试验八环境因素对微生物的影响

实验八环境因素对微生物的影响

一、实验目的

1 了解常用化学消毒剂、紫外线及温度对微生物的作用

2 观察各因素对微生物生长抑制的强弱

二、实验原理

1 化学因素

环境当中很多化学因素都可以影响微生物的生长。

①酸类（PH值）

H+影响菌体细胞质膜上电荷性质，微生物吸收物质变化，影响代谢，高浓度H+或引起菌体表而蛋白质和核酸水解以及影响酶和活性；

②碱类：引起蛋白质、核酸水解，破坏酶的活性；

③重金属盐类：引起蛋白质失活；或与代谢产物鳌合作用使其变为无效化合物；

④氧化剂：氧化蛋白质活性基团；

⑤有机化合物：对微生物有杀菌作用的有机化合物种类很多，其中酚、醇、醛等能使蛋白质变性，是常用的杀菌剂。

2 物理因素

紫外线：作用于生物体DNA，紫外线照射后受损的细胞，如果立即暴露在可见光下，则有一部分仍可恢复正常活力；

温度：通过影响蛋白质、核酸等生物大分子的结构与功能以及细胞结构入细胞膜的流动性及完整性来影响微生物的生长、繁殖和新陈代谢。微生物群体生长、繁殖最快的温度为其最适生长温度。

三、实验材料

1、菌种大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌

2、培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基

3、溶液及试剂 2.5%碘酒，5%石炭酸，75%乙醇，5%甲醛，无菌生理盐水

4、器材无菌培养皿，无菌滤纸片，无菌镊子，黑布，试管，吸管，三角涂棒

2人/组：

6只无菌平皿、4只1ml无菌吸管、2只三角玻棒、滤纸圆片10片；

1个大台面公用：

菌种：金黄色葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、酵母菌菌液；

培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯琼脂斜面培养基；

器材：2.5%碘酒，5%石炭酸，75%乙醇，5%甲醛，无菌生理盐水，镊子，黑布；

四、实验步骤

（1）化学因素

1、将已经灭菌并冷却到50 ℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿中，水平放置待凝固，做标记；

2、用无菌吸管分别吸取0.２ml培养18 h的金黄色葡萄球菌菌液（1皿）和大肠杆菌菌液（1皿）加入上述平板中，用无菌三角涂棒涂布均匀（2人/组，一人做一种菌液）；

3、将已经涂布好的平板底皿划分为4等份，每一等份内标明一种消毒剂(2.5%碘酒，5%石炭酸，75%乙醇，5%甲醛)的名称；

4、用无菌镊子将已灭菌的小圆滤纸片分别浸入装有各种消毒剂中浸湿，在皿中间放入浸过无菌生理盐水的小圆滤纸片对照；

5、将上述贴好滤纸片的含菌平皿倒置放于37℃条件下培养24 h后观察并用直尺测量抑菌圈的大小。（见图1）

（二）紫外线杀菌实验

1、将已经灭菌并冷却到50 ℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿中，倒2只平皿，水平放置待凝固，做标记；

2、用无菌吸管分别吸取0.２ml培养大肠杆菌菌液加入上述2只平皿中，用无菌三角涂棒涂布均匀涂布大肠杆菌菌液；

3、将其中一只平皿盖子打开，至于超净工作台紫外灯下照射10 min，合上盖子，另一只平皿对照（不照射），用黑布包裹在一起，倒置37 ℃培养，24 h后观察并记录实验结果。（三）温度实验

1、将已经灭菌并冷却到50 ℃左右的马铃薯琼脂斜面培养基倒入无菌培养皿中，倒2只平皿，水平放置待凝固，做标记；

2、用无菌吸管分别吸取0.２ml培养酵母菌菌液加入上述2只平皿中，用无菌三角涂棒涂布均匀涂布酵母菌菌液,做标记；

3、分别放在28℃和50℃条件下倒置培养，24h后观察并记录实验结果。

五、实验任务（2人/组）：

1 化学因素实验：2只分别接有金黄色葡萄球菌菌液和大肠杆菌菌液平皿，每皿放入4片浸入过不同的消毒剂的滤纸圆片（放在皿的四周）和1片浸入无菌生理盐水的滤纸圆片（放在皿的中央），24h观察测量；

2 紫外线杀菌实验：2只接有大肠杆菌菌液的平皿，一只经过紫外处理，另一只对照，后用黑布一起包裹，24 h观察记录；

3 温度实验：2只接有酵母菌菌液的平皿，24h观察记录。

课后及时观察并记录实验结果，分析结果。

六、实验报告

1、结果

（1）列表比较四种化学消毒剂对两种细菌的杀（抑）菌作用。（“－”表示不生长，“＋”表示生长较差，“＋＋”生长一般，“＋＋＋”表示生长良好）

（2）绘图表示并说明青霉素和氨苄青霉素对三种菌的抑菌效能，解释其原理。

2、思考题

（1）影响抑（杀）菌圈大小的因素有哪些？抑（杀）菌圈大小是否准确地反映出化学消毒剂地抑菌作用还是杀菌作用？

（2）在紫外线实验中为什么要用黑布包裹培养？

（3）如果抑菌带内隔一段时间后又长出少数菌落，你如何解释这种现象。