体的检测、遗传学研究等。
一、组织病理学技术 与细胞病理学技术
• 2、细胞病理学技术： • 是以组织学为基础，研究组织碎片、细胞群团、
单个细胞形态和结构以及细胞间比邻关系，并探 讨组织来源的一门科学。
• 从阴道脱落细胞学到非妇科脱落细胞学，再到细 针穿刺细胞学，巴氏理论和技术对恶性肿瘤和癌 前病变的诊断起了重要作用。近年来，液基膜式 薄层细胞学技术和液基离心沉淀式薄层细胞学技 术代替传统的巴氏涂片，使宫颈低度病变和高度 病变的检出率有了显著提高。
• 大体病理解剖和大体标本的固定制作技术 • 细胞和组织标本制备的基础知识、原理和技术 • 电子显微镜的基础知识、原理和技术 • 免疫组织化学和核酸分子杂交等原位分子检测的
理论和技术 • 分子生物学与病理学交叉应用的有关分子病理的
理论和技术 • 生物芯片技术 • 细胞凋亡和细胞增生活性的理论和技术 • 器官移植的组织配型和染色体样本的制备理论和
病理技术学
病理技术学
• 一门伴随研究疾病发生和发展、演进与 形态、代谢功能改变规律而诞生的方法 学。
• 任务：研究如何创立和运用经典的及现 代的生命科学技术和方法，探讨疾病的 病因、机制与病理变化，为认识疾病的 本质和疾病的病理诊断提供技术支撑， 是对病理技术的继承、发展和创新。
病理技术学的内容
二、免疫荧光与免疫组化技术
• 1、免疫荧光技术： • 通过荧光素标记抗体，并借助荧光显微镜
观察荧光的发光物质，主要用于检查、鉴 定、定位和示踪各种抗原或抗体成分。 • 广泛应用于病原微生物检测、肾脏病变、 血液病变、基因蛋白的研究，尤其是在病 原微生物检测和肾脏病变的准确诊断方面 发挥着巨大作用。
二、免疫荧光与免疫组化技术
• 2、免疫组化技术： • 免疫组织化学也称免疫细胞化学，是应用
标记抗体寻找组织细胞中抗原的方法来检 测组织细胞中化学成分的技术。 • 目前，免疫组化染色技术已广泛应用于医 学科研、临床诊断和鉴别诊断、肿瘤的生 物学行为及分型与起源判断、靶向药物筛 选、病原体检测等领域
三、分子病理学技术
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
病理技术学的内容
• 细胞通讯与细胞信号传导的分子机制和技术 • 原子力显微镜理论和技术 • 应用动物实验、细胞培养单克隆抗体技术和转基因
及基因剔除技术 • 计算机图像分析，激光共聚焦显微镜以及远程病理
技术 • 显微切割技术 • 临床细胞学诊断技术及应用 • 信息病理学和数字切片技术 • 诊断机器人 • 关于病理技术的规范化、标准化、质量控制和实验
室认证、管理等
一、组织病理学技术 与细胞病理学技术
• 1、组织病理学技术： • 是病理学最重要、最基础、应用最广泛的
技术，是病理学最重要的组成部分之一， 是以研究组织或细胞形态改变为主的各种 技术原理、实验操作、结果判定、适用范 围和优缺点的学科。 • 主要包括常规石蜡制片技术、快速冰冻切 片技术和组织化学特殊染色技术等。
胞或组织切片中核酸进行复性、杂交并对 其实行检测的方法，称为核酸原位杂交。 • 广泛应用于医学生物学研究，如基因定位 、基因缺失、基因易位、特异基因、整合 检测等。
三、分子病理学技术
• 3、以地高辛或生物素标记的探针和酶的呈色反 应进行检测的显色原位杂交技术（CISH）
将基因探针用地高辛或生物素标记，利用过氧 化物酶或碱性磷酸酶的呈色反应在光学显微镜下 检测组织mRNA的表达水平。CISH技术可用于检 测基因扩增，染色体移位以及染色体计数。尤其 在肺癌HER-2基因扩增的检测中得到了广泛应用 ，而且对对其他肿瘤如卵巢癌和乳腺癌等肿瘤的 治疗和预后判断也有重要价值。
四、超微病理学技术
• 目前，电镜诊断技术已广泛应用于现代临 床病理诊断，特别是在传统的临床诊断手 段无法确诊的病例中发挥着重大作用。
• 应用于临床病理诊断中的主要是透射电镜 和扫描电镜，前者注重细胞核内的超微结 构，后者则用于观察组织和细胞的表面形 态。
五、生物芯片技术
