实验电子显微镜技术.pptx
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这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。
A等速度沉降，B等密度沉降
密度梯度离心
速度沉降（velocity sedimentation）主要用于分离密 度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种沉降方法所采 用的介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物 颗粒的最小密度。生物颗粒（细胞或细胞器）在十分平 缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉 降而达到分离。
2.荧光显微镜下，选用蓝色激发滤光片，叶绿 体发出火红色荧光。
• 9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。20. 9.1820.9.18Friday, September 18, 2020
• 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。13:49:2113:49:2113:499/18/2020 1:49:21 PM
4.将上清液在3 000r/min下离心5min。弃去上清，沉 淀即为叶绿体。
5.将沉淀用0.35M NaCl 溶液悬浮，取一滴叶绿体悬 液滴于载片上，加盖片观察：
①在普通光镜下观察；②在荧光显微镜下观察。
叶绿体的分离
实验结果
1.普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄型， 在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的 绿色颗粒，即基粒。
差速离心 （differential centrifugation）
在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心， 用于分离不同大小的细胞和细胞器。
速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀
差速离心
在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线 粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、 最后为核蛋白体。
由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且 某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中， 一般重复2～3次效果会好一些。
差速离心只用于分离密度和大小悬殊的细胞，更 多用于分离细胞器。对于精细的分离，则是密度 梯度离心效果更好。
密度梯度离心
（density gradient centrifugation）
用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度 梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重 力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
细胞器的分离
河北大学细胞生物学实验室
细胞器的分离
细胞由细胞膜、细胞核和细胞质组成，细 胞质中含有若干细胞器和细胞骨架等，这些也 称作亚细胞组分。对于细胞的结构和功能的研 究，是细胞生物学的基本课题，其重要的研究 手段之一是分离纯的亚细胞组分，观察它们的 结构或进行生化分析。分离亚细胞组分的方法 主要有差速离心和密度梯度离心。
• 17、一个人如果不到最高峰，他就没有片刻的安宁，他也就不会感到生命的恬静和光荣。下午1时49分21秒下午1时49分13:49:2120.9.18
谢谢观看
• 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。20.9.1813:49:2113:49Sep-2018-Sep-20
• 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。13:49:2113:49:2113:49Friday, September 18, 2020
• 13、志不立，天下无可成之事。20.9.1820.9.1813:49:2113:49:21September 18, 2020
叶绿体的分离
实验方法
1.选取新鲜的嫩菠菜叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗 脉，撕成小碎块，称3g放于玻璃匀浆器中，加入 10ml 0.35M NaCl 溶液，匀浆3～5min。
2.匀浆液用4层纱布过滤于50ml烧杯中。
3.将滤液平分到2个离心管中，天平配平，1 000r/min 下离心2min。弃去沉淀。
。2020年9月18日星期五下午1时49分21秒13:49:2120.9.18
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• •
T H E E N D 15、会当凌绝顶，一览众山小。2020年9月下午1时49分20.9.1813:49September 18, 2020
16、如果一个人不知道他要驶向哪头，那么任何风都不是顺风。2020年9月18日星期五1时49分21秒13:49:2118 September 2020
等密度沉降（isopycnic sedimentation）适用于分离 密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经 足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度 相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密 度的细胞或细胞器分离。介质的最高密度应大于被分离 组分的最大密度，而且介质的梯度要求较高的陡度，不 能太平缓。这种方法适于分离细胞器，而不太适于分离 和纯化细胞。
• 14、Thank you very much for taking me with you on that splendid outing to London. It was the first time that I had seen the Tower or any of the other famous sights. If I'd gone alone, I couldn't have seen nearly as much, because I wouldn't have known my way about.
A等速度沉降，B等密度沉降
密度梯度离心
速度沉降（velocity sedimentation）主要用于分离密 度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种沉降方法所采 用的介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物 颗粒的最小密度。生物颗粒（细胞或细胞器）在十分平 缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉 降而达到分离。
2.荧光显微镜下，选用蓝色激发滤光片，叶绿 体发出火红色荧光。
• 9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。20. 9.1820.9.18Friday, September 18, 2020
• 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。13:49:2113:49:2113:499/18/2020 1:49:21 PM
4.将上清液在3 000r/min下离心5min。弃去上清，沉 淀即为叶绿体。
5.将沉淀用0.35M NaCl 溶液悬浮，取一滴叶绿体悬 液滴于载片上，加盖片观察：
①在普通光镜下观察；②在荧光显微镜下观察。
叶绿体的分离
实验结果
1.普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄型， 在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的 绿色颗粒，即基粒。
差速离心 （differential centrifugation）
在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心， 用于分离不同大小的细胞和细胞器。
速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀
差速离心
在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线 粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、 最后为核蛋白体。
由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且 某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中， 一般重复2～3次效果会好一些。
差速离心只用于分离密度和大小悬殊的细胞，更 多用于分离细胞器。对于精细的分离，则是密度 梯度离心效果更好。
密度梯度离心
（density gradient centrifugation）
用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度 梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重 力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
细胞器的分离
河北大学细胞生物学实验室
细胞器的分离
细胞由细胞膜、细胞核和细胞质组成，细 胞质中含有若干细胞器和细胞骨架等，这些也 称作亚细胞组分。对于细胞的结构和功能的研 究，是细胞生物学的基本课题，其重要的研究 手段之一是分离纯的亚细胞组分，观察它们的 结构或进行生化分析。分离亚细胞组分的方法 主要有差速离心和密度梯度离心。
• 17、一个人如果不到最高峰，他就没有片刻的安宁，他也就不会感到生命的恬静和光荣。下午1时49分21秒下午1时49分13:49:2120.9.18
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• 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。20.9.1813:49:2113:49Sep-2018-Sep-20
• 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。13:49:2113:49:2113:49Friday, September 18, 2020
• 13、志不立，天下无可成之事。20.9.1820.9.1813:49:2113:49:21September 18, 2020
叶绿体的分离
实验方法
1.选取新鲜的嫩菠菜叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗 脉，撕成小碎块，称3g放于玻璃匀浆器中，加入 10ml 0.35M NaCl 溶液，匀浆3～5min。
2.匀浆液用4层纱布过滤于50ml烧杯中。
3.将滤液平分到2个离心管中，天平配平，1 000r/min 下离心2min。弃去沉淀。
。2020年9月18日星期五下午1时49分21秒13:49:2120.9.18
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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16、如果一个人不知道他要驶向哪头，那么任何风都不是顺风。2020年9月18日星期五1时49分21秒13:49:2118 September 2020
等密度沉降（isopycnic sedimentation）适用于分离 密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经 足够大离心力和足够长时间则沉降或漂浮到与自身密度 相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密 度的细胞或细胞器分离。介质的最高密度应大于被分离 组分的最大密度，而且介质的梯度要求较高的陡度，不 能太平缓。这种方法适于分离细胞器，而不太适于分离 和纯化细胞。
• 14、Thank you very much for taking me with you on that splendid outing to London. It was the first time that I had seen the Tower or any of the other famous sights. If I'd gone alone, I couldn't have seen nearly as much, because I wouldn't have known my way about.