急性眼刺激试验

急性毒性试验
动物急性毒性试验研究动物一次或24小时内多次给予受试物后，一定时间内所产生的毒性反应。

拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验。

要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。

通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。

急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度），观察急性中毒表现，经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等，急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段，对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。

急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息。

急性眼睛刺激性／眼睛腐蚀性试验（巴豆油或甲醛）
定义:
眼睛刺激性：指眼球表面接触受试样品后产生的可逆性炎性变化。

眼睛腐蚀性：指眼球表面接触受试样品后引起的不可逆性组织损伤
试验基本原则：
1 受试样品以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照；
2 在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试样品对眼睛的刺激作用。

观察时间应能足以评价刺激效应的可逆性和不可逆性。

观察时间最少72h，但一般不超过21d；
3 当动物出现严重和持久的痛苦迹象时，以适当的方式将动物处死；
4 强酸或强碱物质如pH≤2或pH≥11.5，由于其可预见的腐蚀特性，不必做本试验；
5 已在皮肤试验中证实具有腐蚀或严重刺激毒性的物质不必进行眼刺激试验，可以推测该物质对眼睛将会引起相似的严重结果；
6 在充分并公认的体外试验结果中确定可能产生刺激性或腐蚀性的物质不必进行体内试验。

目的：检测外来化合物对实验动物眼和粘膜得原发性刺激和腐蚀作用的急性试验，为人类眼和粘膜接触该受试物的潜在危害提供资料。

实验动物：首选成年白色家兔（如果使用其它的哺乳动物做试验，试验者应提供选择的依据【应选择与人类皮肤、粘膜反应比较相近的动物，常用的动物有家兔、豚鼠。

动物种属的选择应依据要观察的指标和模型的合理性。

通常一个试验类型选择一种动物进行评价。

】），体重2～3kg，至少3只（如果受试样品的显著效应是可预见的，可以考虑用一只动物。

如果用一只动物试验得出的结果提示受试样品有严重的刺激性和腐蚀性，则不必进行进一步的试验。

如果结果相反，则至少需要3只家兔。

有时，在增加动物的进一步试验中应该适当的阐明可疑反应。

）。

试验前动物要在动物实验室环境中至少适应3d时间。

试验前24h，要对实验动物的两只眼睛进行常规检查。

有眼睛刺激症状、角膜缺陷或结膜损伤的动物不能用于试验。

受试药物：对于液态受试样品，一般不需稀释，可直接使用原液，染毒量为0.5ml。

若受试样品为固态或颗粒状，应将其研磨成细粉状，过200目筛，染毒量应为100mg。

气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。

对挥发性物质，剂量可以通过使用前后称量容器质量进行估计。

操作程序：
（1）固定兔子，轻轻拉开兔子右眼眼睛的下眼睑，给予受试样品0.5ml(100mg)滴入(或放入)结膜囊中，使上、下眼帘被动闭合30s，以防止受试样品丢失，未处理的另一侧眼睛作为自身对照或滴入溶媒。

（2）（正常操作：滴入受试样品24h内不冲洗眼睛，如果认为必要，在24h时可进行冲洗。

如果受试样品有明显的刺激征象，另选3只动物进行冲洗试验。

在滴入受试样品30s 后，用生理盐水冲洗5min，水的流量和流速都不应导致眼损伤。

）滴入30s后用生理盐水冲洗。

在滴入受试样品后的第10min、0.5h、1h、1.5h（正常实验方法：1h, 24h, 48h，72h和4d,7d）对眼睛进行检查，如果72h时未出现刺激反应，可终止试验。

如果发现累及角膜或有其它眼刺激作用，7d内不恢复者，为确定该损害的可逆性或不可逆性需延长观察时间，一般不超过21d。

除了对角膜、虹膜、结膜进行观察外，其它损害效应都应记录并报告。

在24h观察和记录结束后，可使用2% 荧光素钠溶液或裂隙灯、放大镜检查角膜及虹膜变化。

在每次检查中均应按表1记录眼的刺激反应，并按表2进行眼刺激强度评价。

评价规定：
按表2-13对家兔眼角膜、虹膜和结膜的急性刺激反应进行评分，并分别计算每只动物在三个不同观察时间（本次试验：0.5h、1h、1.5h）（正常实验方法：24h、48h和72h）角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四方面的“平均评分”（本次试验：即每只动物的0.5h、1h、1.5h评分之和除以观察数3）（正常实验方法：即每只动物的24h、48h和72h评分之和除以观察数3）。

分别以动物眼角膜、虹膜和结膜充血、水肿的平均评分和恢复时间进行，按表2-14、表2-15眼刺激反应分级标准判定受试物对眼睛的刺激强度
鉴定报告：
除一般鉴定报告的内容外，还应包括以下方面：
1 表格记录每只动物每个时间点（本次试验：10min、0.5h、1h、1.5h）（正常实验方法：如1h, 24h, 48h，72h和4d,7d）的刺激反应；
2 具体描述除眼部以外的其它作用；
3 刺激／腐蚀程度和性质的描述；
4 描述在各观察时点积分时的检查方法（如裂隙灯、生物显微镜、荧光素染色）；
5 结论
试验结果的解释：
急性眼刺激试验结果从动物外推到人的可靠性很有限。

白色家兔在大多数情况下对有刺激性或腐蚀性的物质较人类敏感。

若用其它品系动物进行试验时也得到类似结果，则会增加从动物外推到人的可靠性。

表眼刺激反应评分标准
观察项目刺激反应判断符号分值
角膜浑浊（以最致密部位为准）无浑浊0 散在或弥漫浑浊、虹膜清晰可见+ 1 半透明区易分辨、虹膜模糊不清++ 2 出现灰色透明区、虹膜细节不清、瞳孔大小勉强看清+++ 3 角膜不透明、由于浑浊、虹膜无法辨认++++ 4
虹膜正常0 褶皱明显加深、充血、肿胀、角膜周围轻度充血、瞳
孔对光仍有反应
+ 1 出血、肉眼可见坏死、对光无反应（或出现其中一种
反应）
++ 2
结膜充血（指睑结膜、球结膜部位）血管正常0 血管充血呈鲜红色+ 1 血管充血呈深红色、血管不易分辨++ 2 弥漫性充血呈紫红色+++ 3
水肿无水肿0 轻微水肿（包括瞬膜）+ 1 明显水肿、伴有部分眼睑外翻++ 2 水肿至眼睑近半闭合+++ 3 水肿至眼睑超半闭合++++ 4
分泌物无分泌物0 少量分泌物+ 1 分泌物使眼睑或睫毛潮湿或黏着++ 2 分泌物使整个眼区潮湿或黏着+++ 3
眼刺激刺激性评价标准:
分值为0~3属于无刺激性;分值为4~8属于轻度刺激性;分值为9~12属于中度刺激性;分值为13~16属于强度刺激性。