• 生物芯片技术是通过缩微技术，根据分子 间特异性地相互作用的原理，将生命科学 领域中不连续的分析过程集成于硅芯片或 玻璃芯片表面的微型生物化学分析系统， 以实现对细胞、蛋白质、基因及其它生物 组分的准确、快速、大信息量的检测。
三、分子病理学技术
• 1、原位多聚酶链式反应技术(PCR) 将在冷冻或石蜡包埋组织切片、细胞涂片 中的核酸片段进行高效扩增，来检测细胞 内单一拷贝或低拷贝的待测核酸序列。主 要应用于病原体检测，内源基因检测，基 因突变、基因重排和染色体易位。
三、分子病理学技术
• 2、原位杂交技术 • 用特定标记的已知顺序核酸作为探针与细
• 按照芯片上固化的生物材料的不同，可以 将生物芯片划分为基因芯片、蛋白质芯片 、细胞芯片和组织芯片。序等。
五、生物芯片技术
• 目前应用比较广泛的是组织芯片技术和基 因芯片技术。
• 组织芯片技术主要用于肿瘤病因学、肿瘤 相关基因的验证、肿瘤分子分型及个性化 治疗、肿瘤早期诊断及预后评估等。
• 基因芯片技术可用于基因表达谱分析、基 因分型、基因突变和基因组的多态性的检 测、新基因的寻找、遗传作图、重测序等 。
三、分子病理学技术
• 4、以荧光素标记的探针进行检测的荧光原 位杂交技术（FISH） FISH是应用荧光素标记的探针与组织细 胞中待测核酸反应形成杂交体，用荧光显 微镜或激光共聚焦显微镜观察信号表达， 广泛应用于淋巴瘤、骨和软组织肿瘤、乳 腺癌、非小细胞肺癌等肿瘤病理诊断和对 临床治疗反应的评估。
六、显微切割术
• 显微切割术是在显微状态或显微镜直视下通过显 微操作系统从冷冻或石蜡包埋组织切片、细胞涂 片上的任一区域内切割下几百个、几十个同类细 胞，或单个细胞甚至目标染色体，再进行有关的 分子生物学方面的研究。
• 自20世纪80年代以来，杂交瘤和单克隆抗 体、分子克隆、核酸探针和分子杂交、基 因组学、转录组学、蛋白组学技术将分子 改变的信息与病理形态学密切结合，提供 不同病理状态下更详细的分子谱，在病理 形态基础上观察疾病过程中分子表达的变 化。由此逐步形成了病理分子学技术，并 广泛用于疾病诊断和分类、靶向药物的筛 选、病原体的检测、遗传学研究等。
一、组织病理学技术 与细胞病理学技术
• 2、细胞病理学技术： • 是以组织学为基础，研究组织碎片、细胞群团、
单个细胞形态和结构以及细胞间比邻关系，并探 讨组织来源的一门科学。
• 从阴道脱落细胞学到非妇科脱落细胞学，再到细 针穿刺细胞学，巴氏理论和技术对恶性肿瘤和癌 前病变的诊断起了重要作用。近年来，液基膜式 薄层细胞学技术和液基离心沉淀式薄层细胞学技 术代替传统的巴氏涂片，使宫颈低度病变和高度 病变的检出率有了显著提高。
• 大体病理解剖和大体标本的固定制作技术 • 细胞和组织标本制备的基础知识、原理和技术 • 电子显微镜的基础知识、原理和技术 • 免疫组织化学和核酸分子杂交等原位分子检测的
理论和技术 • 分子生物学与病理学交叉应用的有关分子病理的
理论和技术 • 生物芯片技术 • 细胞凋亡和细胞增生活性的理论和技术 • 器官移植的组织配型和染色体样本的制备理论和
病理技术学
病理技术学
• 一门伴随研究疾病发生和发展、演进与 形态、代谢功能改变规律而诞生的方法 学。
• 任务：研究如何创立和运用经典的及现 代的生命科学技术和方法，探讨疾病的 病因、机制与病理变化，为认识疾病的 本质和疾病的病理诊断提供技术支撑， 是对病理技术的继承、发展和创新。
病理技术学的内容
二、免疫荧光与免疫组化技术
• 1、免疫荧光技术： • 通过荧光素标记抗体，并借助荧光显微镜
观察荧光的发光物质，主要用于检查、鉴 定、定位和示踪各种抗原或抗体成分。 • 广泛应用于病原微生物检测、肾脏病变、 血液病变、基因蛋白的研究，尤其是在病 原微生物检测和肾脏病变的准确诊断方面 发挥着巨大作用。
二、免疫荧光与免疫组化技术
• 2、免疫组化技术： • 免疫组织化学也称免疫细胞化学，是应用
标记抗体寻找组织细胞中抗原的方法来检 测组织细胞中化学成分的技术。 • 目前，免疫组化染色技术已广泛应用于医 学科研、临床诊断和鉴别诊断、肿瘤的生 物学行为及分型与起源判断、靶向药物筛 选、病原体检测等领域
三、分子病理学技术