细胞化学染色ppt课件

红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中 幼红细胞可阳性（均匀红色或块状）；某些 红系良性疾病如缺铁贫、巨幼贫等阴性。
◆白细胞系统疾病
ALL：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或 块状）
急粒：少数原粒呈阳性，阳性细颗粒状
急单：可呈阳性，阳性细颗粒状 -
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PAS临床意义
MA 幼红细胞呈阴性反
应
AML-M6 幼红细胞呈阳性反
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细胞化学染色的基本步骤 固定 保持细胞结构及化学成分不变，并使血
膜在染色、冲洗过程中不易脱落损坏
显示 形成稳定的有色沉淀，显示出被检 测的化学物质
复染
既能显示细胞结构又能清楚地看出细 胞化学染色结果
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细胞化学染色的种类
过氧化物酶染色（POX)、苏丹黑染色 （SBB)
过碘酸-雪夫反应（PAS）又称糖原染色 酯酶染色 酸性磷酸酶染色（ACP) 铁染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）
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POX染色的临床应用
◆POX染色是辅助诊断急性白血病细胞 类型首选、最重要的细胞化学染色， 主要用于急性白血病的鉴别诊断。
◆ 急性粒细胞白血病时，其原、幼细 胞呈阳性反应，以APL 反应最强;急性 单核细胞白血病时，原幼细胞呈弱阳 性反应
◆ ALL时呈阴性反应
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过氧化物酶染色( peroxidase，POX )
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FAB
ALL（急性淋巴细胞白血病）L1、L2、L3 AML（急性髓细胞白血病）
M0 急性粒细胞白血病（微分化型） M1 急性粒细胞白血病（未成熟型） M2 急性粒细胞白血病（部分成熟型） M3 急性早幼粒细胞白血病 M4 急性粒－单核细胞白血病 M5 急性单核细胞白血病 M6 急性红白血病 M7 急性巨核细胞白血病
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过氧化物酶染色
Peroxidase stain, POX
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染色原理（四甲基联苯胺法）
H2O2 溶酶体颗粒中的ＰＯＸ H2O＋O2 四甲基联苯胺 O2 联苯胺蓝
联苯胺蓝＋亚硝基铁氰化钠 O2 蓝色物质
（沉淀）
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正常血细胞的染色反应
粒细胞系统 原粒（可为阴性） 分叶（阳性程
度逐渐增强） 嗜酸阳性最强 嗜碱阴性
◆临床评价
POX染色特异性高于SBB染色
SBB染色敏感性高于POX染色
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过碘酸-雪夫反应(糖原染色） Periodic acid-Schiff reaction, PAS
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染色原理（PAS）
乙二醇基（多糖类物质中） 过碘酸
双醛基＋无色品红
紫红色化合物
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正常血细胞的染色反应
粒细胞系统
红细胞
铁粒红细胞--含铁颗粒的红细胞
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细胞外铁的观察
低倍镜观察骨髓小粒中的铁，阳性结果呈弥散性、颗 粒状、小珠状或块状蓝色。
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细胞内铁的观察
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环形铁粒幼细胞
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参考范围：
细胞外铁： （+）～（++）
细胞内铁：铁粒幼红细胞12% ～ 44%，以Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型，无 环形铁粒幼红细胞及铁粒红细胞。
用途：鉴别急性淋巴系与非淋巴系白血病 结果：粒系(+)；单核系(±)； 淋巴系(–)
原粒
早幼 单核
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中幼 晚幼 淋巴
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苏丹黑染色
Sudan black, SBB
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苏丹黑染色
◆原理：SBB能溶解于细胞内的含脂结构， 使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深 黑色。
◆正常细胞的染色反应 同POX染色。
◆单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+） ◆仅单核细胞的阳性可被氟化钠抑制(NaF
抑制率>50%)。
NaF抑制率=抑制前的阳性率/积分-抑制后的 抑制前的阳性率/积分
×100%
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α-NAE对诊断急性白血病的作用
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酸性磷酸酶染色
Acid phosphatase, ACP
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ACP染色的临床意义
原粒（可为阴性） 分叶（阳性
程度逐渐增强）
嗜酸胞质呈红色，颗粒不着色
嗜碱反之
红细胞系统
阴性
单核细胞系统 原单（可为阴性），
其他阳性
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正常血细胞的染色反应
淋巴细胞系统 大多数阴性，少数阳性。
巨核细胞系统 巨核细胞和血小板阳性，阳性反应
的程度随细胞的发育成熟而增强。
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临床意义
◆红细胞系统疾病
单核细胞系统 阴性或弱阳性（颗粒少而 细） 其他血细胞 阴性
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临床意义
1.ALL：原始细胞的POX阳性＜3% 2.AML：原始细胞的阳性≥3%
在多数的M1、绝大部分M2和M3中，原始细胞的阳性率 大于85%，M3呈强阳性； M4和M5时，原单有时可呈弱阳性，但绝大多数的原单 是POX阴性。 M6，原粒和幼稚粒细胞是POX阳性，幼红细胞是POX阴 性。 M7，血小板POX的活性只能在超微结构上证实。
细胞化学染色
Cytochemical stain
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概念
细胞化学染色是以细胞形态学 为基础，结合运用化学反应的原理 对血细胞内的各种化学物质（糖类、 蛋白质、脂类、酶类、铁、核酸等） 作定性、定位、半定量分析的方法。
细胞原位的化学反应
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临床应用
辅助判断急性白血病的细胞类型
辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别 诊断（Fe、NAP等）
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铁染色
Ferric stain
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染色原理（Fe染色）
铁+亚铁氰化钾 酸性环境
亚铁氰化铁（蓝色）
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正常血细胞的染色反应
◆正常人骨髓中的铁主要存在于骨髓小 粒及幼红细胞中，分为细胞外铁和细胞 内铁。
◆细胞外铁：骨髓小粒的巨噬细胞中 ◆细胞内铁: 中幼红细胞、晚幼红细胞
及红细胞中
铁粒幼红细胞--含铁颗粒的中、晚幼
应
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A-LL
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AML-M626
AML-M6 PAS(+)
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AML-M5
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M5 PAS(+) 29
AML-M7
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M7 PAS(3+1 )
PAS染色的应用
◆鉴别淋巴系统增生的性质：
凡恶性增生时PAS反应多呈强阳性反应， 见于急、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤等。
◆鉴别红系增生的性质：
凡恶性增生者， 如红血病、红白血病 其原、幼红细胞多 呈强阳性反应；增生 性贫血、巨幼贫， PAS多为阴性。
◆有助于巨核细胞白血病的诊断
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酯酶染色
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Biblioteka Baidu34
α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)
原理
α-醋酸萘酚 PH中性
α-醋酸萘酚酯酶
α-萘酚+重氮盐(坚牢蓝B) (黑色或灰黑色)
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正常血细胞的染色反应