原代细胞生长情况及形态特征观察.

1 2 结果

2.1 原代细胞生长情况及形态特征观察

刚分离：细胞呈圆形，折光性强。

接种24~36 h 后：几乎所有的细胞都沉积于瓶底，显微镜下可见少量红细胞悬浮在培养液中，轻晃培养瓶大部分细胞随培养液晃动，仅少部分细胞贴壁，呈圆形。

静置培养4 d 后：换液后镜下可见稀疏散在分布的贴壁细胞生长，呈大而扁平的梭形，见图1。

静置培养9 d 后：贴壁细胞迅速增殖，形态渐渐均一，为长梭形，放射状排列，见较多的分裂相，见图2。

多次换液后：悬浮细胞随换液次数的增多逐渐被除去，约14 d 融合达90%以上，细胞呈单一的长梭形，漩涡状排列。

2.2 传代细胞生长情况及形态特征观察

传代后的细胞约1 h 开始贴壁，三四个小时后贴壁基本完成。

贴壁细胞初期伸出伪足呈梭形、三角形或大多角形。

以后细胞形态逐渐趋于一致，以梭形为主，胞体饱满，见图3。

Figure 1 Adhered cells were big, flat and spindle-shaped after 4

days of culture (×200)

图1 培养4 d 换液后贴壁细胞呈大而扁的长梭形 (×200） Figure 2 Cells were uniform, spindle and radial after culture for 9

days （×100） 图2 培养9 d 细胞形态均一，长梭形，放射状排列（×100） Figure 3 Passage cells were spindle and fat-storing （×200） 图3 传代细胞以梭形为主，胞体饱满（×200）

传代后三四天生长活跃，增殖迅速，第5天即进入细胞增殖稳定期，约7 d铺满培养瓶底，细胞为单一的梭形，排列更加有序，见图4。

Figure 4 Passage cells were uniformly spindle-shaped, and

arranged in order after culture for 7 days（×100）

图4 传代细胞培养7 d呈单一的梭形，排列更加有序（×

100）

2.3 骨髓间充质干细胞的鉴定免疫组织化学染色结果显示，所培养的细胞CD44呈阳性表达，而CD34呈阴性，证实所培养细胞为骨髓间充质干细胞，见图5。

Figure 5 Passage cells were positive for CD44

(Immunohistochemistry，×400)

图5 传代细胞CD44呈阳性表达（免疫组织化学染色，

×400）

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